ICS 11.220 C 05 吉 DB22 林 省 地 方 标 准 DB 22/T 2959—2018 荧光定量基因快速检测技术规程 Technical regulations for detecting DNA rapidly by fluorescence quantitation PCR 2018 - 12 - 26 发布 吉林省市场监督管理厅 2019 - 01 - 30 实施 发 布 DB22/T 2959—2018 前 言 本标准按照 GB/T 1.1—2009 给出的规则起草。 本标准由吉林省卫生健康委员会提出并归口。 本标准起草单位：吉林大学。 本标准主要起草人：姜艳芳、张鹏、邹红雁、胡馨元、刘思文、邵丹、何佳雪、刘勇、李涛。 I DB22/T 2959—2018 荧光定量基因快速检测技术规程 1 范围 本标准规定了荧光定量基因快速检测技术的检测对象、样本采集、检测流程、检测报告。 本标准适用于结核分枝杆菌及利福平耐药、金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、艰难梭 菌。 2 2.1 2.2 2.3 3 3.1 检测对象 疑似为结核病的所有成人及儿童患者。 疑似金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的患者。 疑似艰难梭菌和高致病性艰难梭菌感染的患者。 样本采集 样本类型 3.1.1 中。 3.1.2 3.1.3 3.1.4 3.1.5 3.1.6 3.1.7 3.1.8 3.1.9 3.1.10 3.2 患者先用清水漱口 2 次，深吸气后用力呼出，从肺部深处咳出痰液至少 1 ml 于一次性无菌痰盒 取患者肺泡灌洗液至少 6 ml 于一次性无菌试管中。 取患者胸、腹水至少 50 ml 于一次性无菌试管中。 取患者脑脊液至少 2 ml 于一次性无菌试管中。 取患者关节腔积液至少 2 ml 于一次性无菌试管中。 取患者淋巴节穿刺液至少 0.5 ml 于一次性无菌试管中。 取患者黄豆粒大小的新鲜组织至少 2 粒于一次性无菌试管中。 取患者尿液至少 50 ml 于一次性无菌试管中。 取患者鼻拭子，将拭子放入试剂盒自带的保存液中。 取患者粪便至少 2 g 于一次性无菌便盒中。 样本运输 采集好的样本标记后，在 2 ℃～8 ℃冷藏条件，冷链运输，运输时间不得超过24 小时。 3.3 样本贮存 样本贮存温度以2 ℃～8 ℃为宜，尽快检测。 3.4 样本接收要求 检测实验室应制定本实验室样本的接收要求，可拒绝接收以下样本，并将拒收原因反馈给临床科室： a) 样本量不满足 3.1 要求或含血量过高，采集容器不满足 3.1 要求； b) 没有按照 3.2 以及 3.3 规定保存及运输的样本。 1 DB22/T 2959—2018 4 检测流程 4.1 检测 应在生物安全柜内按照以下步骤进行操作： a) 痰液、肺泡灌洗液、胸腹水、关节腔积液、淋巴穿刺组织、尿液等样本检测结核分枝杆菌及利 福平耐药： 1) 使用试剂盒内提供的专用无菌移液管转移液化的样本，样本应足量； 2) 打开检测盒的盖子，将处理后的样本由检测盒的加样孔缓缓加入； 3) 盖紧检测盒的盖子，准备开始检测； 4) 打开电脑，打开荧光定量基因快速检测仪； 5) 运行荧光定量基因快速检测仪系统软件； 6) 在荧光定量基因快速检测仪系统窗口，创建测试，扫描检测盒的条形码，系统软件可以自 动读取以下信息：测试试剂、试剂批号标识、检测盒序列号和有效期； 7) 在样本编号框中，输入样本编号； 8) 开始测试； 9) 打开绿灯闪烁的仪器模块门，放入检测盒； 10) 关门，测试开始，绿灯停止闪烁，测试完成后，指示灯熄灭； 11) 反应结束后，等系统自动对该模块解锁，开门，取出检测盒； 12) 处理使用过的检测盒； 13) 打印报告。 b) 鼻拭子样本检测金黄色葡萄球菌及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌： 1) 从包装中取出检测盒、拭子、样本处理液； 2) 采集完样本后将拭子插入装有样本处理液的试管中，折断拭子； 3) 盖紧样本处理液管盖，高速漩涡混合 10s； 4) 打开检测盒盖，使用无菌移液管将全部样本处理液试剂转入检测盒中； 5) 盖紧检测盒盖； 6) 打开电脑，打开荧光定量基因快速检测仪； 7) 运行荧光定量基因快速检测仪系统软件； 8) 在荧光定量基因快速检测仪系统窗口，创建测试，扫描检测盒的条形码，系统软件可以自 动读取以下信息：测试试剂、试剂批号标识、检测盒序列号和有效期； 9) 在样本编号框中，输入样本编号； 10) 开始测试； 11) 打开绿灯闪烁的仪器模块门，放入检测盒； 12) 关门，测试开始，绿灯停止闪烁，测试完成后，指示灯熄灭； 13) 反应结束后，等系统自动对该模块解锁，开门，取出检测盒； 14) 处理使用过的检测盒； 15) 打印报告 c) 粪便样本检测艰难梭菌： 1) 从包装中取出检测盒、拭子、样本处理液； 2) 将拭子短暂置入未成形粪便样本中，拭子无需完全浸透； 3) 将拭子插入装有样本处理液的小瓶中； 2 DB22/T 2959—2018 4) 握住靠近小瓶边缘的拭子管，将拭子从处理液小瓶底部提起几毫米，将管子压向小瓶边缘 并将其折断，确保拭子足够短，以使盖能盖紧； 5) 盖上盖，高速漩涡震荡 10 秒钟； 6) 打开检测盒盖，使用洁净的移液管，将全部样本试剂检测盒中，盖上检测盒盖； 7) 打开电脑，打开荧光定量基因快速检测仪； 8) 运行荧光定量基因快速检测仪系统软件； 9) 在荧光定量基因快速检测仪系统窗口，创建测试，扫描检测盒的条形码，系统软件可以自 动读取以下信息：测试试剂、试剂批号标识、检测盒序列号和有效期； 10) 在样本编号框中，输入样本编号； 11) 开始测试； 12) 打开绿灯闪烁的仪器模块门，放入检测盒； 13) 关门，测试开始，绿灯停止闪烁，测试完成后，指示灯熄灭； 14) 反应结束后，等系统自动对该模块解锁，开门，取出检测盒； 15) 处理使用过的检测盒； 16) 打印报告。 