(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202111620713.4 (22)申请日 2021.12.28 (71)申请人 上海纳米技 术及应用国家工程研究 中心有限公司 地址 201109 上海市闵行区剑川路468号 (72)发明人 崔大祥　朱君　朱竞尧　徐艳　 杨迪诚　 (74)专利代理 机构 上海东亚专利商标代理有限 公司 31208 代理人 董梅 (51)Int.Cl. A61K 9/50(2006.01) A61K 41/00(2020.01) A61K 49/22(2006.01) A61K 47/36(2006.01)A61K 47/46(2006.01) A61K 51/06(2006.01) A61K 51/12(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种多功能肠道诊疗制剂制备方法及其产 品 (57)摘要 本发明提出了一种多功能肠道诊疗制剂制 备方法及其产品， 其多功能肠道诊疗制剂产品同 时具有PET成像、 超声成像和光热治疗的多功能 探针， 可以同时满足肿瘤精准定位、 高灵敏长周 期成像， 提高了探针对肿瘤的靶向成像效率。 采 用巨噬细胞作为药物载体 “蓄水池”。 通过巨噬细 胞转运作用， 增强载体在肿瘤部位富集， 而壳聚 糖能有效地吸附在肠道粘膜表面。18F类核素作 为PET的显像剂。 通过PET成像确定肿瘤位置和转 移灶， 实现全身肿瘤的精准定位。 氟碳化合物作 为超声造影剂。 通过超声成像， 提高局部肿瘤的 诊断能力。 金纳米棒具有光热作用， 具有对肿瘤 部位进行治 疗的作用。 权利要求书3页 说明书5页 CN 114306276 A 2022.04.12 CN 114306276 A 1.一种多功能肠道诊疗制剂的制备 方法， 其特 征在于， 包括下述 步骤： （1） 壳聚糖纳米粒的制备 取30 mg 壳寡糖、 17mg乙二酸四乙胺 （EDTA） 溶于10mL去离子水中， 再加入2 ‑5 mg金纳 米棒， 超声分散均匀； 在磁力搅拌下逐滴添加无水乙醇直至体系颜色变为乳光色， 加入30 μ L25%的戊二醛溶液交联4h， 离心收集纳米球； 取100 μL靶向抗体溶于10mL去离子水中， 加入 12mg 1‑(3‑二甲氨基丙基) ‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐 （EDC） 和8mg  N‑羟基琥珀酰亚胺 （NHS） 于室温下活化抗体羧基2 ‑4h； 向反应体系加入10 ‑15mg纳米球， 搅拌4h后离心收集， 使用去 离子水清洗三次除去未反应的抗体， 获得壳聚糖纳米粒产物； （2） 含氟载 氧乳剂的制备 在10毫升体积比为1:0.5 ‑1:2的盐溶液/乙醇的溶剂中， 加入质量浓度分别为1% ‑50%的 氟碳化合物、18F的1,2‑二棕榈酸甘油酯18F‑DP和甘露糖修饰的二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺 Man‑DSPE， 另外， 再加 入质量浓度 分别为0%‑10%的乳化剂和/或其他助剂， 在室温下采用匀 浆机以一定的速率进行间歇性搅拌， 冷却后离心， 取 上清液即可 得到含氟载 氧乳剂； （3） 巨噬细胞包载壳聚糖纳米粒和/或含氟载 氧乳剂 将细胞密度为5000个/孔板肠道M2型巨噬细胞与所述的壳聚糖纳米粒和/或所述的含 氟载氧乳剂共孵育12 ‑72小时， 得到巨噬细胞包载的壳聚糖纳米粒和含氟载氧乳剂， 实现多 功能肠道诊疗制剂。 2.根据权利要求1所述多功能肠道诊疗制剂的制备方法， 其特征在于， 所述的金纳米棒 的直径为 40‑100 nm， 长径比为2 ‑5。 3.根据权利要求1所述多功能肠道诊疗制剂的制备方法， 其特征在于， 所述的靶向抗体 为5‑羟色胺受体3抗体Anti ‑5‑HT3R、 血管内皮生长因子抗体Anti ‑VEGF、 组胺受体H1抗体 Anti‑HRH1、 类胰蛋白酶多克隆抗体Po lyclonal Antibody to Tryptase中的一种。 4.根据权利要求1所述多功能肠道诊疗制剂的制备方法， 其特征在于， 所述的氟碳化合 物为全氟环醚、 全氟萘烷、 全氟甲基环已基哌啶、 全氟溴辛烷、 1 ‑溴十五氟庚烷、 1 ‑溴十三氟 己烷中的一种； 所述的盐溶液为生理盐水、 磷酸盐缓冲液、 醋酸盐缓冲液、 三强甲氨基甲烷缓冲液、 巴 比妥缓冲液、 甲酸钠缓冲液、 醋酸 ‑锂盐缓冲液、 醋酸 ‑醋酸钠缓冲液、 醋酸 ‑醋酸钾缓冲液等 无机盐溶 液的一种。 5.