(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111636606.0 (22)申请日 2021.12.2 9 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO： M 2021 1214 2021.09.24 (71)申请人 浙江大学 地址 310058 浙江省杭州市西湖区余杭塘 路866号 (72)发明人 吴斌　 (74)专利代理 机构 杭州天勤知识产权代理有限 公司 33224 代理人 韩聪 (51)Int.Cl. C07D 498/14(2006.01) C07D 209/34(2006.01) A61K 31/5383(2006.01)A61K 31/405(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C12P 17/18(2006.01) C12P 17/10(2006.01) C12R 1/66(2006.01) (54)发明名称 一种二酮吗啉生物碱化合物及其制备方法 和应用 (57)摘要 本发明公开了一种二酮吗啉生物碱化合物 及其制备方法和应用， 属于海洋真菌活性成分分 析技术领域。 本发明从保藏号为CCTCC  M  20211214的曲霉属真菌Aspergillus   cf.terreus  CXX‑158‑20的发酵培养物中提取、 分离获得了3个具有新颖结构的二酮吗啉生物碱 化合物， 结构式如式( Ⅰ)‑(Ⅲ)所示。 所述二酮吗 啉生物碱化合物具有较好的抗肿瘤活性， 尤其针 对宫颈癌和肺癌， 在制药领域具有良好的开发前 景。 权利要求书2页 说明书11页 附图3页 CN 114230578 A 2022.03.25 CN 114230578 A 1.一种二酮吗啉生物碱化 合物， 其特 征在于， 所述 化合物的结构式选自式( Ⅰ)‑(Ⅲ)， 2.如权利要求1所述的二酮吗啉生物碱化合物的制备方法， 其特征在于， 包括以下步 骤： (1)将保藏号为CCTCC  NO： M 20211214的曲霉属真菌(Asper gillus cf.terreus)CXX ‑ 158‑20活化后接种于大米固体培 养基中， 20 ‑30℃静态培 养10‑40天； (2)发酵培 养结束后， 分离得到 菌丝体和发酵 液； (3)将菌丝体加入甲醇中浸提， 分离得到浸提液， 浸提液浓缩后用蒸馏水混悬， 得到水 混悬液， 然后用乙酸乙酯对 水混悬液进 行萃取， 萃取液分离纯化后， 制得二酮吗啉生物碱化 合物； 利用乙酸乙酯对发酵 液进行萃取， 分离纯化制得二酮吗啉生物碱化 合物； 所述分离纯化包括： a、 将萃取液进行正相硅胶柱层析分离， 依次以体积比9:1、 8:1、 7: 1、 6:1、 5:1、 4:1、 3:1、 2:1、 1:1、 1:3、 1:9的正己烷/乙酸乙酯的混合液或者石油醚/乙酸乙酯 混合液进行梯度洗脱， 收集体积比6:1和5:1的馏分； b、 5:1的馏分用氯仿重结晶得到粗结晶 a， 再利用高效液相色谱分离， 流动相为65％甲醇/水， 流速为3mL/min， 收集保留时间 23.3min的馏分， 得到结构式如式( Ⅰ)的化合物I， 收集保留时间28.0min的馏分， 得到结构式 如式(Ⅱ)的化合物II； 6:1的馏分用体积比为1:5的甲醇/氯仿重结晶得到粗结晶b， 再利用 高效液相色谱分离， 流动相为68％甲醇/水， 流速为3mL/min， 收集保留时间34.2min的馏分， 得到结构式如式( Ⅲ)的化合物III； 或者， 步骤b中， 合 并6:1和5:1的馏分， 进行反相硅胶柱层析， 依次以体积比1:9、 2:8、 3: 7、 4:6、 5:5、 6:4、 7:3、 8:2、 9:1的甲醇/水混合液进行梯度洗脱， 收集7:3馏分， 再利用凝胶 LH‑20尺寸排阻色谱分离获得 目标馏分， 继而用高效液相色谱分离， 流动相为体积比40％ ‑ 90％的甲醇/水梯度洗脱， 流速为10mL/min， 保留时间45分钟的峰为化合物I， 保留时间47分权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114230578 A 2钟的峰为 化合物II， 保留时间5 0分钟的峰为 化合物III。 3.如权利 要求2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 所述活化采用PDA培养基， 以 体积1L计， 所述的PDA培养基包括以下原料： 土豆200g、 葡萄糖20g、 琼脂20g、 余量为H2O， pH 自然。 4.如权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 所述大米 固体培养基包括以 下原料： 每6 0g大米中添加海盐2g， 水90mL， pH为自然。 5.如权利 要求2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 发酵培养条件为25℃下静态 培养20天。 6.如权利要求1所述的二酮吗啉生物碱化 合物在制备抗肿瘤药物中的应用。 7.如权利要求6所述的应用， 其特 征在于， 所述肿瘤为宫颈癌或肺癌。 8.一种药物组合物， 其特征在于， 包括有 效剂量的如权利要求1所述的二酮吗啉生物碱 化合物和药剂学 上可接受的辅料。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114230578 A 3