(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111650669.1 (22)申请日 2021.12.3 0 (71)申请人 安徽医科 大学第一附属医院 地址 230022 安徽省合肥市蜀山区绩溪路 218号 (72)发明人 李平　吴敏　胡翼　徐梦冉　 (74)专利代理 机构 合肥昊晟德专利代理事务所 (普通合伙) 3415 3 代理人 王林 (51)Int.Cl. A61K 9/127(2006.01) A61K 31/475(2006.01) A61K 47/42(2017.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种TD-1修饰的脂质体载药系统、 制备方法 及其应用 (57)摘要 本发明涉及药物制备技术领域， 具体涉及一 种TD‑1修饰的脂质体载药系统、 制备方法及其应 用； 将马钱子碱作为原料， 制备TD ‑1修饰的包载 马钱子碱的脂质体载药系统， 并且 可以在超声条 件下均匀分散于水中制得透皮治疗剂， 该试剂通 过透皮给药可以诱导人源性三阴乳腺癌细胞 MDA‑MB‑231细胞死亡并抑制该肿瘤细胞的血管 生成拟态信号通路， 在异种移植瘤小鼠(BALB/C   Nude雌性小鼠)模型中， 验证了TD ‑1修饰的马钱 子碱脂质体通过透皮给药之后可以增强治疗效 果， 且同时具有较低的系统毒性， 能够用于抑制 三阴乳腺癌血管生成拟态， 具有较为明显的对肿 瘤细胞的杀伤和抑制效果。 权利要求书1页 说明书6页 附图20页 CN 114272211 A 2022.04.05 CN 114272211 A 1.一种TD ‑1修饰的脂质体载 药系统的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： S1： 取马钱子 碱溶解在三氯甲烷中， 得到浓度值 为2mg/mL的马钱子 碱溶液； S2： 将DSPE ‑PEG2000‑NHS、 TD‑1溶于N‑N,二甲基甲酰胺溶液 中， 再加入三乙胺调制pH为 8.0～8.5， 磁力搅拌72h后， 透析3天得到D SPE‑PEG‑TD； S3： 将步骤S2中透析好的溶液在 ‑80℃冻存2h， 迅速将样品转移至提前预冷好的冻干 机， 冻干24h， 短暂离心后加入三氯甲烷， 调整D SPE‑PEG‑TD的浓度为 4mg/mL； S4： 向DPPC、 胆固醇、 DSPE ‑PEG‑TD中加入三氯甲烷、 甲醇以及步骤S1中的马钱子碱溶 液， 水浴超声5分钟， 充分 混匀； S5： 将步骤S4中得到的混合溶液在水浴40℃下旋转蒸发， 待混合溶液蒸发至原体积的 三分之一时， 抽真空， 形成薄膜后在40℃下 水化20分钟； S6： 将步骤S5中得到的水化的脂质体在探头超声仪功率为50W下超声8分钟， 超声后离 心10分钟， 离心后弃去沉淀取 上清4℃下保存， 得到TD ‑1修饰的脂质体载 药系统。 2.如权利要求1所述的一种TD ‑1修饰的脂质体载药系统的制备方法， 其特征在于， 所述 步骤S2中DSPE ‑PEG2000‑NHS和TD‑1的质量比为5～6： 1， 用N ‑N,二甲基甲酰胺溶液和和三乙 胺溶液调pH至8.0～8.5 。 3.如权利要求1所述的一种TD ‑1修饰的脂质体载药系统的制备方法， 其特征在于， 所述 步骤S4中DPPC、 胆固醇、 DSPE ‑PEG‑TD、 马钱子碱的质量比为8： 2： 2： 1， 甲醇和三氯甲烷的体 积比为1： 2， 甲醇和三氯甲烷的总体积不超过9mL。 4.如权利要求1所述的一种TD ‑1修饰的脂质体载药系统的制备方法， 其特征在于， 所述 步骤S5中旋转蒸发的转速为20 0r/min， 旋转蒸发过程中， 真空泵压力≥0.5KPa。 5.如权利要求1所述的一种TD ‑1修饰的脂质体载药系统的制备方法， 其特征在于， 所述 步骤S5中真空抽吸在室温条件下进行， 持续时间为15mi n。 6.