(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111674514.1 (22)申请日 2021.12.31 (71)申请人 山东大学 地址 250012 山东省济南市历下区文化西 路44号 (72)发明人 张志岳　葛孝艳　李慧　郝燕云　 (74)专利代理 机构 济南圣达知识产权代理有限 公司 372 21 专利代理师 宋海海 (51)Int.Cl. A61K 47/69(2017.01) A61K 47/60(2017.01) A61K 47/58(2017.01) A61K 31/4745(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种具有化疗-免疫功能的混合三嵌段胶束 及其制备方法和应用 (57)摘要 本发明提供一种具有化疗 ‑免疫功能的混合 三嵌段胶 束及其制备方法和应用， 属于生物医药 和分子生物学技术领域。 本发明设计了一种三嵌 段有规聚合物 ‑药物偶联体并用其制备了可以顺 序响应肿瘤微酸 以及还原环境的混合聚合物纳 米胶束用于共递送喜树碱(CPT)和Toll样7/8受 体(TLR 7/8)激动剂IMDQ。 经瘤内注射后， 由于微 肿瘤酸性环境， PEPEMA质子化并变为带正电荷的 亲水片段， 促进胶束分解为PCP T和PIMDQ， 最终在 近端瘤和远端肿瘤中引发了强烈的抗肿瘤免疫 反应， 从而为缓解肿瘤免疫抑制微环境、 引发持 久的抗肿瘤免疫反应、 消除实体瘤的化学免疫治 疗提供了一个有前景的平台， 具有良好的实际应 用之价值。 权利要求书3页 说明书11页 附图8页 CN 114887076 A 2022.08.12 CN 114887076 A 1.一种具有化疗 ‑免疫功能的混合三嵌段胶束， 其特征在于， 所述胶束包括： 亲水性聚 (乙二醇)外层、 疏水性聚(2 ‑(N‑乙基‑N‑丙基氨基)乙基甲基丙烯酸乙酯)中间层和疏水性 药物内核。 2.如权利要求1所述的混合三嵌段胶束， 其特征在于， 所述疏水性药物包括聚还原反应 性喜树碱前 药和/或聚IMDQ。 3.如权利要求1所述的混合 三嵌段胶束， 其特 征在于， 所述胶束为纳米级胶束。 4.权利要求1 ‑3任一项所述混合三嵌段胶束的制备方法， 其特征在于， 所述制备方法包 括： S1、 合成聚乙二醇 ‑4‑氰基‑4‑[[(十二烷硫基)硫酮甲基]硫基]戊酸(PEG ‑DCT)； S2、 合成2 ‑(N‑乙基‑N‑丙基氨基)甲基丙烯酸乙酯(EPE MA)单体； S3、 合成丙烯酰丙酮肟(A A)； S4、 合成还原响应喜树碱单体(OH ‑2S‑CPT)； S5、 合成三嵌段聚合物 ‑喜树碱偶联体(PEG ‑PEPEMA‑PCPT)； S6、 合成三嵌段聚合物 ‑IMDQ偶联体(PEG ‑PEPEMA‑PIMDQ)。 5.如权利要求 4所述的制备 方法， 其特 征在于， 所述步骤S1具体方法包括： 将4‑氰基‑4‑[[(十二烷硫基)硫酮甲基]硫基]戊酸(DCT)、 4 ‑二甲氨基吡啶(DMAP)和N, N‑二环已基碳二亚胺(D CC)溶解在无水二氯甲烷中进行室温搅拌得混合物； 随后， 将溶解在 无水二氯甲烷中的聚乙二醇加入上述混合物； 将反应液在室温下持续搅拌， 过滤反应液， 取 滤液， 析出纯化后即得； 优选的， 所述4 ‑氰基‑4‑[[(十二烷硫基)硫酮甲基]硫基]戊酸、 4 ‑二甲氨基吡啶和N,N ‑ 二环已基碳二亚胺和 聚乙二醇的摩尔比为0.1 ‑1： 0.1‑1： 0.1‑1： 0.1‑0.5； 优选为0.403： 0.403： 0.403： 0.31； 优选的， 所述析 出纯化的具体步骤 包括： 将浓缩后的滤液加入冷乙醚中析出沉淀； 将离心所得的沉淀物用无水二氯甲烷复溶 后， 再加入冷乙醚中进行沉淀并离心， 重复2 ‑3次； 最后将所得沉淀收集起来， 干燥后 即得； 或， 所述步骤S2具体方法包括： 将N‑乙基乙醇胺、 溴丙烷、 Na2CO3溶于乙醇中， 然后加热搅拌， 过滤混合物， 浓缩所得滤 液， 用无水二氯甲烷萃取， 减压蒸发， 即得2 ‑(N‑乙基‑N‑丙基)乙醇胺； 然后将2 ‑(N‑乙基‑N‑ 丙基)乙醇胺、 三乙胺溶于乙腈中， 然后将此混合物置于低温搅拌得混合液； 随后， 将甲基丙 烯酰氯加入上述混合液中； 将所得混合物在低温下搅拌， 再将其移至 室温继续搅拌， 过滤混 合物， 所得滤液用无水二氯甲烷萃取， 旋蒸浓 缩， 得到单体EPE MA； 优选的， 所述N ‑乙基乙醇胺、 溴丙烷、 Na2CO3的摩尔比为0.1 ‑0.5:0.1‑0.6： 0.15 ‑1.0， 优 选为0.3:0.3 6:0.45； 优选的， 所述2 ‑(N‑乙基‑N‑丙基)乙醇胺、 三乙胺和甲基丙烯酰氯的摩尔比为0.1 ‑1: 0.1‑1:0.1‑1， 优选为1:1:1。 