(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111610856.7 (22)申请日 2021.12.27 (71)申请人 中国科学技术大学 地址 230026 安徽省合肥市包河区金寨路 96号 (72)发明人 李麦云　刘扬中　 (74)专利代理 机构 安徽省合肥新 安专利代理有 限责任公司 34101 代理人 乔恒婷 (51)Int.Cl. A61K 47/65(2017.01) A61K 9/127(2006.01) A61K 31/7105(2006.01) A61P 35/00(2006.01) B82Y 5/00(2011.01)B82Y 40/00(2011.01) C12N 15/113(2010.01) C07K 7/06(2006.01) A61K 31/282(2006.01) (54)发明名称 一种具有运输siRNA功能的铂肽共聚物的制 备方法及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种具有运输siRNA功能的铂 肽共聚物的制备方法与应用， 是以具有抗肿瘤作 用的羧基铂为交联分子， 将含有精氨 酸与赖氨酸 的多肽交联形成铂肽共聚物， 再利用静电相互作 用与具有诱导细胞凋亡的siRNA混合组装， 最后 用负电荷脂质体包裹， 形成稳定的纳米复合物， 最终制成化学/基因协 同治疗的纳米传递系统。 该纳米传递系统解决了单一疗法治疗效果不佳， siRNA到达肿瘤途中易被降解或清除的问题， 具 有水溶性， 分散性好， 稳定性高和生物相容性好 等优点。 权利要求书1页 说明书6页 附图3页 CN 114209848 A 2022.03.22 CN 114209848 A 1.一种具有运输siRNA 功能的铂肽共聚物的制备 方法， 其特 征在于： 以具有抗肿瘤作用的羧基铂为交联分子， 与多肽进行交联形成铂肽共聚物， 再利用静 电相互作用与siRNA混合组装， 最后用负电荷脂质体包裹， 形成稳定的纳米复合物； 所述多肽包 含2‑4个赖氨酸残基以及2 ‑4个精氨酸残基； 所述siRNA具有抑制细胞增殖的功能； 所述负电荷脂质体包括 生育酚聚乙二醇琥珀酸酯脂质体或双十六烷基磷酸酯脂质体。 2.根据权利要求1所述的制备 方法， 其特 征在于包括如下步骤： 步骤1： 铂肽交联 将多肽溶于吡啶水溶液或pH＝7.4的PBS溶液中； 再将Pt(IV) ‑COOH、 N‑羟基丁二酰亚胺 和1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐溶于水中反应10～60min； 然后将 两种溶 液混合均匀， 室温避光搅拌12～24h， 冻干除去溶剂后， 分别用氯仿和丙酮提纯除去有机小 分子杂质， 再通过凝胶色谱柱除去杂质， 得到铂肽交联产物Pt ‑AA； 步骤2： Pt ‑AA‑RNA 将铂肽交联产物Pt ‑AA和RNA在常温下混合均匀后在超声中组装； 步骤3： Liposome‑Pt‑AA‑RNA 3a、 阴离子脂质体： 称取大豆卵磷脂、 生育酚聚乙二醇琥珀酸酯和胆固醇， 并将其溶解 在氯仿中， 通过旋转蒸发除去溶剂， 形成均匀的脂质膜， 然后加水， 并通过超声处理和过滤 膜得到阴离 子脂质体； 3b、 将阴离 子脂质体水化， 与Pt ‑AA‑RNA混合后进行超声得到L iposome‑Pt‑AA‑RNA。 3.根据权利要求2所述的制备 方法， 其特 征在于： 步骤1中， Pt(IV) ‑COOH添加的摩尔量是多肽摩尔量的0.5～4倍， N ‑羟基丁二酰亚胺添 加的摩尔量是多肽摩尔量的4～8倍， 1 ‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐添加 的摩尔量是多肽 摩尔量的10～ 20倍。 