(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111634358.6 (22)申请日 2021.12.24 (71)申请人 郑州大学 地址 450001 河南省郑州市高新 技术开发 区科学大道100号 (72)发明人 王琳　刘文静　江秉华　周志豪　 (51)Int.Cl. C12Q 1/6886(2018.01) A61K 45/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 MiR-199a/miR-218联合靶基因在检测六价 铬暴露致癌过程中的应用 (57)摘要 本发明提供了一种miR ‑199a和miR ‑218在铬 暴露致癌检测中的应用及药物， 属于生物标志物 检测应用技术领域。 特别涉及miR ‑199a和miR ‑ 218在铬暴露人群血液样本中表达 下调。 此外， 下 游基因IL ‑8、 HK2和LDHA在铬暴露人群血液样本 中表达上调。 特别涉及miR ‑199a和miR ‑218在逆 转铬诱导肿瘤发生发展中的应用； 通过改变miR ‑ 199a和miR ‑218表达水平对铬诱导细胞增殖和肿 瘤生长等产生影响， 说明过表 达miR‑199a和miR ‑ 218能够抑制肿瘤生长， 逆转铬诱 导肿瘤的发生。 权利要求书1页 说明书6页 附图4页 CN 114438205 A 2022.05.06 CN 114438205 A 1.利用miR ‑199a和miR ‑218检测重金属铬暴露致癌的过程， 采用miR ‑199a和miR ‑218化 学合成的类似物克服铬诱 导的细胞恶性 转化和肿瘤生长的药物及试剂盒开发； 所述miR‑199a的序列为5 ’ ‑CCCAGUGUUCAGACUAC CUGUUC‑3’； 所述miR‑218的序列为5 ’ ‑UUGUGCUUGAUCUAACCAUGU‑3’。 2.通过miR ‑199a和IL ‑8检测重金属铬暴露致癌的过程， 采用miR ‑199a和IL ‑8化学合成 的类似物克服铬诱 导的细胞恶性 转化和肿瘤生长的药物及试剂盒开发。 3.通过miR ‑218、 HK2和LDHA检测重金属铬暴露致癌的过程， 采用miR ‑218、 HK2和LDHA化 学合成的类似物克服铬诱 导的细胞恶性 转化和肿瘤生长的药物及试剂盒开发。 4.通过miR ‑199a、 HK2和LDHA检测重金属铬暴露致癌的过程， 采用miR ‑199a、 HK2和LDHA 化学合成的类似物克服铬诱 导的细胞恶性 转化和肿瘤生长的药物及试剂盒开发。 5.通过miR ‑218和IL‑8检测重金属铬暴露致癌的过程， 采用miR ‑218和IL‑8化学合成的 类似物克服铬诱 导的细胞恶性 转化和肿瘤生长的药物及试剂盒开发。 6.通过miR ‑199a、 IL‑8、 miR‑218、 HK2和 LDHA检测重金属铬暴露致癌的过程， 采用miR ‑ 199a、 IL‑8、 miR‑218、 HK2和LDHA化学合成的类似物克服铬诱导的细胞恶性转化和肿瘤生长 的药物及试剂盒开发。 7.根据权利要求1 ‑6所述的药物， 其特征在于， 所述载体包括选自乳糖、 淀粉、 明胶、 羧 甲基纤维素钠、 甲基纤维素、 聚乙烯吡咯烷酮和水中的任意 一种或多种。 8.根据权利要求1 ‑6所述的药物， 其特征在于， 所述助剂包括崩解剂、 抗黏剂、 润滑剂、 黏合剂和助溶剂中的任意 一种或多种。 9.根据权利要求1 ‑6所述的药物， 其特征在于， 所述崩解剂为淀粉或微晶纤维素； 所述 抗黏剂和润滑剂为滑石粉、 胶体硅胶、 硬脂酸甘油酯、 硬脂酸钙或镁粉的任意一种或多种； 所述助溶剂为甲磺酸、 富马酸、 山梨醇单月桂酸酯、 单硬脂酸酯或单油酸酯的任意一种或多 种。 10.根据权利要求1 ‑6所述的药物， 其特征在于， 所述具有逆转铬暴露致癌风险的药物 制备成片 剂、 颗粒、 胶囊、 口服液或注射液。