6.如权利要求 4所述的制备 方法， 其特 征在于， 所述步骤S3具体方法包括：权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114887076 A 2将丙酮肟水溶液置于低温冷肼中搅拌； 在低温条件下将丙烯酰氯缓慢加入上述溶液 中； 加毕， 将此反应液移至室温继续搅拌； 停止搅拌并静置反应液以分离水层和二氯甲烷 层； 将收集的水层用二氯甲烷萃 取， 合并所有收集的二氯甲烷层并对其进 行旋蒸浓缩； 浓缩 后的有机相洗涤、 干燥、 纯化后即得； 优选的， 所述丙酮肟和丙烯酰氯 的摩尔比为0.1 ‑1:0.1‑1， 优选为0.544:0.552； 所述有 机相洗涤、 干燥、 纯化的具体步骤包括： 浓缩后的有机相依次用饱和碳酸氢钠水溶液和水洗 涤， 有机相用Na2SO4干燥， 旋蒸除去DC M， 即得； 或， 所述步骤S4的具体方法包括： 将2‑羟基乙基二硫化物、 TEA溶于四氢呋喃并将此混合物冷却至低温； 将甲基丙烯酰氯 加入其中， 将混合物在低温下搅拌并在室温下搅拌过夜； 过滤混合物， 所得滤液用乙酸乙酯 萃取， 减压浓缩， 得淡黄色油状液体； 随后， 将CPT、 4 ‑二甲氨基吡啶(DMAP)、 三光气溶解在无 水二氯甲烷中， 于室温下持续搅拌； 随后， 缓慢加入溶解于无水二氯甲烷中的2 ‑[(2‑羟基乙 基)二硫代]2 ‑甲基‑2‑丙烯酸乙酯， 并将反应溶液连续搅拌过夜； 通过减压除去溶剂， 硅胶 柱色谱即得； 优选的， 2 ‑羟基乙基二硫化物、 TEA和甲基丙烯酰氯 的摩尔比为0.1 ‑1:0.1‑1:0.1‑1， 优 选为1:1:1； 优选的， 所述CPT、 4 ‑二甲氨基吡啶(DMAP)、 三光气、 2 ‑[(2‑羟基乙基)二硫代]2 ‑甲基‑ 2‑丙烯酸乙酯的摩尔比为1 ‑5:10‑15:1‑3:2‑5， 优选为2.87:1 1.48:1.15:3.157。 7.如权利要求 4所述的制备 方法， 其特 征在于， 所述 步骤S5的具体方法包括： 首先， 通过RAFT聚合反应合成PEG ‑PEPEMA两嵌段链转移剂， 包括： 将PEG ‑DCT、 EPEMA、 2, 2'‑偶氮双(2 ‑甲基丙腈)(AIBN)溶解在1,4 ‑二氧六环里， 经冻融循环除氧后， 将反应液置于 高温中以引发聚合反应并搅拌， 将反应液溶液冷却至室温停止反应， 并用去离子水透析 的 方法对聚合物进行 纯化即得； 然后， 将PEG ‑PEPEMA、 OH ‑2S‑CPT、 AIBN溶于1,4 ‑二氧六环和二甲亚砜(DMSO)的混合溶 液中， 经冻融循环除氧后， 将反应液置于高温 中以引发聚合反应并搅拌， 将反应液溶液冷却 至室温停止反应， 并通过在冷乙醚中沉淀纯化聚合物前 药， 将沉淀 干燥后即得； 优选的， 所述PEG ‑DCT、 EPEMA、 2,2' ‑偶氮双(2 ‑甲基丙腈)的摩尔比为0.01 ‑0.1:1‑5: 0.01‑0.03， 优选为0.0 5:2.51:0.015； 优选的， 所述PEG ‑PEPEMA、 OH ‑2S‑CPT、 AIBN的摩尔比为0.0 1‑0.05:0.5 ‑1:0.001‑0.01， 优选为0.024:0.725:0.0 07； 优选的， 所述1,4 ‑二氧六环和二甲亚砜的混合溶液中， 二者体积比为0.5 ‑5:1， 优选为 1:1； 或， 所述步骤S6中， 具体合成方法包括： 所述PEG‑PEPEMA‑PIMDQ经IMDQ取代PEG ‑PEPEMA‑PAA聚合物上的AA部分得到； 具体的， 首先合成PEG ‑PEPEMA‑PAA： 将PEG ‑PEPEMA、 AA、 AIBN溶解于1,4 ‑二氧六环里， 经冻融循环除 氧后， 将反应液置于高温中以引发聚合反应并搅拌， 并用去离子水透析 的方法对聚合物进 行纯化即得； 利用IMDQ上的氨基取代了PEG ‑PEPEMA‑PAA上的PAA部分； 具体的， 将PEG ‑PEPEMA‑PAA、 IMDQ、 TEA溶于1,4 ‑二氧六环中， 在惰性气体氛围下， 升温搅拌； 冷却反应液并用水透析过权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 114887076 A 3