(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111598830.5 (22)申请日 2021.12.24 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114316050 A (43)申请公布日 2022.04.12 (73)专利权人 北京市神经外科研究所 地址 100160 北京市丰台区南四环西路1 19 号 (72)发明人 张伟　翟优　李冠璋　江涛　 (74)专利代理 机构 北京市中伦律师事务所 11410 专利代理师 信建 (51)Int.Cl. C07K 16/28(2006.01) C07K 19/00(2006.01) A61K 35/17(2015.01) A61P 35/00(2006.01)(56)对比文件 WO 2011149493 A1,201 1.12.01 CN 105505869 A,2016.04.20 US 20193 30362 A1,2019.10.31 CN 113234162 A,2021.08.10 CN 113214396 A,2021.08.0 6 Thanich Sangsuwan nukul 等.Anti-tumour effect of the fourth -generati on chimeric antigen receptor T cel ls targeti ng CD133 against cholangiocarcinoma cells. 《Internati onal Immunopharmaco logy》 .2020, 第89卷全 文. 程金章 等.抗CD13 3单链抗体 /白喉毒素 DAB389融合蛋白的基因构建、 表达、 纯化及鉴定. 《中国实验 诊断学》 .2018,第2 2卷(第9期),全 文. 审查员 杨光 (54)发明名称 CD133抗体、 嵌合 抗原受体及其应用 (57)摘要 本发明涉及生物医学技术领域， 具体而言， 涉及CD133抗体、 嵌合抗原受体及其应用。 本发明 所提供CD133抗体或其抗原结合片段对CD133具 有较好的亲和力和特异性， 且含有CD133抗体片 段的嵌合 抗原受体具有 优秀的抗肿瘤效果。 权利要求书1页 说明书9页 序列表4页 附图1页 CN 114316050 B 2022.11.11 CN 114316050 B 1.能够特异性识别CD133的抗体或其抗原结合片段， 其重链互补决定区HCDR1、 HCDR2和 HCDR3的序列依次如SEQ  ID NO:1～3所示， 轻链互补决定区LCD R1、 LCDR2和LCD R3的序列依 次如SEQ ID NO:4～6所示。 2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段， 其为鼠抗体、 人鼠嵌合抗体或人源化 抗体。 3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段， 其具有SEQ  ID NO:7所示的重链可变 区HCVR和SEQ ID NO:8所示的轻链可变区LCVR。 4.根据权利要求1～3任一项所述的抗体或其 抗原结合片段， 其 为scFv。 5.根据权利要求4所述的抗体或其抗原结合片段， 所述scFv的连接肽序列为SEQ  ID  NO:9所示。 6.嵌合抗原受体， 其胞外域具有权利要求 4或5中所述scFv。 7.根据权利要求6所述的嵌合 抗原受体， 其还 包含铰链区、 跨膜域和胞内信号传导区。 8.分离的核酸， 其能够表达得到权利要求1～5任一项所述抗体或其抗原结合片段， 或 权利要求6或7 所述的嵌合 抗原受体。 9.含有权利要求8所述核酸的载体。 10.宿主细胞， 其含有权利要求8所述的核酸或权利要求9所述的载体， 或表达有权利要 求6或7所述的嵌合 抗原受体。 11.免疫细胞， 其表达有权利要求6或7 所述的嵌合 抗原受体。 12.根据权利要求1 1所述的免疫细胞， 其 为T细胞。 13.药用组合物， 其包 含权利要求1 1或12所述的免疫细胞。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114316050 B 2CD133抗体、 嵌合 抗原受体及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物医学技术领域， 具体而言， 涉及CD133抗体、 嵌合抗原受体及其应 用。 背景技术 [0002]人CD133蛋白与鼠prominin ‑1(一种富集于神经上皮干细胞顶端表面微绒毛上的 表面蛋白)有大约60％的同源性， 故也称人CD133为人prominin ‑1。 CD133是一个5次跨膜糖 蛋白， 最初于1997年作为CD34阳性造血干细胞上的表 面抗原被AC133单抗靶定而被发现。 与 此同时测定其分子量约为97kDa， 由865个氨基酸组成， 包括85个氨基酸N端 胞外域、 5个跨膜 区、 2个大的胞外环(包含8个潜在的连接N端的糖基化位点)以及一个由50个氨基酸组成的 胞内尾端。 有研究表明AC133抗原是一个表观分子量为120kDa的糖基化蛋白。 同年 发现了另 一个CD133糖基化表位 ‑AC141。 CD133抗原被认为是肿瘤干细胞(CSCs)的特异性标记物， 在 多种实体瘤中表达。 CD133在肿瘤细胞中表达对癌症的发展具有重要意义， CD133+肿瘤起始 细胞是多种侵 袭性癌症中化学和放 射耐药的已知标志 物， 可能会导 致肿瘤异质性。 [0003]嵌合抗原受体(Chimeric  antigen receptor， CAR)是人工合 成的T细胞 受体， 由抗 原结合结构域、 跨膜结构域和胞内信号传导结构域组成。 抗原结合结构域位于T细胞膜外， 包括单链抗体或配体， 用于特异性地结合靶抗原。 胞内信号传导结构域位于T细胞膜内， 用 于向T细胞内传导信号以刺激T细胞产生免疫反应。 [0004]CAR‑T能够特异性识别肿瘤细胞依赖于CAR分子细胞外结构域的scFv。 然而， 目前 对于实体肿瘤， 尤其是脑胶质瘤的CAR ‑T治疗， 尚缺失理想的靶点选择。 实体肿瘤的异质性 使得现有的表达嵌合抗原受体的T细胞不能识别肿瘤组织内低表达或不表达所选抗原的肿 瘤细胞， 从而整体上对肿瘤细胞的杀伤能力仍然较弱。 然而， CAR ‑T在实体肿瘤中， 特别是脑 胶质瘤的应用尚没有取 得理想结果。 发明内容 [0005]本发明的第一目的在于提供一种能够特异性识别CD133的抗体或其抗原结合片 段， 其具有SEQ  ID NO:1～3所示的重链互补决定区HCDR1、 HCDR2和HCDR3， 以及SEQ  ID NO:4 ～6所示的轻链互补决定区LCDR 1、 LCDR2和LCDR3 。 [0006]本发明的第二目的在于提供一种嵌合 抗原受体， 其胞外域具有如上 所述scFv。 [0007]本发明的第三目的在于提供一种分离的核酸， 其能够表达如上所述抗体或其抗原 结合片段， 或如上 所述的嵌合 抗原受体。 [0008]本发明的第四目的在于提供含有如上 所述核酸的载体。 [0009]本发明的第五目的在于提供宿主细胞， 其含有如上所述的核酸或如上所述的载 体， 或表达有如上 所述的嵌合 抗原受体。 [0010]本发明的第六目的在于提供 药用组合物， 其包 含如上所述的宿主细胞。 [0011]本发明所提供CD133抗体或其抗原 结合片段对CD133具有较好的亲和力和特异性，说　明　书 1/9 页 3 CN 114316050 B 3