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114438205 A 2MiR‑199a/miR‑218联合靶基因在检测六价铬暴露致癌过 程中 的应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物标志物检测应用技术领域， 特别是涉及一种同时检测miR ‑199a和 miR‑218以及联合下游靶基因IL ‑8、 HK2和LDHA评价六价铬 暴露引起细胞恶性转化和肿瘤发 生发展过程， 并通过包含miR ‑199a、 IL‑8、 miR‑218、 HK2和LDHA的药物载体逆转铬暴露致癌 风险。 背景技术 [0002]肺癌作为在我国发病率和死亡率均第一位的恶性肿瘤， 其发病原因一直受到广泛 关注， 而发病机制也在不断地被探讨， 其中， 环 境因素所由诱发的肺癌也越来越引起人们的 重视， 其中铬(Chromium， Cr)是广泛被确认的环 境污染物和职 业性呼吸道肿瘤致癌物。 铬主 要产生于含铬工业生产过程中。 全球每年的各类铬盐生产量约为一千 六百万吨， 用于电镀、 焊接、 涂料生产、 皮革以及木料防腐业等。 全世界有几百万人员职 业接触铬盐作业。 近年来， 由于饮水中铬污染导致的健康损害事件的频发， 铬更加引起公共卫生领域的关注。 例如， 2011年云南曲靖发生由于非法倾倒铬渣而导致水源污染， 引起大量牲畜死亡事件。 铬主要 以三种化合价位， 零价、 三价和六价存在。 六价铬是铬的主要毒性形式。 人体摄入六价铬主 要经呼吸道和口腔途径， 少量六价铬也可经皮肤吸收。 职业性暴露是人类接触铬的主要方 式。 由于经呼吸道吸入铬烟、 铬尘是职 业作业场所的主要接触途径， 因此铬引发的肺癌最为 常见。 国际癌症研究署早于1990年确定铬为 “人类致癌物 ”。 随着饮水中出现铬污染的新情 况出现， 深入理解六价铬致癌的机制对安全剂量的设定、 铬毒性的预防有重要价 值。 [0003]关于六价铬Cr(VI)致癌机制的研究， 已提出 的机制有铬诱导的DNA损伤、 DNA修复 酶抑制如核苷酸剪切修复酶、 氧化应激理论和表观遗传修饰。 近年的研究表明， 基因组的表 观遗传修饰在导致肿瘤发生中起重要作用。 能引起肿瘤形成的表观遗传修饰主要包括DNA 甲基化或乙酰化， 组氨 酸修饰和蛋白质磷酸化以及微小RNA(miRNAs)的转录后修饰。 miRNAs 是长度为18～23个核苷酸构成 的单链， 通过其种 子序列区域(seed  sequence)与靶基因信 使RNA(mRNA)的3 ’端的非翻译序列(3 ’ ‑UTR)相互作用而导致靶基因mRNA降解或蛋白翻译受 到抑制。 随着miRNAs高通量分析方法的发展和普及， 大量研究表明miRNAs参与肿瘤发生、 发 展和预后的全过程， 在引起肿瘤形成的各个重要信号通路中均发挥关键作用。 但是， 关于 miRNAs在环 境致癌物的作用的研究才处于起步阶段。 我们已经体外建立了长期诱导的人支 气管呼吸道上皮恶性转化细胞(Cr ‑T)模型， 与其正常的永生化母细胞(B2B)相比， Cr ‑T细胞 的增殖、 克隆形成、 成瘤以及血管形成能力都明显增强。 我们发现与其正常的永生化B2B细 胞相比， miR ‑143的表达水平在铬转化Cr ‑T细胞中显著降低， 表明miR ‑143在铬致癌的过程 中起一定作用。 进一步通过功能实验结果证明， mi R‑143的降低是导致铬 致瘤和铬 诱导的肿 瘤新的血管生 成重要原因， 这是通过释放其对类胰岛素生长因子受体(IGF ‑IR)和类胰岛素 受体底物1(IRS1)的抑制而实现。 [0004]有氧糖酵解(aerobic  glycolysis)是指肿瘤细胞即使在氧气充足的情况下， 也主说　明　书 1/6 页 3 CN 114438205 A 3