ICS 67.120.30 B 51 DB21 辽 宁 省 地 方 标 准 DB21/T 3105—2019 中国蛤蜊（种质） Species identification of Mactra chinensis 2019 - 01 - 30 发布 辽宁省市场监督管理局 2019 - 03 - 01 实施 发 布 DB21/T 3105—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009《标准化工作导则 第1部分：标准化工作导则》给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由丹东市质量技术监督局提出。 本标准由辽宁省农业农村厅归口。 本标准起草单位：丹东永明食品有限公司、中国科学院海洋研究所。 本标准主要起草人：张涛、宋浩、李永明、李朝辉、杨靖华、胡博、杨红生、周毅、张立斌。 I DB21/T 3105—2019 中国蛤蜊（种质） 1 范围 本标准规范了中国蛤蜊Mactra chinensis（Philippi，1846）的名称与分类、分布、主要形态特征、 生长与繁殖、遗传学特性、检测方法和判定规则。 本标准适用于辽宁地区中国蛤蜊种质检测与鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 18654.2 养殖鱼类种质检验 第2部分：抽样方法 GB/T 18654.12 养殖鱼类种质检验 第12部分：染色体组型分析 DB21/T 1958-2012 水产动物DNA鉴定线粒体COI基因序列法 3 名称与分类 3.1 名称 中国蛤蜊Mactra chinensis（Philippi，1846），别名黄蚬子、飞蛤、沙蛤、中华蛤蜊、凹线蛤蜊。 3.2 分类地位 软体动物门（Mollusca）、双壳纲（Bivalvia）、帘蛤目（Veneroida）、蛤蜊科（Mactrida）、 蛤蜊属（Mactra）。 4 分布 中国蛤蜊为暖温性种类。栖息于中潮区至水深60 m浅海的细砂中，以水深2 m～5 m处最多。主要分 布在我国的辽宁、山东，日本、朝鲜也有分布。 5 主要形态特征 5.1 外部形态特征 5.1.1 贝壳外形 贝壳略呈三角形，壳较坚厚。壳长略大于壳高，两壳大小相等。壳面膨胀，无放射肋，但由壳顶至 腹缘有宽度不等的浅黄色与黄褐色相间的放射带或放射条纹。壳面同心状，生长纹明显，愈近腹缘生长 纹愈粗大。壳顶稍突出，略高出背缘，位于背缘中央稍偏前方，向内弯曲，不接触。小月面及楯面宽大。 壳前后缘均圆形，背腹缘呈弧形。 1 DB21/T 3105—2019 5.1.2 色泽 壳面黄褐色。壳内面银白色，壳顶内面为蓝紫色，幼贝更加明显。 5.1.3 绞合部 左右两壳各具一主齿，左主齿呈“人”字形，右主齿呈“八”字形。左壳前后方各1齿，单片，右 壳前后方齿为双片。内韧带槽位于壳顶基部，内嵌有褐色三角形的内韧带，位于主齿后方。 5.1.4 闭壳肌痕 后闭壳肌痕略大于前闭壳肌痕，在前后闭壳肌上方各有一缩足肌痕。 5.1.5 外套肌痕 外套窦深而钝。外套肌痕宽短。 中国蛤蜊外部形态见图1。 图1 中国蛤蜊形态特征 5.2 软体部 5.2.1 外套膜与水管 外套膜包围整个软体部，边缘厚,中央薄而透明,在背缘愈合，并在后缘愈合形成两个水管。水管短 而粗,两个水管紧靠,但互不相通。出水管较进水管细而短,于进水管之上。 5.2.2 足 位于身体腹面,两侧扁平呈斧刀状,颜色为白色或淡红色。 5.2.3 闭壳肌 后闭壳肌大于前闭壳肌,略呈方柱形体，前闭壳肌近圆柱体，前后闭壳肌上方各有一缩足肌。 5.2.4 鳃 身体左右各有鳃两片，内外鳃形状不同,外鳃小于内鳃，内外鳃在背缘与内脏囊相连，内鳃的前端 与唇瓣相接，两侧鳃的基部在身体后部末端愈合。 5.2.5 内脏团 2 DB21/T 3105—2019 由肝胰脏、心脏、生殖腺、胃等构成，被外套膜和鳃包围。 6 生长与繁殖 6.1 生长 自然条件下，1龄壳壳长可达20 mm～30 mm。4龄或5龄时，壳长可达50 mm～60 mm。中国蛤蜊年龄、 壳长、体重之间的关系见表1。 表 1 中国蛤蜊年龄、壳长、体重之间的关系 年龄(年) 壳长(mm) 体重(g) 1 < 30 < 3.0 2 30～50 3.0～20 3 ～50 16.7～25 4 ～60 38.46～50 5 ～60 38.46～50 6.2 繁殖 6.2.1 性成熟年龄 最小生物学年龄为1年。 6.2.2 繁殖方式 雌雄异体,体外受精。极少数个体会发生性逆转,出现雌雄同体现象。 6.2.3 繁殖期 每年只有一个繁殖期，繁殖盛期为5月中旬～8月上旬。其繁殖季节随着地理区域不同而存在差异, 主要受水温影响。 6.2.4 排精、产卵习性 水温14 ℃以上时，可以排精、产卵。排精和产卵时亲贝双壳微张，配子从出水管缓缓排出。精子 乳白色呈烟雾状,卵子粉红色呈丝缕状。分批产卵，壳长45 mm的雌性个体，1次产卵量在70万粒～200 万粒左右。卵沉性，排入水中的卵细胞不能立即自行散开。 6.2.5 精卵特征 卵子呈圆球状，核较小而居中。卵径46 μm～61 μm，卵核径20 μm左右。