(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111387958.7 (22)申请日 2021.11.22 (71)申请人 山东大学 地址 250014 山东省济南市历下区文化西 路44号 (72)发明人 刘招舰　王子翔　秦君超　赵玲　 张锡宇　 (74)专利代理 机构 济南圣达知识产权代理有限 公司 372 21 代理人 李筝 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) G01N 33/574(2006.01) A61K 45/00(2006.01) A61K 31/7088(2006.01)A61P 35/00(2006.01) A61P 35/04(2006.01) (54)发明名称 BUD31作为卵巢癌预防、 诊断或预后标志物 的应用 (57)摘要 本发明涉及BUD31作为卵巢癌预防、 诊断或 预后标志物的应用。 本发明研究证实： BUD31在高 级别浆液性卵巢癌患者中高表达， 且通过功能试 验明确BUD31抑制卵巢癌细胞的凋亡， 并促进其 增殖和侵袭迁移， 体内实验证明BUD31高表达可 促进肿瘤生长。 本发明研究结果表明BUD31是一 种参与卵巢癌发生发展的剪接因子， 可作为高级 别浆液性卵巢癌诊断的生物标记物和治疗靶点， 具有良好的实际应用价值。 进一步的， 本发明还 设计了针对BUD31的siRNA， 经证实具有良好的抑 制肿瘤发展效果， 有望应用于抗高级别浆液性卵 巢癌药物的开发。 权利要求书1页 说明书9页 序列表1页 附图5页 CN 113913523 A 2022.01.11 CN 113913523 A 1.BUD31作为卵巢癌预防、 诊断或预后标志 物的应用。 2.如权利 要求1所述BUD31作 为卵巢癌预防、 诊断或预后标志物的应用， 其特征在于， 所 述应用方式包括但不限于开发BUD31抑制效果的活性成分用于治疗卵巢癌， 或通过检测 BUD31的表达含量辅助对患者的卵巢癌发展状况进行判断。 3.如权利 要求1所述BUD31作 为卵巢癌预防、 诊断或预后标志物的应用， 其特征在于， 所 述卵巢癌为上皮性肿瘤； 进一步的， 为一种浆液性肿瘤； 更进一步的， 为高级别浆液性卵巢 癌。 4.一种高级别浆液性卵巢癌的预后判断试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒中包括用于 检测待测样本中BUD31表达含量的试剂。 5.如权利要求4所述高级别浆液性卵 巢癌的预后判断试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒 的检测样 本为包括但 不限于血清、 血浆、 全 血、 分泌物、 棉拭子、 脓液、 体液、 组织、 器官、 石蜡 切片中的一种或几种。 6.如权利要求4所述高级别浆液性卵 巢癌的预后判断试剂 盒， 其特征在于， 所述试剂 盒 基于定量PCR方法检测待测样本中BUD31的含量， 所述试剂盒至少包括一对引物， 所述引物 序列如下： BUD31前引物： 5 ’ ‑CATTCAGACACG GGACACCA‑3’； BUD31后引物： 5 ’ ‑ATGATGCG GCCCACTTCC‑3’。 7.BUD31抑制剂在制备抗卵巢癌产品中的应用； 优选的， 所述 抗卵巢癌产品为包括但不限于药物、 保健品或模型 药剂中的应用。 8.如权利要求7所述BUD31抑制剂在制备抗卵巢癌产品中的应用， 其特征在于， 所述 BUD31抑制剂作为模型药剂的应用， 所述模型药剂为能够抑制BUD31表达和/或活性降低的 物质， 可发挥如下(1) ‑(3)至少一种应用： (1)抑制卵巢癌细胞的增殖， 或制备用于抑制卵巢癌细胞增殖的模型 药剂； (2)抑制卵巢癌细胞的侵 袭迁移， 或者制备用于抑制卵巢癌细胞侵 袭迁移的模型 药剂； (3)促进卵巢癌细胞的凋亡， 或者制备用于促进卵巢癌细胞凋亡的模型 药剂； 或， 所述药物为包括但不 限于实体小分子化合物、 天然药物提取物或核酸成分中的一 种； 所述核酸 成分包括下调基因表达的DNA或RNA， 或基于RNAi途径发挥基因抑制作用的RNA 物质， 如miRNA、 siRNA或shRNA。 9.SEQ ID NO:3所示序列的siRNA在制备抗高级别浆液 型卵巢癌药物中的应用。 