如权利要求1所述的一种TD ‑1修饰的脂质体载药系统的制备方法， 其特征在于， 所述 步骤S5中水化用PBS中添加了 0.5％的吐温80作为表面活性剂。 7.如权利要求1所述的一种TD ‑1修饰的脂质体载药系统的制备方法， 其特征在于， 所述 PBS的用量 为1mL， 吐温80的用量 为5 μL。 8.如权利要求1所述的一种TD ‑1修饰的脂质体载药系统的制备方法， 其特征在于， 所述 步骤S6中离心转速为10 000r/min。 9.一种采用如权利要求1～8任一项所述的制备方法制得的TD ‑1修饰的脂质体载药系 统。 10.一种如权利要求9所述的TD ‑1修饰的脂质体载药系统在制备抑制三阴乳腺癌血管 生成拟态药物中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114272211 A 2一种TD‑1修饰的脂质体载药系统、 制备方 法及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及药物制备技术领域， 具体涉及一种TD ‑1修饰的脂质体载药系统、 制备 方法及其应用。 背景技术 [0002]癌症从本质上说是基因病， 其发生是一个多因子、 多步骤的复杂过程。 主要的原因 是控制细胞的基因组发生突变， 使细胞发生无限制的克隆性转化， 最 终形成恶性肿瘤。 癌症 可发生在各类人群、 各年龄阶段以及人体的不同器官上， 是一组严重威胁人类健康和生命 的疾病。 [0003]目前对于癌症的治疗， 外科手术直接切除病灶仍然是古老的治疗方法之一， 同时 放疗、 化疗以及靶向治疗等方法也被应用到。 然而， 采用外科手术切除肿瘤组织， 很难完全 将其切除， 尤其是一些难以施行肿瘤切除的部位， 或者 非实体瘤， 手术切除治疗会显得无用 武之地。 这时临床大夫将会选择放疗和化疗来治疗癌症， 但放、 化疗剂量较大， 也会对人体 的正常细胞产生较大的毒副作用， 并有 可能引起癌症病人较大的毒副反应。 因此， 在提高癌 症治疗效果的情况下、 降低化疗药物的使用浓度来减轻对病 人的毒副反应， 是临床上亟待 解决的问题。 [0004]近年来随着纳米技术的发展， 纳米药物在癌症治疗中的应用逐渐成为热点。 由于 瘤纳米材料独特的物理化学特性， 使其在癌症的诊疗上具有独特的优势。 此外， 已有很多研 究报道纳米材料载药可 以协同化疗药物杀伤肿瘤。 如脂质体(Liposomes)、 聚合物纳米粒 (Polymeric  nanoparticles )、 聚合物胶束( Polymeric  micelles)、 白蛋白结合纳米粒 (Protein ‑bound nanoparticles)、 无机纳米粒(Inorganic  nanoparticles)等。 有文献表 明， 血管生成拟态在肿瘤的发生、 发展以及转移 等多个过程中发挥着 重要的调节作用， 在很 多肿瘤细胞中血管生成拟态信号通路异常激活， 导致抗肿瘤血管生成的治疗效果差强人 意。 因此血管生 成拟态信号通路是肿瘤治疗的重要靶点， 大量研究表明， 血管生成拟态信号 通路抑制剂不仅可以抑制肿瘤细胞的生长增殖， 而且可以改善抗血管生成的耐药性， 为肿 瘤的治疗开辟了新的途径。 [0005]马钱子碱别名番木鳖， 出自 《本草纲目》 ， 具有抑制肿瘤细胞增殖、 诱导肿瘤细胞凋 亡、 抗癌镇痛等作用。 脂质体具有较高的载药率、 良好的稳定性以及生物安全性等优点。 包 载马钱子碱的脂质体经TD ‑1的修饰， 通过透 皮给药有望成为一种新型的适用于难治性及耐 药性肿瘤的治疗策略。 综上， 发明一种TD ‑1修饰的马钱子碱脂质体载药系统的制备方法及 其应用很有必要。 [0006]鉴于上述 缺陷， 本发明创作者经 过长时间的研究和实 践终于获得了 本发明。 发明内容 [0007]本发明的目的在于解决如何在提高癌症治疗效果的情 况下， 降低药物的使用浓度 来减轻对病人的毒副反应的问题， 提供了一种TD ‑1修饰的脂质体载药系统、 制备方法及其说　明　书 1/6 页 3 CN 114272211 A 3