精子头部1.O μm × l.7 μm，尾部细长，为头部的1.0倍～1.5倍。受精后进行不等全卵裂，从四细胞起为螺旋卵裂。 7 遗传学特性 7.1 染色体数目 中国蛤蜊二倍体体细胞染色体数为：2n=38。 3 DB21/T 3105—2019 7.2 16S rRNA、ITS2 和 COI 基因片段分子特征 7.2.1 线粒体 16S rRNA 基因片段单倍型序列位点 片段长度为322bp，检测特征见图2，片段的单倍型序列位点为： “TAGTAGCGCAATAAATTGTCCTTTAATTGGGGAAATGAATGAAAGGGTTGACGAGGGGGAAGCTATCTTTTTGGTATAGTTTG AAGTTTTCTTTTATGTGAAAAGACTTAGATTTTATAATTAGAAGAGAAGACCCCGGCGAGCTTGTTAAGGGTTACTAAGTTGAGGTAAT TATTGATTTTTGTTGGGGCAACGCAAAGGGAAAAGAACTCCTTTGAGTTTTATAGGGATCCACTTAGAGTGAACAAAGCAAAAGCTACC GCGGGGATAACAGCGCAATTTCTTCAGAGAGCTCATATCGAAGAGGAAGGTTGCGACCTCG”。 图2 中国蛤蜊肌肉组织 16S rRNA 基因片段凝胶电泳图谱 7.2.2 ITS2 基因片段单倍型序列位点 片段长度为590bp，检测特征见图3，片段的单倍型序列位点为： “ATCGACATCTTGAACGCATATTGCGGCTCCGGCTCAATGCCGAAGCCCCGCCTGTCCGAGGGTAGGCTAAACATAATCGCCCG TATCTGCCTGTCGAGGCACCGTTTCATTACGGTGAATCCAGCGCAGGGGCGACTTGGCGTTTCGCGCGAGCCTGTCTCGCCCGTTCGCT CGAGCTCTCCGCTCTCCCAGCAGGCCAACTCATTCAGTGGCGCAGGGACTGGGCCCGATCGGATCCAGTCTACCGTAGCTATCTGAAGG TCTCGCTGCGTTCTGCCGCCGTCCCTCTCGCCTCTTCGTGAGGCTCGATCGAGGTTGATGGCCACGACTAGCGCAACCGGCTCGATGTA CAGCACTCTCACTGCGGCTTACCAGCCGCGGAGGTCGAGGAGCACCACGTCGCCGGGGAGTAACCCGTTCTCGCTCACTAGTTCGCTAG TAGCAGCTCGGGTTTGCGCGGTCTGTGCTTGGGGCAAGGAGCGGGCACCCAACCTATTCACTAGGTGAGTAGGCGGCGCACATAGTATA AAACAACCTACCTCGGATCAGACGAGACTACCCGCTGAATTTAAGCATATCAGTAAGCGGAG”。 图3 中国蛤蜊肌肉组织 ITS2 基因片段凝胶电泳图谱 7.2.3 COI 基因片段分子特征 片段长度为627bp，检测特征见图3，片段的单倍型序列位点为: CATAAAGATATTGGCACTCTTTATTTCGTCTTTTCTTATTGGGCTGGGTTGGTAGGAACAGCTTTTAGCTCTATTATTCGTTTAG AGTTAGCTGTTCCTGGTGAGAGTCTTTTAGATGGGCAGCTTTATAATTTAGTTGTGACGGCGCATGCTTTAGTTATAATTTTTTTTTTA GTGATGCCAATAATGATGGGGGGTTTTGGGAATTGGTTAGTTCCTCTAATGTTAAAAGTTCCAGATATGAGGTTTCCTCGTATGAACAA TATTAGGTTCTGACTTCTTCCTGTTTCTATTTTACTTCTATTTGCTTCGGCCTATGTTGAAAGAGGGGCAGGAACTGGTTGAACCATTT ATCCTCCTCTGTCTAGGCATATAGGACATCCTGGACCGGCTATGGATTATGTTATTTTTTCTCTCCACGTAGGTGGTCTTTCTTCGATC 4 DB21/T 3105—2019 CTAGCATCTATTAATTTCTTTACAACTTTCCTAAGGATACGACTAAAGGTGATGTCTTTATATCGGGTTCCTTTGTTTGTTTGATGTAT TGCTGTAACTAGGTTCTTGTTAGTAGTTGCTATACCTGTTTTGGCTGGCGCTCTTACTATGTTGTTAACAGATCGGAATTTCAATACTT CTTTTTTT。 图4 中国蛤蜊肌肉组织 COI 基因片段凝胶电泳图谱 8 检测方法 8.1 抽样 按GB/T 18654.2的规定执行。 8.2 染色体和核型检测 8.2.1 染色体标本制备 参见GB/T 18654.12的规定执行。 8.2.2 核型分析 观察100个左右的分散良好的中期分裂相，记数确定二倍体数。从中挑选10个分散良好、形态清晰 的中期分裂相进行显微摄影、放大、测量，按GB/T 18654.12的分类标准对染色体分类。 8.3 线粒体基因片段分子特征检测 COI基因片段分子特征检测参照DB21/T 1958-201