ICS 65.020 B 05 吉 DB22 林 省 地 方 标 准 DB 22/T 2389—2018 代替 DB22/T 2389-2015 水稻稻瘟病抗性鉴定与评价技术规程 Code of technical practice for identification and evaluation of resistance to rice blast 2018 - 05 - 24 发布 吉林省质量技术监督局 2018 - 06 - 22 实施 发 布 DB22/T 2389—2018 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准代替DB22/T 2389-2015《水稻对稻瘟病抗性鉴定技术规程》。与DB22/T 2389-2015相比，除 编辑性修改外主要技术变化如下： ——修改了标准名称； ——增加了“诱发品种”的定义； ——删除了“接种体”、“对照材料”、“喷雾接种”和“产孢培养基”的定义； ——修改了“自然诱发鉴定”定义的部分内容； ——修改了“4.2 病原物分离”的部分内容； ——调整原标准中“4.5”至本标准中“5.1.1”，增加了详细描述； ——修改了“鉴定设计”的标题名称； ——修改了“接种时间和方法”的部分内容。 ——增加了“病圃选择”的部分内容。 ——修改了“病圃试验设计”和“病圃管理”两部分内容。 ——增加了“穗瘟”的部分内容。 ——增加了“附录中苗叶瘟调查记录表”中试验重复的调查记录。 本标准由吉林省农业委员会提出并归口。 本标准起草单位：吉林省农业科学院。 本标准主要起草人：刘晓梅、姜兆远、任金平、李莉、王继春、高月波、张金花、朱峰、谢丽英、 孙辉、高鹏、郑建波。 本标准代替了DB22/T 2389-2015。 本标准历次版本发布情况为： ——DB22/T 2389-2015。 I DB22/T 2389—2018 水稻稻瘟病抗性鉴定与评价技术规程 1 范围 本标准规定了水稻抗稻瘟病鉴定的接种体的分离与保存、鉴定方法、抗性评价与副产物处理。 本标准适用于水稻种质资源、水稻品种和品系对稻瘟病抗性的鉴定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 1300 农作物品种区域试验技术规范 水稻 NY/T 2646 水稻品种试验稻瘟病抗性鉴定与评价技术规程 3 术语和定义 NY/T 2646 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。为了便于使用，以下重复列出了 NY/T 2646 中的某些术语和定义。 3.1 苗瘟 blast of seedling 水稻 3 叶～ 4 叶期发生的稻瘟病。 3.2 参鉴材料 tested cultivars 水稻种质资源、水稻品种和品系。 3.3 诱发品种 disease spreader variety 病圃中的用于诱发稻瘟病的高感品种。 3.4 自然诱发鉴定 identification by natural induction 在自然条件下利用高感诱发品种进行诱发的鉴定方法。 3.5 叶瘟 leaf blast 水稻移栽后叶片上发生的稻瘟病。 3.6 穗瘟 panicle blast 水稻抽穗后穗颈和枝梗上发生的稻瘟病。 [NY/T 2646-2014,定义 3.7] 3.7 病圃 disease nursery 1 DB22/T 2389—2018 在稻瘟病易发区设立具有代表性的诱发水稻叶瘟和穗瘟的鉴定圃。 4 接种体的分离与保存 4.1 病原标样采集与保存 采集省内各地区田间具有稻瘟病典型症状的穗颈，去掉多余枝梗及籽粒保留穗颈长度 5 cm，阴干 后阴凉干燥处保存。 4.2 病原物分离 分离以新采集的穗颈和稻节为宜；干标本浸泡 4 h ，经自来水洗净后放在铺有无菌滤纸的培养皿 内，于 27 ℃温箱保湿培养 24 h，孢子达到透明状态时，采用震落法震落在水琼脂培养基上，然后挑 取单孢至马铃薯蔗糖琼脂（PDA）培养基上培养，并进行柯式法则验证。 4.3 菌种保存 将有致病性的纯培养物接种到灭菌的稻节上，置于干燥器内室温保存。 4.4 生理小种鉴定与编号 应按全国统一的生理小种鉴别方法进行病原菌生理小种鉴定并编号。 5 鉴定方法 5.1 苗瘟鉴定 5.1.1 接种体制备 选择致病性较强的10 个单孢菌株，27 ℃ 条件下在马铃薯蔗糖琼脂（PDA）培养基上培养 7 d 后， 移至配方为燕麦片 30 g、西红柿汁 200 ml、琼脂 20 g、蒸馏水 1000 ml，pH 为 7.0 ～ 7.2 的产孢 培养基上常规灭菌，再培养 5 d ～ 7 d，无菌条件下洗去表面菌丝进行 12 h 光暗培养 3 天，用无菌 5 水洗涤稀释至孢子终浓度为 2 × 10 个/ml。 