4.根据权利要求2所述的制备 方法， 其特 征在于： 步骤2中， 铂肽交联产物Pt ‑AA和RNA的质量比为5 0:1～200:1。 5.根据权利要求2所述的制备 方法， 其特 征在于： 步骤3中， 脂质体和Pt ‑AA‑RNA的质量比为2： 1～16： 1。 6.根据权利要求1 ‑5中所述的任一项制备方法制得的具有运输siRNA功能的铂肽共聚 物的应用， 其特征在于： 是在癌症靶向治疗过程中作为化疗和基因协同治疗的纳米传递系 统使用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114209848 A 2一种具有运输siRNA功能的铂肽共聚物的制备方 法及其应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医学应用领域， 具体涉及一种具有运输siRNA功能的铂肽共聚物 的制备方法及其应用。 背景技术 [0002]在当今社会， 癌症是一种严重危害人类健康和生命的疾病。 化疗是目前癌症治疗 最常用和最有效的方法之一。 在各类化疗药物中， 铂类药物因其抗癌谱广， 治疗效果好而在 临床治疗中应用广泛， 尤其是顺铂及其衍生物。 然而Pt(II)类药物在细胞质环境中易被灭 活， 从而影 响其治疗效果， 用预氧化的Pt(IV)配合物被认 为是解决这个问题的有效方法， 而 且可以在其轴向位置引入新基团， 有更多化学修饰的可能。 [0003]RNA干扰(RNAi)具有优越的能力， 可以通过敲除靶基因来诱导广泛的遗传靶点 的 有效、 持久和特异性沉默， 从而达到治疗癌症的效果。 siRNA与其他癌症治疗药物相比具有 一定的优势， siRNA可以在极低的细胞内浓度下以高度有序特异性的方式提供高效的基因 沉默， 并且几乎没有任何毒副作用。 但因siRNA是一种带负电荷的大分子， 容易被血清中的 核酸酶所降解， 也易被肾脏迅速清除， 同时由于其阴离子电荷且亲水性高而导致不易穿过 细胞膜， 细胞摄取量低。 因此如何将siRNA运输 到目标癌组织中仍然是一个不小的挑战。 [0004]化疗和基因治疗的联合通过使用选择性化疗药物和功能性基因而展现出巨大的 癌症治疗潜力， 不仅可以克服多种药物的耐药性， 还能达到良好的协同治疗效果。 目前已有 各种化疗药物和功能性基因的共传递系统被报道， 证明了此类药物系统具有明显增强的肿 瘤治疗效果， 尤其是有通透性增强和保留效应的纳米材料， 更适合开发成靶向肿瘤的传递 系统。 但是 由于化疗药物和功能性基因不能独立地负载进纳米颗粒中， 从而影响载体结构 大小及其负载量， 同时由于 分子之间的干扰， 基因和药物分子也有 可能发生 非特异性泄漏， 这可能会在体 循环过程中造成不必要的副作用。 [0005]综上所述， 如何开发一个化疗药物和功能性基因互不干扰， 尺寸合适， 稳定性高， 能够安全高效地共传递化疗药物和功 能性基因到目标癌组织的系统成为本领域科研人员 亟待解决的问题。 发明内容 [0006]本发明旨在提供一种具有运输siRNA功能的铂肽共聚物的制备方法及其应用， 以 避免化疗药物和功能性基因(RNA)的互相干扰， 减少RNA在运输过程中的损失， 能够安全高 效地共传递 化疗药物和功能性基因到目标癌组织， 实现化疗和基因治疗的协同效果。 [0007]本发明具有运输siRNA功能的铂肽共聚物的制备方法， 其特征是将羧基铂与多肽 进行交联形成铂肽 共聚物， 再利用静电相互作用与si RNA混合组装， 最后用负电荷脂质体包 裹， 形成稳定的纳米复合物。 [0008]本发明所采用的多肽具有2 ‑4个赖氨酸残基用于羧基铂的交联反应、 具有2 ‑4个精 氨酸使多肽在赖氨酸反应后仍具有正电荷， 例如KRKRKR或KRF KRFRF。说　明　书 1/6 页 3 CN 114209848 A 3