(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111596238.1 (22)申请日 2021.12.24 (71)申请人 上海大学 地址 200444 上海市宝山区上 大路99号 (72)发明人 曹傲能　刘琪　盛玲洁　刘元元　 王海芳　 (74)专利代理 机构 上海上大专利事务所(普通 合伙) 3120 5 代理人 顾勇华 (51)Int.Cl. C07K 16/32(2006.01) G01N 33/574(2006.01) B82Y 5/00(2011.01) B82Y 30/00(2011.01) A61K 39/395(2006.01)A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种基于金纳米粒子的特异性靶向MDM2蛋 白的人工抗体及其应用 (57)摘要 本发明公开了一种基于金纳米粒子的特异 性靶向MDM2蛋白的人工抗体及其应用， 本发明人 工抗体是由金纳米粒子和一段特殊设计的多肽 序列组成， 制备合成的纳米金人工抗体能够特异 性识别MDM2蛋白， 并且多肽经调控嫁接在金纳米 粒子上能够稳定天然蛋白p53的天然构象。 该人 工抗体旨在能够与MDM2蛋白特异性作用， 可以实 现与天然p53蛋白一样的抑癌能力， 因此， 该人工 抗体在对MDM2分析检测及癌症治疗中具有潜在 的应用价 值。 权利要求书1页 说明书4页 附图3页 CN 114292332 A 2022.04.08 CN 114292332 A 1.一种基于金纳米粒子的特异性靶向MDM2蛋白的人工抗体， 其特征在于： 作为特异性 识别MDM2 蛋白的纳米金人工抗体， 由金纳米粒子和经构象控制的多肽片段组成， 所述多肽 片段包含α‑螺旋和Loop区混合结构元 素。 2.根据权利要求1所述基于金纳米粒子的特异性靶向MDM2蛋白的人工抗体， 其特征在 于： 利用Au ‑S键， 将多肽两端嫁接到金纳米粒子表面， 每1nm2金纳米粒子表面上固定0.05～ 3个多肽， 利用金原子的流动性使 多肽链处于合 适的空间位置， 从而构建α ‑螺旋构象结构。 3.根据权利要求2所述基于金纳米粒子的特异性靶向MDM2蛋白的人工抗体， 其特征在 于： 多肽序列为SP20： LSQETFCDLWKLLCEN或SP30： SQDTFSCLWCLLPEN或SP40： SQDTFSCL WACLPEN。 4.根据权利要求3所述基于金纳米粒子的特异性靶向MDM2蛋白的人工抗体， 其特征在 于： 所用多肽片段根据α ‑螺旋结构中每3.6个氨基酸残基螺旋上升一圈的特点， 分别在i和i +7(SP20),i和i+3(SP30)以及i和i+4(SP40)位置引入两个半胱氨酸， 利用半胱氨酸的巯基 与金原子形成Au ‑S键， 将多肽两端嫁接到金纳米粒子表 面； 同时位点i的选择是为了减小 金 纳米粒子对多肽与MDM2蛋白相结合时的空间位阻。 5.一种权利要求1所述基于金纳米粒子的特异性靶向MDM2蛋白的人工抗体的应用， 其 特征在于： MDM2蛋白的人工抗体能特异性识别MDM2蛋白， 应用于在对MDM2蛋白分析检测方 法中， 或者应用于癌症治疗的药物。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 114292332 A 2一种基于金纳米粒子的特异性靶向MDM2蛋白的 人工抗体及其 应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物纳 米医学领域， 特别提供一种基于金纳 米粒子的特异性靶向MDM2 蛋白的人工抗体及其制备与应用， 制备合成的纳米金人工抗体能够特异性识别MDM2蛋白， 并且多肽经调控嫁接在金纳米粒子上能够重构并稳定天然蛋白p5 3的α‑螺旋构象。 背景技术 [0002]为了赋予纳 米粒子生物医学功能， 解决这一问题 常见的方法是将一些功能基团共 价修饰到纳米粒子上， 但是将非功能基团共价修饰到纳米粒子上进行功能和构象的重建， 目前还无法实现。 公开号为CN105884888A和CN10669989 0A的专利文献 公开的“构象工程 ”这 一设计方法， 可以将非功能基团嫁接到纳米粒子上， 并完成了构象和功能的重建， 但其多肽 片段是只含有Loop区单一元素的片段， 而不含α ‑螺旋构象， 尚不明确该技术是否能够应用 于α‑螺旋多肽的构象重建。 [0003]p53是一种最广泛研究的抑癌基因， p53蛋白在细胞中充当基因组的守护者， 因为 它有助于基因组的完整性。 肿瘤抑制蛋白p53作为一种转录因子， 诱导几个下游靶点的表 达， 这些靶点在调节细胞周期、 细胞凋亡、 DNA 修复、 细胞衰 老以及其他细胞机制等方面有很 大的作用。 正常细胞内p53与其靶蛋白MDM2维持平衡； 但在很多肿瘤细胞中， MDM2过表达。 引 入与MDM2特异性结合的抑制剂， 就可以释放p53蛋白， 起到抑制肿 瘤生长的作用， 因而研发 与MDM2特异性结合的抑制剂， 是当前研发肿瘤治疗药物的一个重要方向。 发明内容 [0004]为了解决现有技术问题， 本发明的目的在于克服已有技术存在的不足， 提供一种 基于金纳米粒子的特异 性靶向MD M2蛋白的人工抗体及其应用， 本发明合 成的人工抗体能够 特异性靶向MDM2， 可以实现与天然p53蛋白一样的抑癌能力， 并且通过构象工程技术， 将多 肽经调控嫁接在金纳米粒子上能够重构并稳定天然蛋白p53的α ‑螺旋构象。 本发明人工抗 体减小了金纳米粒子对多肽与MD M2蛋白相结合时的空间位阻， 从而 形成的人工抗体与MD M2 蛋白结合力更强。 [0005]为达到上述目的， 本发明采用如下技 术方案： [0006]一种基于金纳米粒子的特异性靶向MDM2蛋白的人工抗体， 作为特异性识别MDM2蛋 白的纳米金人工抗体， 由金纳米粒子和经构象控制的多肽片段组成， 所述多肽片段包含α ‑ 螺旋和Loop区混合结构元 素。 [0007]优选地， 利用Au ‑S键， 将多肽两端嫁接到金纳米粒子表面， 每1nm2金纳米粒子表面 上固定0.05～3个多肽， 利用金原子的流动性使多肽链处于合适的空间位置， 从而构建α ‑螺 旋构象结构。 [0008]进一步优选地， 多肽序列为SP20： LSQETFCDLWKLLCEN或SP30： SQDTFSCLWCLLPEN或 SP40： SQDTFSCL WACLPEN。说　明　书 1/4 页 3 CN 114292332 A 3