ICS 65.150 B 51 DB35 福 建 省 地 方 标 准 DB35/T 1845—2019 菊黄东方鲀种质标准 Tawny puffer germplasm standard 2019 - 06 - 14 发布 福建省市场监督管理局 2019 - 09 - 14 实施 发 布 福 建 省 地 方 标 准 菊黄东方鲀种质标准 DB35/T 1845—2019 * 2019 年 6 月第一版 2019 年 6 月第一次印刷 DB35/T 1845—2019 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 术语和定义 ......................................................................... 1 4 学名和分类地位 ..................................................................... 1 5 主要形态特征 ....................................................................... 1 6 生长与繁殖 ......................................................................... 2 7 遗传学特征 ......................................................................... 3 8 检测方法 ........................................................................... 4 9 判定规则 ........................................................................... 5 附录 A（规范性附录） 缓冲液配制方法 ................................................... 6 I DB35/T 1845—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由福建省海洋与渔业局提出并归口。 本标准起草单位：福建省水产研究所、漳浦县佛昙镇河豚鱼协会。 本标准主要起草人：刘波、钟建兴、苏国强、刘智禹、方民杰、李雷斌、李正良、郑雅友、戴云峰。 II DB35/T 1845—2019 菊黄东方鲀种质标准 1 范围 本标准规定了菊黄东方鲀[Takifugu flavidus (Li Wang et Wang，1975)]的术语和定义、学名和 分类地位、主要形态特征、生长与繁殖、遗传学特征、检测方法以及判定规则。 本标准适用于菊黄东方鲀的种质鉴定与检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 8588 渔业资源基本术语 GB/T 18654.2 养殖鱼类种质检验 第2部分：抽样方法 GB/T 18654.3 养殖鱼类种质检验 第3部分：性状测定 GB/T 18654.6 养殖鱼类种质检验 第6部分：繁殖性能的测定 GB/T 18654.12 养殖鱼类种质检验 第12部分：染色体组型分析 3 术语和定义 GB/T 8588界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 皮刺 prickle 鱼皮上的棘状骨化物。 4 学名和分类地位 4.1 学名 菊黄东方鲀[Takifugu flavidus (Li Wang et Wang，1975)]。 4.2 分类地位 脊椎动物亚门（Vertebrata），硬骨鱼纲（Osteichthyes） ，鲀形目（Tetraodontiformes），鲀科 （Tetraodontidae），东方鲀属（Takifugu）。 5 主要形态特征 5.1 5.1.1 外部形态 外形 1 DB35/T 1845—2019 体亚圆筒形，头胸部粗圆，躯干后部渐细，尾柄圆锥状。眼小，侧上位，眼间隔宽，稍圆突。鼻瓣 呈卵圆形突起，位于眼前缘上方；鼻孔每侧2个，紧位于鼻瓣内外侧。鳃孔中大，侧中位，呈浅斜弧形， 位于胸鳍基底前方。 体背面自眼前缘上方至背鳍起点稍前方和腹面自眼缘下方至肛门稍前方均被较强皮刺，吻部、体侧 和尾柄光滑无刺，身体无鳞。 体背面棕黄色，腹面乳白色，体侧下缘皮褶呈宽橙黄色纵带，体侧、背面有菊花状或条形黑斑。体 色和斑纹随生长有变化，胸鳍基部内外侧常有一小深褐斑点，成鱼体侧后部下方有时出现一列小褐色斑 点。菊黄东方鲀的外形如图1所示。 