(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111306519.9 (22)申请日 2021.11.05 (71)申请人 复旦大学附属中山医院 地址 200032 上海市徐汇区枫林路180号 (72)发明人 周俭　胡捷　张勇　张文帅　 张翔宇　 (74)专利代理 机构 上海科盛知识产权代理有限 公司 312 25 代理人 褚明伟 (51)Int.Cl. A61K 31/7088(2006.01) A61K 35/38(2015.01) A61K 45/00(2006.01) A61K 45/06(2006.01) A61K 47/46(2006.01)A61P 35/00(2006.01) A61P 35/04(2006.01) C12N 5/071(2010.01) C12N 15/113(2010.01) (54)发明名称 miR-150及负载miR-150模拟物的外泌体在 制备治疗结直肠癌药物上的应用 (57)摘要 本发明涉及外泌体相关技术领域， 尤其是涉 及微小核糖核酸miR ‑150及负载miR ‑150模拟物 (miR‑150mimic)的外泌体在制备治疗结直肠癌 药物上的应用。 本发明采用外泌体荷载抗癌miR ‑ 150mimic作为结直肠癌肝转移的个体化治疗的 干预靶点； 本发明将人工合成的miR ‑150mimic转 载于正常肠上皮细胞来源的外泌体， 此外泌体不 仅仅保留对肠癌细胞的亲和力， 减少促进肿瘤进 展的不利影响因素， 同时通过其携带的miR ‑ 150mimic抑制肠癌细胞； 本发明提供的肝癌转移 治疗性外泌体具有安全性、 稳定性并保证了疗 效。 本发明治疗性外泌体为临床结直肠癌肝转移 提供了一种新思路。 权利要求书2页 说明书9页 序列表1页 附图2页 CN 114053294 A 2022.02.18 CN 114053294 A 1.miR‑150在制备治疗结直肠癌药物上的应用， 其特征在于， 所述miR ‑150序列为： 3 ’ ‑ GUGACCAUGUUCCCAACCCUCU‑5’。 2.根据权利要求1所述的miR ‑150在制备治疗结直肠癌药物上的应用， 其特征在于， miR‑150作为结直肠癌肝 转移的相关肿瘤标记 物； miR‑150还作为结直肠癌治疗的干预靶点。 3.外泌体在制备治疗结直肠癌药物上的应用， 其特征在于， 所述外泌体来自于正常肠 上皮细胞。 4.根据权利要求3所述的外泌体在制备治疗结直肠癌药物上的应用， 其特征在于， 所述 外泌体还携载在发挥治疗作用之前容易被人体组织或细胞代谢降解掉的药物， 包括但不限 于用于基因疗法的药物及分子 。 5.负载有miR ‑150mimic的外泌体在制 备治疗结直肠癌药物上的应用， 其特征在于， 负 载有miR‑150mimic的外泌体为 来自于正常肠上皮细胞的外泌体； 所述miR‑150mimic为人工合成的miR ‑150模拟物， 所述miR ‑150mimic有效工作序列为 3’ ‑GUGACCAUGUUCCCAACCCUCU ‑5’， 其茎环序列为： CUCCCCAUGGCCCUGUCUCCCAACCCUUGUACCA GUGCUGGGCUCAGAC CCUGGUACAGGCCUGGGGGACAGGGACCUGGGGAC。 6.根据权利要求5所述负载有miR ‑150mimic的外泌体在制备治疗结直肠癌药物上的应 用， 其特征在于， 负载有miR ‑150mimic的外泌体的制备 方法包括以下步骤： (1)载体外泌体的提取： 利用ExoQuickTG外泌体提取试剂盒提取细 胞上清外泌体， 利用 PBS重悬得到外泌体悬 液； (2)miR150mimic的获取： 人工合成miR ‑150mimic， 所述miR ‑150mimic有效工作序列为 3’ ‑GUGACCAUGUUCCCAACCCUCU ‑5’， 其茎环序列为： CUCCCCAUGGCCCUGUCUCCCAACCCUUGUACCA GUGCUGGGCUCAGAC CCUGGUACAGGCCUGGGGGACAGGGACCUGGGGAC； (3)miR‑150mimic转导入载体外泌体： 通过化学方法将步骤(2)人工合成的miR ‑ 150mimic转 导入步骤(1)的外泌体悬 液中， 得到负载有miR ‑150mimic的外泌体。 7.根据权利要求6所述负载有miR ‑150mimic的外泌体在制备治疗结直肠癌药物上的应 用， 其特征在于， 步骤(3)中， 所述 化学方法包括以下步骤： ①siRNA‑ExoFectin混合物的制备： 准备Exofectin  suspension外泌体转导试剂和 miR‑150mimic悬 液； 将两者混匀后孵 育得到siRNA ‑ExoFectin混合物； ②siRNA‑ExoFectin混合物的转导： 将步骤 ①得到的siRNA ‑ExoFectin混合物转导入外 泌体悬液中， 孵育后得到负载有miR ‑150mimic的外泌体。 8.根据权利要求7所述负载有miR ‑150mimic的外泌体在制备治疗结直肠癌药物上的应 用， 其特征在于， 步骤 ①中， 所述Exofectin  suspension外泌体转导试剂包括A) supplemental  buffer 25 μl； B)ExoF ectin Reagent 5 μl； 使用时混合均匀。 9.根据权利要求7所述负载有miR ‑150mimic的外泌体在制备治疗结直肠癌药物上的应 用， 其特征在于， 步骤 ①中， 所述miR ‑150mimic悬液包括A)supplemental  buffer 25 μl； B) miR‑150mimic 1 μl； 所述miR ‑150mimic浓度为5 μM； 使用时混合均匀。 10.根据权利要求7所述负载有miR ‑150mimic的外泌体在制备治疗结直肠癌药物上的权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114053294 A 2应用， 其特征在于， 步骤 ①中， 所述孵育温度为20 ‑25℃， 孵育 时间为5‑10min； 步骤 ②中， 所 述孵育温度为3 0‑37℃， 孵育时间为8 ‑12h。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114053294 A 3