(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111621364.8 (22)申请日 2021.12.28 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 114213428 A (43)申请公布日 2022.03.22 (83)生物保 藏信息 CCTCC NO： M 2021 1214 2021.09.24 (73)专利权人 浙江大学 地址 310058 浙江省杭州市西湖区余杭塘 路866号 (72)发明人 吴斌　 (74)专利代理 机构 杭州天勤知识产权代理有限 公司 33224 专利代理师 韩聪(51)Int.Cl. C07D 493/04(2006.01) A61K 31/407(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C12P 17/18(2006.01) C12R 1/66(2006.01) 审查员 黄清昌 (54)发明名称 一种吲哚生物碱化合物及其制备方法和应 用 (57)摘要 本发明公开了一种吲哚生物碱化合物及其 制备方法和应用， 属于海洋真菌活性成分分析技 术领域。 本发明从海洋真菌Aspergillus   cf.terreus  CXX‑158‑20的发酵培养物中提取、 分离获得了4个具有新颖结构的吲哚生物碱化合 物， 其结构式如式( Ⅰ)‑(Ⅳ)所示。 所述吲哚生物 碱化合物具有较好的抗肿瘤活性， 在制药领域具 有良好的开发前 景。 权利要求书2页 说明书11页 附图4页 CN 114213428 B 2022.12.06 CN 114213428 B 1.一种吲哚生物碱化 合物， 其特 征在于， 所述 化合物的结构式选自式( Ⅱ)‑(Ⅳ)， 2.一种吲哚生物碱化 合物的制备 方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： (1)将保藏号为CCTCC  NO： M 20211214的曲霉属真菌(Asper gillus cf.terreus)CXX ‑ 158‑20活化后接种于大米固体培 养基中， 20 ‑30℃静态培 养10‑40天； (2)发酵培 养结束后， 分离得到 菌丝体和发酵 液； (3)将菌丝体加入甲醇中浸提， 分离得到浸提液， 浸提液浓缩后用蒸馏水混悬， 得到水 混悬液， 然后用乙酸乙酯对水混悬液进行萃取， 萃取液分离纯化后， 制得吲 哚生物碱化合 物； 或者， 利用乙酸乙酯对发酵 液进行萃取， 萃取 液分离纯化制得吲哚生物碱化 合物； 所述分离纯化包括： 萃取液利用正相硅胶柱层析， 依次以体积比为100:0， 98:2， 95:5， 90:10， 80:20， 70:30， 40:60， 0:100的石油醚/乙酸乙酯混合液梯度洗脱， 收集80:20馏分利 用甲醇重结晶得到结构式如式( Ⅰ)所示的化合物I； 收集70:30馏分用体积比3:1的甲醇/乙 酸乙酯混合液重结晶得到结构式如式( Ⅱ)所示的化 合物II； 萃取液利用反相硅胶柱层析， 以体积比为30％～100％的甲醇/水溶液梯度洗脱， 收集 85％～90％馏分得到结构式如式( Ⅲ)所示的化合物III； 收集90％～95％馏分得到结构式 如式(Ⅳ)所示的化 合物VI； 或者， 将萃取液进行正相 硅胶柱层析， 依次以体积比9:1、 8:1、 7:1、 6:1、 5:1、 4:1、 3:1、 2:1、 1:1、 1:3、 1:9的石油醚/乙酸乙酯混合液和乙酸乙酯进行梯度洗脱， 收集体积比4:1的 石油醚/乙酸乙酯混合液洗脱出的子馏分a和 3:1的子馏分b； 子馏分a通过制备型高效液相 色谱层析得到化合物I和化合物II； 子馏分b先利用反相硅胶柱层析， 再经制备型高效液相 色谱层析 得到III和化合物VI；权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 114213428 B 23.如权利 要求2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 所述活化采用PDA培养基， 以 体积1L计， 所述的PDA培养基包括以下原料： 土豆200g、 葡萄糖20g、 琼脂20g、 余量为H2O， pH 自然。 4.如权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 所述大米 固体培养基包括以 下原料： 每5 0g大米中添加75mL水， pH为自然。 5.如权利 要求2所述的制备方法， 其特征在于， 步骤(1)中， 发酵培养条件为25℃下静态 培养20天。 6.如权利要求1所述的吲哚生物碱化 合物在制备抗肿瘤药物中的应用。 7.如权利要求6所述的应用， 其特 征在于， 所述肿瘤为宫颈癌或肺癌。 8.一种药物组合物， 其特征在于， 包括有 效剂量的如权利要求1所述的吲哚生物碱化合 物和药学上可接受的载体。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 114213428 B 3