DB54 ICS 11.220 B 41 备案号：60763-2019 西 藏 自 治 区 地 方 标 准 DB 54/T 0159—2018 牛羊东毕吸虫毛蚴孵化诊断方法 2018-07-20 发布 西藏自治区市场监督管理局 2018-08-19 实施 发 布 DB54/T 0159—2018 目  次 前言..................................................................................................................................................................... II 1 范围................................................................................................................................................................. 1 2 术语和定义..................................................................................................................................................... 1 3 牛羊东毕吸虫病的诊断................................................................................................................................. 1 4 诊断结果......................................................................................................................................................... 2 附录 A（规范性附录） 实验用品与试剂........................................................................................................3 附录 B（规范性附录） 样本采集、保存、送检........................................................................................... 4 I DB54/T 0159—2018 前  言 本标准按照GB/T1.1的规则起草。 本标准由西藏自治区农牧业标准化技术委员会提出并归口。 本标准由西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所，中国农业科学院上海兽医研究所负责起草。 本标准主要起草人：刘建枝、刘金明、石斌、李浩、夏晨阳、陆珂、唐文强、朱传刚、单曲拉姆。 本标准为首次制定。 II DB54/T 0159—2018 牛羊东毕吸虫毛蚴孵化诊断方法 1 范围 本标准规定了牛羊东毕吸虫病及其流行区的定义、临床诊断、实验室诊断及结果判定等技术。 本标准适用于西藏自治区境内牛羊东毕吸虫病的诊断、防治效果考核、检疫和流行病学调查。 2 术语和定义 下列术语及定义适用于本标准。 2.1 牛羊东毕吸虫病 由扁形动物门、吸虫纲、枭形目、分体科、东毕属的各种吸虫寄生于牛、羊肠系膜静脉和门静脉系 统所引起的疾病。 2.2 东毕吸虫病流行区 存在东毕吸虫的中间宿主，有牛和羊感染的地区。 3 牛羊东毕吸虫病的诊断 3.1 临床诊断 牛、羊等家畜感染东毕吸虫后，临床症状因家畜品种及其年龄和感染强度而异。本病一般为慢性经 过的消耗性疾病，个别情况下出现急性病例。急性病例主要为幼龄牛羊或从外地新引进的牛羊在突然感 染大量尾蚴后发生。其症状为发热、食欲减退、呼吸促迫、下痢、消瘦等，可造成大批死亡。慢性病例 指感染剂量较低的吸虫后无典型病症或症状较轻者，或急性病例耐过后的慢性感染者。慢性病例的症状 为消瘦、可视粘膜苍白，略有黄染，被毛杂乱，下颌及腹部多有不同程度水肿，腹围增大，消化不良， 多有稀便或下痢；重度感染者食欲停止、久卧不起、呼吸缓慢，最后衰竭而死亡；幼畜发育停滞，母畜 不发情，不孕或流产。 来源于东毕吸虫流行区的家畜，有以上症状者，列为疑似病例，但确诊需进行实验室诊断。 3.2 3.2.1 实验室诊断 实验步骤 3.2.1.1 取样 每头（只）家畜的粪样分别进行1次独立的孵化试验。将采集的粪样分成2份，每份粪量为牛粪50g， 羊粪10g。 1 DB54/T 0159—2018 3.2.1.2 羊粪加样 取羊粪10g加入长颈平底烧瓶并编号,往长颈平底烧瓶内加入25℃水至瓶口下4cm～5cm处。 3.2.1.3 牛粪加样 将50克牛粪放入铜筛中，铜筛置塑料量筒上部，加水淹没粪样，用竹筷搅拌至稀浆状，捞出铜筛， 沥干后再次浸入，搅拌，如此3次。再将塑料量筒中的粪样静置沉淀15min～20min（室温超过20℃时静 置时间不超过10min），弃上层清液，将沉淀物倒入长颈平底烧瓶，加水至瓶口下4cm～5cm。 3.2.1.4 毛蚴孵化 用玻璃棒将折叠好的1cm～1.5cm厚的松软脱脂棉推入长颈平底烧瓶,使脱脂棉刚好浸入液面,补加 水至液面高出脱脂棉2cm～3cm。往长颈平底烧瓶颈部加脱脂棉时不能有气泡，产生气泡时，用挑虫针轻 轻地挑动脱脂棉使气泡溢出。 将装好粪样的长颈平底烧瓶放置于20℃～30℃环境中，在光照（日光或灯光）条件下进行孵育，避 免阳光直射。如室温低于20℃，可将长颈平底烧瓶放入25℃温箱（内加入日光灯）或水浴锅中进行孵化。 3.2.2 毛蚴观察 孵化3h，将长颈平底烧瓶向着光源（或在光线充足的地方），并以黑色遮光板为背景，肉眼或用放 大镜观察瓶颈部脱脂棉以上清水部位。每个样品每次观察应在2min以上，孵化后5小时再观察一次。 3.3 结果判定 3.3.1 东毕吸虫毛蚴形态及运动特征 毛蚴眼观为针尖大小、灰白色、梭形，折光性强，在脱脂棉上层清液中作水平或斜向直线运动。 3.3.2 阴性、阳性判定 发现毛蚴，则判定为阳性；阴性样本复查1次，如未发现毛蚴，则判定为阴性。 4 诊断结果 4.1 疑似 有流行病学接触史的动物，出现本病临床症状。 4.2 确诊 粪便孵化发现毛蚴。 2 DB54/T 0159—2018 AA 附 录 A （规范性附录） 实验用品与试剂 A.1 A.1.1 实验用品 孵育室（箱） 室温低于20℃时，采用温箱或在房间内开启取暖设备，以维持20℃～25℃的环境条件，也可以用水 浴锅维持孵化温度为25℃。孵育室（箱）需满足日光或灯光的光照条件。 500mL烧杯或塑料量杯、长颈平底球瓶(500ml)、40目～80目的铜筛滤杯、温度计、水浴锅、玻璃棒、 挑虫针、洗瓶、棉花、镊子、遮光板(黑色)、记号笔、竹筷、粪桶、放大镜、显微镜、吸管、载玻片、 盖玻片、取暖炉、盆、水缸、水桶、闹钟。 A.2 A.2.1 试剂 水 蒸馏水或桶（瓶）装饮用水，也可用自来水、河水、池水、井水等。处理方法如下：自来水，在容 器中存放12h以上或阳光下暴晒8小时以上；河水、池水、井水等，加温至60℃，冷却；混浊的水，每50L 水加明矾3g～5g，充分搅拌，澄清。用NaOH或HCL调节pH值至6.8～7.2。 自来水在盛器中存放去氯过程中需敞口，不能盖盖子。 3 DB54/T 0159—2018 BB 附 录 B （规范性附录） 样本采集、保存、送检 B.1 样本采集 直肠采集新鲜粪样，采粪量：牛100g，羊20g～25g。每采集一头（只）家畜更换手套一次，粪样采 集时间为每年的9月底～12月初。 B.2 样本保存 采集的粪样保存于无毒、无污染的自封袋内，标记采集地点、畜种、性别、年龄、采粪日期，4℃ 保存。 B.3 样本送检 4℃条件下保存送检，7天内完成检查。 _________________________________ 4