4.2 质量控制 4.2.1 样本处理质控 4.2.1.1 在每个检测盒中，样本处理质控均包含干孢子盒形式的非传染性孢子或球芽孢杆菌孢子，用 于判断样本是否得到充分处理。 4.2.1.2 如果存在有机体，样本处理质控可确认结核分枝杆菌、金黄色葡萄球菌、耐甲氧西林金黄色 葡萄球菌以及艰难梭菌已经裂解，并可确认样本处理是否充分，反应是否完整。 4.2.1.3 样本处理质控可监测 PCR 反应体系中是否存在基因扩增抑制因子。样本处理质控在阴性样本 中必须为阳性，在阳性样本中可能为阴性也可能为阳性。 4.2.1.4 如果样本处理质控符合标准，则样本处理质控为“合格”，如果在阴性测试中没有检测到样 本处理质控，则检测结果为“无效”。 4.2.2 探针质控 在PCR反应开始前，荧光定量基因快速检测仪会测量从探针发出的荧光信号，用以监测冻干珠的复 溶、反应管加样、探针的完整性以及染料的稳定性。如果探针质控符合标准，则视为“合格”。 4.3 实验室报告发放 4.3.1 4.3.2 4.4 阳性结果、阴性结果应按照正常报告流程出具实验室检测报告； 若检测失败，及时与临床医生沟通。 检测记录 实验样本记录表见附录A。 5 5.1 5.2 检测报告 检测报告须经由具备临床医学检验技术的医务人员审核并签发，报告模板见附录 B。 报告应包括以下信息： 3 DB22/T 2959—2018 a) b) c) d) e) f) g) 4 患者的姓名、性别、年龄、样本类型； 诊断、科室、住院号、条码号； 病区、床号、样本号、送检医生； 每一个检测项目的测定结果、正常参考范围； 采样时间、接收时间、报告时间； 检测者、审核者； 其他相关提示。 DB22/T 2959—2018 AA 附 录 A （资料性附录） 实验样本记录表 结核分枝杆菌及利福平耐药快速检测、金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌核酸（DNA） 检测、艰难梭菌核酸（DNA）检测实验样本记录表A.1。 表A.1 实验样本记录表 检验项目名称： 序号 姓名 性别 男 女 男 女 男 女 男 女 男 女 男 女 男 女 男 女 男 女 男 女 男 女 男 女 男 女 男 女 男 女 男 女 男 女 男 女 男 女 年： 年龄 住 院 号/门 诊号 条 码 号 接 收 日期 样 本 类型 样本状 态 开单 科室 开 单 医生 流水号： 诊断 检 测 结果 正常 ___ 正常 ___ 正常 ___ 正常 ___ 正常 ___ 正常 ___ 正常 ___ 正常 ___ 正常 ___ 正常 ___ 正常 ___ 正常 ___ 正常 ___ 正常 ___ 正常 ___ 正常 ___ 正常 ___ 正常 ___ 正常 ___ 5 DB22/T 2959—2018 BB 附 录 B （资料性附录） 报告模板 结核分枝杆菌及利福平耐药快速检测报告单见表B.1。 表B.1 结核分枝杆菌及利福平耐药快速检测报告单 姓名： 性别： 年龄： 样本种类： 诊断： 科室： 门诊： 送检医生： 病区： 床号： 条码号： 检测项目 测定结果 样本号： 参考范围 结核分枝杆菌复合物 DNA 阴性 利福平耐药 ropB 基因突变 阴性 采样时间： 接收时间： 报告时间： 检验者： 审核者： 备注： 注：本报告仅对本次所检测的样本负责。 金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌核酸（DNA）检测报告单见表B.2。 表B.2 金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌核酸（DNA）检测报告单 姓名： 性别： 年龄： 样本种类： 诊断： 科室： 门诊： 送检医生： 病区： 床号： 条码号： 样本号： 检测项目 测定结果 参考范围 金黄色葡萄球菌核酸（DNA） 阴性 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌核酸（DNA） 阴性 采样时间： 接收时间： 报告时间： 检验者： 审核者： 备注： 注：本报告仅对本次所检测的样本负责。 艰难梭菌核酸（DNA）检测报告单见表B.3。 表B.3 艰难梭菌核酸（DNA）检测报告单 姓名： 性别： 年龄： 样本种类： 诊断： 科室： 门诊： 送检医生： 病区： 床号： 条码号： 样本号： 检测项目 测定结果 参考范围 艰难梭菌核酸（DNA） 阴性 高产毒 027 毒株 DNA 阴性 采样时间： 接收时