5.1.2 参鉴材料种植 将参鉴材料直接穴播于盛有肥沃土壤的育苗盘（60 cm×30 cm）内，每盘 60 穴，每份材料播 1 穴， 每穴 10 粒种子，每盘设感病对照材料1 份。1 叶 1 心期和接菌前各施 1 次氮肥，每平方米施硫酸铵 30 g。试验设 3 次重复。 5.1.3 接种时期和方法 在水稻 3 叶 ～ 4 叶期，对育苗盘中（5.1.2）稻苗的叶片进行高压（0.8 Mpa）均匀喷雾接种， 2 喷雾量为 300 ml/m 。接种后在温度 25 ℃ ～ 28 ℃ 相对湿度 90% 以上避光保持 24 h，管理按 NY / T 2646 的规定执行。 5.1.4 调查时间方法 水稻接种后 7 d ～ 8 d 当对照材料发病达7级或以上时进行调查，每份材料逐株逐叶调查。 5.1.5 2 分级与记录 DB22/T 2389—2018 分级标准见表A.1，记录参见表B.1。 5.2 叶瘟和穗瘟鉴定 5.2.1 病圃选择 在通化、延边、吉林、长春、松原、四平、辽源等地区选择常年易发生重病田块设为病圃，病圃面 2 积≥ 1 m 。每份材料3 次重复。 5.2.2 病圃试验设计与管理 病圃设置、施肥量和田间管理应按 NY/T 2646 的规定执行，育秧方式和试验田准备按 NY/T 1300 的 规定执行。 5.2.3 调查时间和方法 5.2.3.1 叶瘟 在水稻孕穗期（7月下旬）对参鉴材料进行逐株调查，1 周后复查1 次。 5.2.3.2 穗瘟 在水稻黄熟期（9月上中旬）对每份参鉴材料进行调查，定点定株连续调查 100 穗，1 周后复查 1 次，记载每穗的发病情况、总穗数、病穗数，计算病穗率。 5.2.4 5.2.4.1 分级与记录 叶瘟 分级见表A.1，记录参见表B.2。 5.2.4.2 穗瘟 穗瘟发病率与分级见表A.2，记录参见表B.3。 6 抗性评价 6.1 评价原则 依据苗瘟、叶瘟、穗瘟的调查数据，以最高数值作为参鉴材料的抗性级别，在中抗到高感的评价区 间，当同级别数值在各个点次出现频率低于 25% 时，抗性评价上调一个级别，作为参鉴材料的苗瘟、 叶瘟和穗瘟的最终级别。 6.2 评价标准 稻瘟病抗性评价分级标准见表A.1、表A.2，将参鉴材料划分为高抗（HR）、抗(R)、中抗(MR)、中 感(MS)、感(S)、高感(HS) 6 个类型。 6.3 抗性记录 记录参见表B.4。 7 副产物处理 3 DB22/T 2389—2018 7.1 接种体 将接种后剩余的接种体集中灭菌处理。 7.2 病株 将发病稻株深埋或焚烧。 4 DB22/T 2389—2018 AA 附 录 A （规范性附录） 水稻稻瘟病分级标准 水稻苗叶瘟调查分级见表A.1。 表A.1 病 级 水稻苗叶瘟调查分级标准 病 情 抗性评价 0 无病。 高抗 1 针头状大小褐点 2 褐点较大，直径小于 1 mm 3 圆形至椭圆形的灰色病斑，边缘褐色，直径 1 mm～2 mm 4 典型纺锤形病斑，长 1 cm～2 cm，通常局限在两叶脉之间，病斑面积 抗 中抗 小于叶面积的 2.0% 中感 5 典型纺锤形病斑，病斑面积占叶面积的 2.1%～10.0% 6 典型纺锤形病斑，病斑面积占叶面积的 10.1%～25.0% 7 典型纺锤形病斑，病斑面积占叶面积的 25.1%～50.0% 8 典型纺锤形病斑，病斑面积占叶面积的 50.1%～75.0% 9 全叶枯死 感 高感 水稻穗瘟发病率群体抗性分级见表A.2。 表A.2 水稻穗瘟发病率群体抗性分级标准 病 级 病穗率（d） 抗性评价 0 0 高抗 1 ≤5.0% 抗 3 5.0%＜d≤10.0% 中抗 5 10.0%＜d≤25.0% 中感 7 25.0%＜d≤50.0% 感 9 ＞50.0% 高感 5 DB22/T 2389—2018 BB 附 录 B （资料性附录） 水稻稻瘟病记录表 水稻苗瘟调查记录表见表B.1。 表 B.1 水稻苗瘟调查记录表 地点： 调查日期： 调查人： 最 分 菌 系 田间 品种 编号 名称 高 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 病 级 1 2 … 水稻叶瘟调查记录表见表B.2。 表 B.2 水稻叶瘟调查记录表 地点： 调查日期： 田间编号 品种名称 1 … 2 … 6 调查人： 病 级 第一次 最高病级 第二次 … … DB22/T 2389—2018 水稻穗瘟调查记录表见表B.3。 B.3 水稻穗瘟调查记录表 地点： 调查日期： 田间编号 1 品种名称 调查总穗数 调查人： 穗颈瘟数 枝梗瘟数 发病率/% 发病率级别 … 2 … 水稻稻瘟病抗性鉴定结果表见表B.4。 B.4 水稻稻瘟病抗性鉴定结果表 地点： 田间 编号 1 调查日期： 品种名称 调查人： 苗瘟 病级 叶瘟 抗性 病级 穗瘟 抗性 发病率/% 发病率级别 抗性 … 2 … _________________________________ 7