65.020.30 ICS B 44 备案号：61240-2019 内 蒙 DB15 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 1528—2019 绒山羊皮肤毛囊密度切片测定法 Determination of skin follicle density by tissue section of cashmere goat 2018-12-20 发布 内蒙古自治区市场监督管理局 2019-03-20 实施 发 布 DB15/T 1528—2019 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ........................................................................ 1 4 采样部位及时间 .................................................................... 1 5 用具及试剂 ........................................................................ 1 6 皮肤毛囊密度测定 .................................................................. 2 附录 A（资料性附录） 内蒙古绒山羊皮肤组织切片（横切）染色成像 ........................ 4 I DB15/T 1528—2019 前 言 本标准根据GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由内蒙古自治区农牧业科学院提出。 本标准由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会(SAM/TC19)归口。 本标准起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、内蒙古自治区畜牧工作站、鄂托克旗家畜改良站、 阿拉善盟畜牧兽医工作站、乌拉特中旗家畜改良站及同和种太种畜场。 本标准主要起草人：吴铁成、刘斌、李玉荣、郭俊、勿都巴拉、何云梅、马跃军、高娃、赵霞、阿 娜儿、孙雪峰、阿拉木斯、曹越伟。 II DB15/T 1528—2019 绒山羊皮肤毛囊密度切片测定法 1 范围 本标准规定了绒山羊皮肤毛囊切片测定法的术语和定义、采样部位及时间、用具及试剂、皮肤毛囊 密度测定等内容。 本标准适用于绒山羊皮肤毛囊密度测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 8170 数值修约规则与极限数值的表示和判定 3 术语和定义 3.1 绒山羊皮肤切片毛囊密度 density of follicles in cashmere goat skin tissue section 绒山羊皮肤组织切片法测定单位面积内初级和次级毛囊数。 3.2 次级毛囊/初级毛囊 S/P 绒山羊皮肤组织切片中单位面积内次级毛囊数和初级毛囊数的比值。 3.3 绒山羊皮肤收缩率 skin shrinkage of cashmere goat 皮肤组织在脱水透明后皮肤面积与活体样皮肤面积的比率。 4 采样部位及时间 羊体肩胛骨后缘10 cm，体侧中线稍偏上处。适宜采样时间为每年9月份。 5 用具及试剂 5.1 用具 皮肤取样器、手术刀、显微镜、切片机等。 1 DB15/T 1528—2019 5.2 试剂 4 %多聚甲醛，无水乙醇、蒸馏水、二甲苯、石蜡、伊红-苏木素等。 6 皮肤毛囊密度测定 6.1 样品采集及处理 2 在绒山羊体侧部用皮肤采样器采集皮肤样本约1 cm ，展平并用4 %多聚甲醛浸泡24 h，分别于70 %、 80 %、90 %，100 %浓度梯度乙醇中脱水，测量脱水后皮肤面积，保存于-20 ℃冰箱。并注明采样地点、 采样人、羊耳标号、性别、年龄等信息。 6.2 实验室样品制备 脱水后置于二甲苯中0.5 h～1 h透明，浸入石蜡（60 ℃）3 h～4 h，石蜡包埋制成蜡块。切片机切 片，于温水中展开，用载玻片捞起，60 ℃烘烤20 min，室温冷却。浸入二甲苯脱蜡，依次浸入100 %、 90 %、80%、70%乙醇，最后浸入水中，伊红-苏木素染色，浓度梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶 封片。 6.3 皮肤毛囊密度测定方法 6.3.1 切片方法 使用切片机垂直于绒毛生长方向切成5 μ m薄片，由皮肤表层到深层切三片分别计数以消除切片位 置引起的误差。 6.3.2 测定方法 绒山羊毛囊一般以毛囊群的形式存在，一个初级毛囊周围分布若干次级毛囊，组成一个毛囊群，群 之间有明显界限（附录A）。显微镜下记录确定区域内毛囊数量，在具有显微成像系统的实验室中，可 以利用分析软件直接选取面积并做毛囊计数；也可在盖玻片上人工框定计数面积或放置孔径为1 mm～2 mm的垫片、网格板等，使用显微镜对视野内毛囊数量进行计数，通过选定皮肤面积内毛囊计数结果计算 毛囊密度，并通过皮肤缩率进行数据的校正。 6.4 皮肤毛囊密度相关计算 6.4.1 计算结果按 GB/T 8170 进行修约至两位小数。 6.4.2 毛囊密度测定公式 毛囊密度  选定区域内毛囊数量 选定区域皮肤面积 ………………………………（1） 6.4.3 皮肤收缩率 皮肤收缩率（%） 2 脱水透明后皮肤面积  100% 活体样皮肤面积 ……………………（2） DB15/T 1528—2019 6.4.4 毛囊密度的校正 校正后毛囊密度  毛囊密度  皮肤收缩率 ……………………（3） 3 DB15/T 1528—2019 AA 附 录 A （资料性附录） 内蒙古绒山羊皮肤组织切片（横切）染色成像 图A.1 内蒙古绒山羊皮肤组织切片（横切）毛囊群 _________________________________ 4