根据权利要求1所述多功能肠道诊疗制剂的制备方法， 其特征在于， 所述的乳化剂为 磷脂， 包括大豆卵磷脂、 蛋黄卵磷脂、 氢化卵磷脂、 氢化大豆磷脂酰胆碱、 氢化蛋磷脂酰胆 碱、 二月桂酰磷脂酰胆碱、 二肉豆寇酰磷脂酰胆碱、 二硬脂酰磷脂酰胆碱、 1 ‑肉豆寇酰 ‑2‑棕 榈酰磷脂酰胆碱、 1 ‑棕榈酰‑2‑硬脂酰磷脂酰胆碱、 1 ‑硬脂酰‑2‑棕榈酰磷脂酰胆碱、 1 ‑棕榈 酰‑2‑油酰磷脂酰胆碱、 1 ‑硬脂酰‑2‑亚油酰磷脂酰胆碱或二油酰磷脂酰胆碱、 二油酰磷脂 酰胆碱、 氢化二棕榈酰磷脂酰胆碱、 二硬脂酰磷脂酰胆碱、 二 肉豆蔻酰磷脂酸、 二棕榈酰磷 脂酸、 二硬脂酰磷脂酸、 儿肉豆莲酰磷脂酰乙二醇胺、 二棕榈酰磷脂耽乙二醇胺、 脑磷脂酰 丝氨酸、 二 肉豆蔻县磷脂酰丝氨酸、 儿棕榈酰磷脂酰丝氨酸、 蛋磷脂酰甘油、 二月桂酰磷脂 酰甘油、 二肉豆酰磷脂酰甘油、 二棕榈酰磷脂酰甘油、 脑鞘磷脂中的至少一种； 所述的助剂为聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯Tu ‑80、 椰油脂肪酸二乙醇酰胺6501、 脂肪醇 聚氧乙烯醚AEO ‑9、 月桂醇聚氧乙烯醚B rij‑35或聚乙二醇辛基苯基醚Triton  X‑100中的一权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114306276 A 2种或几种混合物。 6.根据权利要求1所述多功能肠道诊疗制剂的制备方法， 其特征在于， 所述的间歇性搅 拌为搅拌1分钟， 终止1分钟， 搅拌时间为2 ‑4小时。 7.根据权利要求1至6任一项所述多功能肠道诊疗制剂的制备方法， 其特征在于， 按下 述步骤制备： （1） 壳聚糖纳米粒的制备 取30 mg 壳寡糖、 17mg乙二酸四乙胺 （EDTA） 溶于10mL去离子水中， 再加入2mg金纳米 棒， 超声分散均匀； 在磁力搅拌下逐滴添加无水乙醇直至体系颜色变为乳光色， 加入30μ L25%的戊二醛溶液交联4h， 离心收集纳米球； 取100 μL靶向抗体Anti ‑5‑HT3R溶于10mL去离 子水中， 加入12mg  1‑(3‑二甲氨基丙基) ‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐 （EDC） 和8mg  N‑羟基琥珀 酰亚胺 （NHS） 于室温下活化抗体5 ‑羟色胺受体3羧基2 ‑4h； 向反应体系加入10 ‑15mg纳米球， 搅拌4h后离心收集， 使用去离 子水清洗三次除去未反应的抗体， 获得壳聚糖纳米粒产物； （2） 含氟载 氧乳剂的制备 在10毫升体积比为1:1的盐溶液生理盐水/乙醇的溶剂中， 加入质量浓度分别为10%的 氟碳化合物全氟环醚、 10%18F的1,2‑二棕榈酸甘油酯18F‑DP和5%甘露糖修饰的二硬脂酰基 磷脂酰乙醇胺Man ‑DSPE， 另外， 再加入质量浓度为5%的乳化剂大豆卵磷脂， 在室温下采用匀 浆机进行间歇性搅拌， 即搅拌1分钟、 终止1分钟， 搅拌时间为2小时， 冷却后离心， 取上清液 即可得到含氟载 氧乳剂； （3） 巨噬细胞包载壳聚糖纳米粒和/或含氟载 氧乳剂 将细胞密度为5000个/孔板肠道M2型巨噬细胞与所述的壳聚糖纳米粒和/或所述的含 氟载氧乳剂共孵育24小时， 得到巨噬细胞包载的壳聚糖纳米粒和含氟载氧乳剂， 得到具有 靶向功能的PET/超声 多功能肠道造影剂。 8.根据权利要求1至6任一项所述多功能肠道诊疗制剂的制备方法， 其特征在于， 按下 述步骤制备： （1） 壳聚糖纳米粒的制备 取30 mg 壳寡糖、 10mg乙二酸四乙胺 （EDTA） 溶于10mL去离子水中， 再加入5mg金纳米 棒， 超声分散均匀； 在磁力搅拌下逐滴添加无水乙醇直至体系颜色变为乳光色， 加入30μ L25%的戊二醛溶液交联4h， 离心收集纳米球； 取100 μL靶向抗体Anti ‑HRH1溶于10mL去离子 水中， 加入12mg  1‑(3‑二甲氨基丙基) ‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐 （EDC） 和8mg  N‑羟基琥珀酰 亚胺 （NHS） 于室温下 活化抗体组胺受体H1羧基2 ‑4h； 向反应体系加入10mg纳米球， 搅拌4h后 离心收集， 使用去离 子水清洗三次除去未反应的抗体， 获得壳聚糖纳米粒产物； （2） 含氟载 氧乳剂的制备 在10毫升体积比为1:  2的盐溶液甲酸钠缓冲液/ 乙醇的溶剂中， 加入质量浓度分别为 50%的氟碳化合物全氟环醚、 20%18F的1,2‑二棕榈酸甘油酯18F‑DP和10%甘露糖修饰的二硬 脂酰基磷脂酰乙醇胺Man ‑DSPE， 另外， 再加入质量浓度为10%的二油酰磷脂酰胆碱和2%  Tu‑ 80， 在室温下采用 匀浆机进行间歇性搅拌， 即搅拌1分钟、 终止1分钟， 搅拌时间为4小 时， 冷 却后离心， 取 上清液即可 得到含氟载 氧乳剂； （3） 巨噬细胞包载壳聚糖纳米粒和/或含氟载 氧乳剂 将细胞密度为5000个/孔板肠道M2型巨噬细胞与所述的壳聚糖纳米粒和/或所述的含权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 114306276 A 3