(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111603706.3 (22)申请日 2021.12.24 (71)申请人 山东大学齐鲁医院 地址 250014 山东省济南市历下区文化西 路107号 (72)发明人 纪春岩　叶静静　孙涛　李明颖　 (74)专利代理 机构 济南圣达知识产权代理有限 公司 372 21 代理人 张晓鹏 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) C12Q 1/6851(2018.01) C12N 15/11(2006.01) A61K 45/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 METTL3在AML 化疗耐药性中的应用 (57)摘要 本发明具体涉及METT L3在AML化疗耐药性中 的应用， 属于分子生物学和医学技术领域。 A ML临 床治疗效果不佳， 预后情况较差， 并且复发和难 治病例无法通过常规疗法缓解。 本发 明通过分析 AML化疗相对敏感患者与AML化疗耐药患者骨髓 中METTL3表达差异， 提供了一种用于检测急性髓 系白血病化学药物治疗 敏感度的分子标记； 通过 AML化疗敏感细胞株及化疗耐药细胞株及动物模 型， 证实了METTL3抑制剂的AML化疗耐药治疗效 果。 本发明研究还证实了， METTL3 可通过调控A ML 细胞归巢介导AML 化疗耐药。 权利要求书1页 说明书7页 序列表1页 附图7页 CN 114032311 A 2022.02.11 CN 114032311 A 1.检测METTL3表达水平 的试剂在制备评估急性髓系白血病患者化疗效果或预后的产 品中的用途。 2.根据权利 要求1所述的用途， 其特征在于， 所述METTL3在难治或化疗后复发急性髓系 白血病患者中表达上调。 3.根据权利要求1所述的用途， 其特征在于， 所述试剂包括RT ‑PCR、 qRT‑PCR或高通量测 序平台检测用试剂。 4.一种评估急性髓系白血病化疗效果及预后的产品， 所述产品包括试剂盒， 所述试剂 包括可以检测M ETTL3表达水平的PCR反应试剂。 5.根据权利要求4所述的产品， 其特征在于， 所述PCR反应试剂包括扩增METTL3的引物； 优选的， 所述引物序列如SEQ  ID NO.1‑2所示； 进一步的， PCR反应试剂还包括dNTP、 DEPC水 和SYBR Green； 进 一步的， 扩增METT L3的PCR条件为:9 5℃1min； 9 5℃15s， 62℃15s， 72℃45s， 40个循环； 95℃15s， 6 0℃1min， 95℃持续。 6.一种非诊断目的是否存在M ETTL3基因及其定量检测方法， 步骤如下： ①采用扩增M ETTL3的引物扩增待检样品， 得到扩增产物； ②对扩增产物进行测序测定， 检测扩增产物中是否存在M ETTL3； ③与内参基因GAP DH相比， 利用2‑△Ct方法， 计算M ETTL3的表达量。 7.METTL3作为AML 化疗耐药治疗 靶点在制备AML 化疗耐药性产品中的应用。 8.根据权利要求7所述的应用， 其特征在于， METTL3作为AML化疗耐药治疗靶点的应用 方式包括M ETTL3抑制剂用于制备抗AML 化疗耐药 药物； 优选的， 所述M ETTL3抑制剂为STM2457。 9.METTL3在制备抑制AML细胞粘附及归巢的治疗产品中的应用。 10.METTL3抑制剂在制备抗AML化疗耐药活性成分的应用； 优选的， 所述抗AML化疗耐药 活性成分由所述METTL3抑制剂及药学上所必须的辅料组成； 进一步优选的， 还包括其他具 有AML化疗耐药活性的成分。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114032311 A 2METTL3在AML化疗耐药性中的应用 技术领域 [0001]本发明属于分子生物学和医学技术领域， 涉及METTL3在急性髓系白血病(AML)化 疗耐药性中的应用， 具体涉及一种用于鉴定AML化疗敏感度的分子标记、 试剂盒及其检测方 法以及METTL3抑制剂在制备抗AML 化疗耐药 药物中的应用。 背景技术 [0002]该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解， 而不必然被视 为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域 一般技术人员所公知的现有技 术。 [0003]急性髓系白血病(Acute  myeloid leukemia,AML)是 目前最为常见的一类急性白 血病， 化疗依然 是其临床治疗的主要手段。 目前， 仅20 ‑30％的AML患者化疗 药物治疗后可达 长期无病生存(Disease ‑free survival， DFS)， 而AML难治 复发的主要原因是化疗耐药。 因 此， 探究AML 化疗耐药的发生机制是当前AML临床及基础研究中亟需解决的热点问题。 [0004]针对AML化疗耐药的发生机制， 围绕不同的信号通路和关键调控分子， 主要形成了 以下学说： 肿瘤ABC转运蛋白学说、 凋亡失调控学说、 关键基因突变学说和骨髓微环境学说 等。 骨髓微环 境， 又称骨髓龛， 此学说认为一方面AML细胞上的细胞 因子、 生长因子和趋化因 子等受体可与骨髓龛内的成骨细胞、 窦状内皮细胞和基质细胞等分泌的多种可溶性因子结 合， 激活不同信号传导通路， 促进细胞存活、 增殖和抑制细胞凋亡， 介导AML化疗耐药； 另一 方面， AML细胞可通过一系列粘附分子及细胞外基质成分与骨内膜或基质的成骨细胞紧密 结合， 介导A ML细胞通过 “Adhesion”、“Engraftment ”和“Expansion”等过程归巢并藏 匿于骨 髓微环境中， 躲避化学药物攻击的同时促进AML细胞的自我更新及生存， 产生化疗耐药。 但 目前AML化疗耐药仍有 待于进一 步研究。 发明内容 [0005]针对上述现有技术的现状， 发明人前期利用C RISPR‑Cas9文库筛选技术、 反向蛋白 微阵列技术及转录组高通量测序技术联合生物信息学分析手段筛选， 经深入而广泛的研究 验证， 首次发现METTL3基因与 急性髓系白血病 化疗耐药密切相关， 可作为急性髓系白血病 患者临床分子生物学化学药物疗效评估的分子标记； 并且发明人利用后续体外细胞实验及 动物体内实验首次证实， METTL3可作为AML化疗耐药治疗的靶点， 同时， 发明人通过二代测 序手段及AML动物模型发现并证实METTL3可以调控AML细胞的归巢。 因此， METTL3及其介导 的AML细胞归巢可能是AML 化疗耐药的关键 机制之一。 [0006]基于上述发现， 本发明提供以下技 术方案。 [0007]本发明第一个方面， 提供检测METTL3表达水平的试剂在制备评估急性髓系白血病 患者化疗效果或预后的产品中的用途。 [0008]本发明第二个方面， 提供了一种评估急性髓系白血病化疗效果及预后的产品， 所 述产品包括试剂盒， 所述试剂包括可以检测M ETTL3表达水平的PCR反应试剂。 [0009]本发明第三个方面， 提供一种非诊断目的是否存在METTL3基因及其定量检测方说　明　书 1/7 页 3 CN 114032311 A 3