(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111598857.4 (22)申请日 2021.12.24 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114213538 A (43)申请公布日 2022.03.22 (73)专利权人 北京市神经外科研究所 地址 100160 北京市丰台区南四环西路1 19 号 (72)发明人 张伟　翟优　李冠璋　江涛　 (74)专利代理 机构 北京市中伦律师事务所 11410 专利代理师 信建 (51)Int.Cl. C07K 16/28(2006.01) C07K 19/00(2006.01) C12N 15/13(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 15/70(2006.01) C12N 15/867(2006.01) C12N 5/10(2006.01)C12N 1/21(2006.01) A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C12R 1/19(2006.01) (56)对比文件 CN 113214396 A,2021.08.0 6 US 2007237761 A1,20 07.10.11 CN 113621701 A,2021.1 1.09 CN 113201063 A,2021.08.0 3 CN 1898268 A,20 07.01.17 CN 113402621 A,2021.09.17 Simona Porcel lini等.CAR T Cel ls Redirected to CD4 4v6 Control Tumor Gro wth in Lung and Ovary Aden ocarcinoma Beari ng Mice. 《Fro ntiers i n Immunology》 .2020,第1 1 卷(第99期), 陈葆国等.CD4 4单克隆抗体诱 导THP-1细胞 分化和凋亡作用及其机制探讨. 《中华血 液学杂 志》 .2011,第32卷(第6期), 审查员 龙添珍 (54)发明名称 CD44抗体、 嵌合 抗原受体及其应用 (57)摘要 本发明涉及生物医学技术领域， 具体而言， 涉及CD44抗体、 嵌合抗原受体及其应用。 本发明 所提供CD44抗体或其抗原结合片段对CD44具有 较好的亲和 力和特异性， 且含有CD44抗体片段的 嵌合抗原受体具有 优秀的抗肿瘤效果。 权利要求书1页 说明书11页 序列表8页 附图2页 CN 114213538 B 2022.07.08 CN 114213538 B 1.能够特异性识别CD44的抗体或其抗原结合片段， 其重链互补决定区HCDR1、 HCDR2和 HCDR3的序列依次如SEQ  ID NO:1～3所示， 轻链互补决定区LCD R1、 LCDR2和LCD R3的序列依 次如SEQ ID NO:4～6所示。 2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段， 其为鼠抗体、 人鼠嵌合抗体或人源化 抗体。 3.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段， 其具有SEQ  ID NO:7所示的重链可变 区HCVR和SEQ ID NO:8所示的轻链可变区LCVR。 4.根据权利要求1～3任一项所述的抗体或其 抗原结合片段， 其 为scFv。 5.根据权利要求4所述的抗体或其抗原结合片段， 所述scFv的连接肽序列为SEQ  ID  NO:9所示。 6.嵌合抗原受体， 其胞外域具有权利要求 4或5中所述scFv； 所述的嵌合 抗原受体还 包含铰链区、 跨膜域和胞内信号传导区。 7.根据权利要求6所述的嵌合 抗原受体， 所述铰链区选自CD 8α 的hinge区。 8.根据权利要求6所述的嵌合 抗原受体， 所述 跨膜域为CD8α 跨膜区。 9.根据权利要求6所述的嵌合 抗原受体， 所述胞内信号传导区包括CD3ζ信号传导 域。 10.