ICS 67.160.01 X 50 DB13 河 北 省 地 方 标 准 DB 13/T 2818—2018 芦笋汁（粉）中芦笋皂苷检测方法 分光光度法 2018 - 09 - 21 发布 河北省质量技术监督局 2018 - 10 - 21 实施 发 布 DB13/T 2818—2018 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由秦皇岛市质量技术监督局提出。 本标准起草单位：秦皇岛长胜营养健康科技有限公司，河北省芦笋产业技术研究院。 本标准主要起草人：黄云祥、马淑凤、袁其朋、孙进、周太刚、郑旭静、王羽西、安静、郁晓艺、 赵玉强、王红、刘浩。 I DB13/T 2818—2018 芦笋汁（粉）中芦笋皂苷检测方法 分光光度法 1 范围 本标准规定了芦笋汁、芦笋粉中芦笋皂苷的术语和定义、原理、试剂或材料、仪器设备、样品前 处理、显色与测定、结果计算、精密度。 本标准适用于采用分光光度法，进行芦笋汁、芦笋粉中芦笋皂苷含量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 芦笋汁 asparagus juice 芦笋经清洗、粉碎、压榨、去渣等步骤处理后得到的芦笋汁。 3.2 芦笋粉 asparagus powder 芦笋汁经离心、过滤、浓缩、添加麦芽糊精、杀菌、喷雾干燥等步骤得到的芦笋粉。 4 原理 样品经乙醇提取、正丁醇萃取后，使用香草醛-高氯酸显色，在535nm下测定吸光度，根据菝契皂 苷元标准曲线，外标法计算皂苷含量。 5 试剂或材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 5.1 水，GB/T 6682，一级。 5.2 甲醇。 5.3 无水乙醇。 5.4 冰醋酸（≥99.5%）。 1 DB13/T 2818—2018 5.5 高氯酸（70%～72%）。 5.6 水饱和正丁醇溶液：正丁醇中加入过量水，充分摇匀，静置 12h 及以上，待彻底分层后，上层即 为所需水饱和正丁醇。 5.7 5%香草醛冰醋酸溶液：称取(5±0.001)g 香草醛，用冰醋酸溶解、定容至 100 mL。 5.8 菝葜皂苷元标准品：纯度≥98%。 5.9 标准储备液：精密称取 20.0 mg 菝葜皂苷元标准品，加甲醇溶解并定容至 10 mL 容量瓶中，制得 浓度为 2.0 mg/mL 的标准储备液。保存于 3℃～5℃冰箱中，7 天内使用。 5.10 标准使用液：准确移取 0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.5 mL、4.0 mL 标准储备液，分别用甲醇稀 释定容至 5mL。得到 200µg/mL、400 µg/mL、600 µg/mL、1000 µg/mL、1600 µg/mL 的菝葜皂苷元标准 溶液，现配现用。 6 仪器设备 6.1 分析天平：精度 0.1 mg。 6.2 可见分光光度计：535 nm。 6.3 旋转蒸发器。 6.4 水浴锅：精度±1℃。 6.5 移液枪：200 μ L、1.0 mL、5.0 mL。 6.6 移液管：25 mL。 6.7 三角瓶：500 mL。 6.8 容量瓶：A 级，10 mL、50 mL、100 mL。 6.9 比色皿：石英，10 mm。 6.10 滤纸：中速定性滤纸。 7 样品前处理 7.1 芦笋汁样品 7.1.1 用移液管移取 25 mL 芦笋汁至 500 mL 三角瓶中。 7.1.2 加入 200 mL 无水乙醇，室温下手动振摇 1 ～2min，用滤纸过滤，将滤液在水浴 70℃±1℃下 减压旋蒸至略干。残渣用 25 mL 水溶解后，移于分液漏斗中，用等体积水饱和正丁醇分别萃取 4 次， 合并上层正丁醇溶液于 100 mL 容量瓶中，用水饱和正丁醇定容至刻度，摇匀，备用。 7.2 芦笋粉样品 精密称取10 g芦笋粉，用25 mL水溶解于500 mL三角瓶中。以下步骤按7.1.2进行。 2 DB13/T 2818—2018 8 显色与测定 8.1 标准曲线 分别用移液枪吸取系列标准使用液各200 µL于具塞试管中，于70℃水浴挥干。依次加入5%香草醛 冰醋酸溶液200 µL、高氯酸溶液800 µL，盖塞，混匀。70℃水浴15 min，取出后于冰水中冷却5 min， 加入5 mL冰醋酸，混匀。移入比色皿中，于535 nm波长下，以水为参比，测定吸光度值。以吸光度值 为纵坐标，菝葜皂苷元的含量为横坐标绘制标准曲线。 8.2 样品测定 精密吸取50～400 µL前处理溶液（可适当调整吸取量控制吸光值在0.3～0.7之间），置于具塞试 管中，于70℃水浴挥干。依次加入5%香草醛冰醋酸溶液200 µL、高氯酸溶液800 µL，盖塞，混匀。70℃ 水浴15 min，取出后于冰水中冷却5 min，加入5 mL冰醋酸，混匀。移入比色皿中，于535 nm波长下， 以水为参比，测定吸光度值。依据标准曲线计算样品中芦笋皂苷的含量。 8.3 空白实验 除不加入样品处理液，按8.2进行操作。 9 结果计算 样品中皂苷含量按照公式（1）计算： X  C  C0   V  10 3 V1  m  10 6 ……………………………………（1） 式中： X ——样品中皂苷含量，g/kg或g/L； C ——由标准曲线上计算所得皂苷含量，μ g； C0——由标准曲线上计算所得空白试验含量，μ g； V ——正丁醇萃取液定容体积，mL； V1——测定用正丁醇萃取液体积，mL； m ——芦笋粉试样质量或芦笋汁试样体积，g或mL； 计算结果保留两位有效数字。 10 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对值不得超过算数平均值的10%。 _________________________________ 3