10.如权利要求9所示序列的siRNA在制备抗高级别浆液型卵巢癌药物中的应用， 其特 征在于， 所述siRNA还包括对上述核酸链进行修饰后的产物或siRNA的制剂形式； 所述修饰 包括siRNA的盐形式， 还 包括siRNA的融合肽形式； 或， 所述药物为包括但不限于 固体口服制 剂、 液体口服制剂 或注射剂中的一种； 进一步 的， 所述注射剂为可注射 埋植剂、 乳剂、 脂质体、 微囊剂、 微球剂或纳米粒制剂。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113913523 A 2BUD31作为卵巢癌预防、 诊断或预后标志物的应用 技术领域 [0001]本发明属于高级别浆液性卵巢癌标志物技术领域， 具体涉及BUD31作为卵巢癌预 防、 诊断或预后标志 物的应用。 背景技术 [0002]公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解， 而不必然 被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技 术。 [0003]上皮性卵巢癌是最常见的卵巢恶性肿瘤， 又分为不 同的组织学类型， 其中高级别 浆液性卵巢癌(High ‑grade serous ovarian carcinoma， HGSOC)是最主要的亚型， 缺乏前 驱病变、 恶性程度高、 侵袭性强， 五年生存率只有30％左右(Vaughan,Coward  et al.2011)。 目前人们对卵巢癌起源、 复发和耐药的分子机制认识不清(Bell,Berchuck  et al.2011, Jiang,Li  et al.2019)。 因此， 深入探究HGSOC发生发展的生物学机制， 鉴定早期标志物和 治疗靶点， 将为指导临床诊断， 探索新的精准治疗手段提供重要依据。 [0004]选择性剪接的异常与遗传病及肿瘤等疾病密切相关。 研究表明肿瘤组织中剪接事 件数目比正常组织多30％以上(Kahles,Lehmann  et al.2018)， 肿瘤细胞中的剪接重编 程 可以促进肿瘤 恶性转化、 肿瘤增殖、 侵袭转移及耐药等恶性行为(Inoue,Chew  et al.2019, Zhou,Wang  et al.2019)。 而这些异常剪接受到包括剪接因子在内的各种元件的精密调控。 高通量测序发现， 卵巢癌中存在大量的剪接异常， 且剪接体相关通路高度富集。 发 明人分析 了134个核心剪接因子在卵巢癌中的表达， 发现其中有20个剪接因子高表达。 BUD31(BUD31   homolog,G10)是卵巢癌中高表达的20个核心剪接因子中的一个， 其编码基因在酵母、 线虫、 果蝇和人类中都非常保守。 在酵母中， Bud31缺失导致出芽受阻、 生长缓慢、 形态异常 (Masciadri,Areces  et al.2004)； BUD31与SF3B1、 U2AF1、 PRP8等剪接因子结合， 参与剪接 体第一和 第二步的催 化反应， 在催化剪接体组装、 稳定蛋白 ‑前体mRNA复合物关系等过程中 发挥关键作用； 此外， 有报道称BUD31在RNA剪接早期与U2、 U5、 U6小核糖核蛋白及NTC(Prp19   complex)紧密结合， 催化前B复合物的活化(Sah a,Khandelia et al.2012)； 最近的冷冻电 镜结果表明， BUD31参与 人类次要剪接体的构 成(Bai,Wan  et al.2021)。 BUD31在卵巢癌中 高表达， 但其在卵巢癌恶性行为中的作用亟待阐明， 下游异常剪接网络也需要进一步深入 研究。 [0005]小干扰RNA(siRNA)是一类20 ‑25个核苷酸长度的双链RNA分子， 通过激活RNA诱导 沉默复合体(RISC)从而特异性降解信使核糖核苷酸(mRNA)， 进而降低基因表达水平， 调控 异常活跃的信号通路， 从而影响细胞的生物学行为(Reynolds,Leake  et al.2004)。 近年 来， siRNA因其特异性好、 作用迅速、 易开发等特点， 在药物研发领域有广阔的应用前景， 其 机制和功能及优化的给 药方式也在不断报道中(Kanasty,Dork in et al.2013)。说　明　书 1/9 页 3 CN 113913523 A 3