图1 5.1.2 菊黄东方鲀外形 可数性状 背鳍鳍式：D.15～16；臀鳍鳍式：A.13～14；胸鳍鳍式：P.17～18；尾鳍鳍式：C.8；鳃耙数8～10。 5.1.3 可量性状 菊黄东方鲀可量性状比例值见表1。 表1 5.2 菊黄东方鲀可量性状比例值 体长/体高 体长/头长 头长/吻长 头长/眼径 尾柄长/尾柄高 2.6～3.2 2.7～3.0 2.3～3.1 6.3～12.0 1.4～1.6 内部构造 牙齿与上、下颌骨愈合，形成4个喙状板齿，中央缝明显。 头骨骨质硬而细密，中筛骨短而宽，额骨长稍大于宽，前额骨外缘显著长于额骨外缘，眶上缘中等 长，由长前额骨、短额骨和短蝶耳骨外缘构成。 体腔大，腹腔淡红色，鳔大，有气囊。 6 生长与繁殖 6.1 生长 年龄与体长、体重的关系见表2。 2 DB35/T 1845—2019 表2 6.2 菊黄东方鲀各年龄阶段体长与体重实测值范围 年龄（龄） 1 2 3 4 体长（cm） 14～20 19～23 21～28 25～32 体重（g） 92～280 310～560 530～720 620～830 繁殖 6.2.1 性成熟年龄 雌鱼最小性成熟年龄3龄，雄鱼最小性成熟年龄2龄。 6.2.2 繁殖季节 雌鱼产卵期为3月至5月，4月为产卵盛期，产卵水温为18 ℃～25 ℃。 6.2.3 生殖力 为一次性产卵型鱼类，卵巢每年性成熟1次，在性成熟度相同的情况下一般亲鱼怀卵量随个体增大 5 5 5 5 而增多，绝对怀卵量为0.5×10 ～2.0×10 粒，相对怀卵量为1.2×10 ～2.2×10 粒每千克。 6.2.4 卵子特征 受精卵为粘性沉性卵，椭球形，淡黄色，卵膜厚不透明，卵径0.8 mm～1.0 mm，多油球。 7 7.1 遗传学特征 细胞遗传学特征 菊黄东方鲀体细胞染色体数2n=44，染色体臂数(NF)=64，核型公式14m+6sm+24t，染色体组型如图2 所示。 图2 7.2 菊黄东方鲀的染色体组型 分子遗传学特征 随机引物S3（CTGCTGGGAC）和S9（GTAGACCCGT）PCR扩增的特征产物，片段大小为400 bp～2 000 bp， 如图3所示。 3 DB35/T 1845—2019 a）引物 S3（CTGCTGGGAC）（5‘-3’）PCR 扩增产物 b）引物 S9（GTAGACCCGT）（5‘-3’）PCR 扩增产物 说明： M——Marker 2000。 图3 8 菊黄东方鲀基因组 DNA 的 RAPD 电泳图谱 检测方法 8.1 抽样 按照GB/T 18654.2的规定进行。 8.2 性状测定 按照GB/T 18654.3的规定进行。 8.3 繁殖性能测定 按照GB/T 18654.6的规定进行。 8.4 染色体组型检测 按照GB/T 18654.12的规定进行。 8.5 4 基因组 DNA 的随机引物扩增（RAPD）分析 DB35/T 1845—2019 8.5.1 样品制备 于样品尾部取肌肉组织50 mg，置研钵中充分研磨，加入500 L抽提缓冲液（100 mmol/mL Tris-HCl， pH8.0；0.1 mol/L乙二胺四乙酸，pH8.0），再加入终浓度分别为0.5%的SDS和200 g/mL的蛋白酶K， 55 ℃水浴消化，每10 min缓摇一次，3 h左右消化完全后，冷却经酚、酚：氯仿（1:1）、氯仿各抽提 一次，2倍体积预冷的无水乙醇沉淀DNA，70%乙醇洗涤，晾干后用适量超纯水溶解，65 ℃灭活10 min 后，-4 ℃保存备用（缓冲液配制方法见附录A）。 8.5.2 RAPD 反应 RAPD反应总体积为25 L，包括10ｘPCR反应缓冲液2.5 L（成分：100 mmol/L Tris-HCl，500 mmol/L KCl，15 mmol/L MgCl2，1.315 mg/mL BSA，0.01% Gelatin，pH 8.4）；基因组DNA（10 g/mL）2 L； TaqDNA聚合酶1U；dNTP（1 mmol/L）2.5 L；各引物（10 mol/L）0.5 L；用超纯水补足体积至25 L。 样品在PCR扩增仪上进行扩增：94 ℃变性5 min；94 ℃1 min，36 ℃1 min，72 ℃2 min，45个循环； 72 ℃延伸10 min；4 ℃保存。 8.5.3 电泳和成像 取PCR扩增产物5 L在1.4%琼脂糖凝胶上进行电泳分离，电压5 V/cm，当加样缓冲液中的溴酚蓝迁 移至足够分离DNA片段的距离时，关闭电源。琼脂糖凝胶在0.5 g/mL的EB溶液染色10 min～30 min后， 用全自动凝胶成像系统紫外成像并拍照，通过该系统计算扩增产物的分子量。 9 判定规则 检测结果不符合第5章以及7.1中要求的，则判定为不合格项；有不合格项的样品为不合格样品。 5 DB35/T 1845—2019 AA 附 录 A （规范性附录） 缓冲液配制方法