根据权利要求6～9任一项所述的嵌合抗原受体， 所述胞内信号传导区还包含CD28、 4‑1BB、 OX40、 ICOS、 CD27、 CD40 ‑MyD88、 DAP12、 DAP10、 2B4中的一种或多种。 11.根据权利要求6所述的嵌合抗原受体， 所述的嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQ  ID  NO:10所示。 12.分离的核酸， 其 能够表达得到权利要求1～5任一项所述抗体或其抗原结合片段， 或 权利要求6～1 1任一项所述的嵌合 抗原受体。 13.含有权利要求12所述核酸的载体。 14.宿主细胞， 其含有权利要求12所述的核酸或权利要求13所述的载体， 或表达有权利 要求6～1 1任一项所述的嵌合 抗原受体。 15.免疫细胞， 其表达有权利要求6～1 1任一项所述的嵌合 抗原受体。 16.根据权利要求15所述的免疫细胞， 其 为T细胞。 17.药用组合物， 其包 含权利要求15或16所述的免疫细胞。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114213538 B 2CD44抗体、 嵌合 抗原受体及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物医学技术领域， 具体而言， 涉及CD44抗体、 嵌合抗原受体及其应 用。 背景技术 [0002]嵌合抗原受体(Chimeric  antigen receptor， CAR)是人工合 成的T细胞 受体， 由抗 原结合结构域、 跨膜结构域和胞内信号传导结构域组成。 抗原结合结构域位于T细胞膜外， 包括单链抗体或配体， 用于特异性地结合靶抗原。 胞内信号传导结构域位于T细胞膜内， 用 于向T细胞内传导信号以刺激T细胞产生免疫反应。 [0003]CAR‑T能够特异性识别肿瘤细胞依赖于CAR分子细胞外结构域的scFv。 然而， 目前 对于实体肿瘤， 尤其是脑胶质瘤的CAR ‑T治疗， 尚缺失理想的靶点选择。 实体肿瘤的异质性 使得现有的表达嵌合抗原受体的T细胞不能识别肿瘤组织内低表达或不表达所选抗原的肿 瘤细胞， 从而整体上对肿瘤细胞的杀伤能力仍然较弱。 然而， CAR ‑T在实体肿瘤中， 特别是脑 胶质瘤的应用尚没有取 得理想结果。 [0004]CD44为37.2kDa膜糖蛋白， 共由20个高度保守的外显子组成， 中间由长短不一的内 含子分隔。 是透明质酸结合蛋白。 生理上， 该分子(1)介导淋巴细胞与毛细血管后小静脉中 的高柱状内皮细胞结合， 使淋巴细胞穿过血管壁回到淋巴组织； (2)参与淋巴细胞的激活过 程； (3)与细胞外基质中的透明质酸、 层 粘连蛋白等基质分子结合； 病理上， CD44在 多种肿瘤 细胞， 特别是肿瘤干细胞 上表达， 表达水平高低与肿瘤侵 袭能力直接相关。 [0005]利用抗CD 44抗体构建嵌合抗原受体表达于T细胞表面， 可使T细胞特异性杀伤CD 44 阳性的肿瘤 细胞， 通过用CD4 4嵌合抗原受体封闭T细胞自身的CD4 4可以有效避免相互杀伤。 发明内容 [0006]本发明的第一目的在于提供一种能够特异性识别CD 44的抗体或其抗原结合片段， 其具有SEQ  ID NO:1～3所示的重链互补决定区HCDR1、 HCDR2和HCDR3， 以及SEQ  ID NO:4～6 所示的轻链互补决定区LCDR 1、 LCDR2和LCDR3 。 [0007]本发明的第二目的在于提供一种嵌合 抗原受体， 其胞外域具有如上 所述scFv。 [0008]本发明的第三目的在于提供一种分离的核酸， 其能够表达如上所述抗体或其抗原 结合片段， 或如上 所述的嵌合 抗原受体。 [0009]本发明的第四目的在于提供含有如上 所述核酸的载体。 [0010]本发明的第五目的在于提供宿主细胞， 其含有如上所述的核酸或如上所述的载 体， 或表达有如上 所述的嵌合 抗原受体。 [0011]本发明的第六目的在于提供 药用组合物， 其包 含如上所述的宿主细胞。 [0012]本发明所提供CD 44抗体或其抗原 结合片段对CD 44具有较好的亲和力和特异性， 且 含有CD44抗体片段的嵌合 抗原受体具有优秀的抗肿瘤效果。说　明　书 1/11 页 3 CN 114213538 B 3