书 书 书犐犆犛 ６７ ． ２２０ ． ２０ 犡 ６９ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２３５３３ — ２００９ 固定化葡萄糖异构酶制剂 犐犿犿狅犫犻犾犻狕犲犱犵犾狌犮狅狊犲犻狊狅犿犲狉犪狊犲狆狉犲狆犪狉犪狋犻狅狀狊 ２００９  ０４  ２７ 发布 ２００９  １１  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准的附录 Ａ 为资料性附录 。 本标准由中国轻工业联合会提出 。 本标准由全国食品工业标准化技术委员会工业发酵分技术委员会归口 。 本标准起草单位 ： 中国食品发酵工业研究院 、 诺维信 （ 中国 ） 生物技术有限公司 。 本标准主要起草人 ： 张蔚 、 滕智津 、 郭新光 、 唐辰 、 翟文景 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２３５３３ — ２００９ 固定化葡萄糖异构酶制剂 １ 　 范围 本标准规定了固定化葡萄糖异构酶制剂的术语和定义 、 要求 、 试验方法 、 检验规则和标志 、 包装 、 运 输 、 贮存及保质期 。 本标准适用于经淀粉质 （ 或糖质 ） 为原料 ， 经微生物发酵 、 提纯 、 固定化制得的固定化葡萄糖异构酶 制剂产品的生产 、 检验和销售 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其随后所有 的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本标准 ， 然而 ， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本标准 。 ＧＢ ／ Ｔ１９１ 　 包装储运图示标志 （ ＧＢ ／ Ｔ１９１ — ２００８ ， ＩＳＯ７８０ ： １９９７ ， ＭＯＤ ） ３ 　 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准 。 ３ ． １ 　　 葡萄糖异构酶 　 犵犾狌犮狅狊犲犻狊狅犿犲狉犪狊犲 能将 Ｄ 葡萄糖转化为 Ｄ 果糖的酶 。 ３ ． ２ 　　 固定化葡萄糖异构酶 　 犻犿犿狅犫犻犾犻狕犲犱犵犾狌犮狅狊犲犻狊狅犿犲狉犪狊犲 经载体固定化而成的葡萄糖异构酶 。 ３ ． ３ 　　 葡萄糖异构酶活力 　 犪犮狋犻狏犻狋狔狅犳犵犾狌犮狅狊犲犻狊狅犿犲狉犪狊犲 葡萄糖异构酶活力以葡萄糖异构酶活力单位表示 ， 定义为 １ｇ 固体化葡萄糖异构酶 ， 在本标准规定 的反应条件下 ， １ｈ 转化产生 １ｍｇ 果糖 ， 即为 １ 个酶活力单位 ， 以 ｕ ／ ｇ 表示 。 ３ ． ４ 　　 生产能力 　 狆狉狅犱狌犮狋犻狏犻狋狔 在适宜的工作条件下 ， 酶活力降至原活力的 １０％ 的过程中 ， １ｋｇ 固定化酶能转化绝干葡萄糖为绝 干果葡糖的量 。 ４ 　 要求 ４ ． １ 　 外观 不结块 ， 无异味 。 ４ ． ２ 　 固定化载体 所使用的固定化载体需符合相关标准要求 。 ４ ． ３ 　 理化要求 应符合表 １ 的规定 。 １ 犌犅 ／ 犜 ２３５３３ — ２００９ 表 １ 　 固定化葡萄糖异构酶制剂的理化要求 项 　　 目 要 　　 求 酶活力 ａ ／（ ｕ ／ ｇ ） ≥ ２０００ 生产能力 ／（ ｔ ／ ｋｇ ） ≥ ５ 强度 合格 干燥失重 ／ ％ ≤ ８．０ ａ 可按供需双方合同规定的酶活力规格执行 。 ４ ． ４ 　 卫生要求 应符合国家有关规定 。 ５ 　 试验方法 除非另有说明 ， 在分析中仅使用分析纯试剂和蒸馏水或去离子水或相当纯度的水 。 ５ ． １ 　 外观 称取样品 １０ｇ （ 或 １０ｍＬ ）， 观察 、 嗅闻作出判断 ， 做好记录 。 ５ ． ２ 　 酶活力 ５ ． ２ ． １ 　 适用于链霉菌 （ 犛狋狉犲狆狋狅犿狔犮犲狊 狊狆 ． ） 生产的葡萄糖异构酶制剂 ５ ． ２ ． １ ． １ 　 溶液和试剂 ５ ． ２ ． １ ． １ ． １ 　 葡萄糖溶液 （ ７００ 犵 ／ 犔 ） 称取 ７０ｇ 葡萄糖加入沸水中 ， 使其完全溶解 ， 冷却后用蒸馏水定容至 １００ｍＬ 。 ５ ． ２ ． １ ． １ ． ２ 　 磷酸缓冲溶液 （ 狆犎 ＝７ ． ５ ） 分别称取磷酸二氢钠 １．９６ｇ 和十二水磷酸氢二钠 ３９．６２ｇ ， 用水溶解并定容到 ５００ｍＬ 。 如需要 ， 调节溶液的 ｐＨ 到 ７．５±０．０５ 。 ５ ． ２ ． １ ． １ ． ３ 　 硫酸镁溶液 （ ６１ 犵 ／ 犔 ） 称取 １２．３ｇ 七水合硫酸镁 （ ＭｇＳＯ ４ · ７Ｈ ２ Ｏ ）， 加水溶解并定容至 １００ｍＬ 。 ５ ． ２ ． １ ． １ ． ４ 　 高氯酸溶液 （ ２１０ 犿犔 ／ 犔 ） 量取市售的高氯酸试剂 ２１ｍＬ ， 用水定容至 ５００ｍＬ 。 ５ ． ２ ． １ ． ２ 　 分析步骤 称取适量固定化酶完整颗粒 ， 用 １ｍＬ 磷酸缓冲溶液 （ ５．２．１．１．２ ） 于 ３℃ ～ ７℃ 浸泡 １６ｈ 后 ， 加 １．５ｍＬ 磷酸缓冲溶液 ， ０．５ｍＬ 硫酸镁溶液 （ ５．２．１．１．３ ） 和 １．５ｍＬ 葡萄糖溶液 （ ５．２．１．１．１ ）， 再加水调 整至总体积 ５ｍＬ ， 于 ７０℃ 反应 １ｈ 。 加 ５ｍＬ 高氯酸溶液 （ ５．２．１．１．４ ） 终止反应 ， 测定果糖含量 。 ５ ． ２ ． ２ 　 适用于游动放线菌 （ 犃犮狋犻狀狅狆犾犪狀犲狊 狊狆 ． ） 生产的葡萄糖异构酶制剂 ５ ． ２ ． ２ ． １ 　 溶液和试剂 ５ ． ２ ． ２ ． １ ． １ 　 葡萄糖溶液 （ ５４０ 犵 ／ 犔 ） 称取 ５４．０ｇ 无水葡萄糖加入沸水中 ， 使其完全溶解 ， 冷却后用蒸馏水定容至 １００ｍＬ ； ５ ． ２ ． ２ ． １ ． ２ 　 磷酸缓冲溶液 （ 狆犎 ＝７ ． ０ ） 分别称取磷酸氢二钠 １２．３６ｇ 和十二水合磷酸二氢钠 ４１．０ｇ ， 加水溶解并定容至 １Ｌ 。 如需要 ， 调 节溶液的 ｐＨ 到 ７．０±０．０５ 。 ５ ． ２ ． ２ ． １ ． ３ 　 硫酸镁溶液 （ ３ ． ６６ 犵 ／ 犔 ） 称取 ０．７３９ｇ 七水合硫酸镁 （ ＭｇＳＯ ４ · ７Ｈ ２ Ｏ ）， 加水溶解并定容至 １００ｍＬ 。 ５ ． ２ ． ２ ． １ ． ４ 　 硫酸钴溶液 （ ０ ． ４６ 犵 ／ 犔 ） 称取 ０．０８４３ｇ 七水合硫酸钴 （ ＣｏＳＯ ４ · ７Ｈ ２ Ｏ ）， 加水溶解并定容至 １００ｍＬ 。 ２ 犌犅 ／ 犜 ２３５３３ — ２００９ ５ ． ２ ． ２ ． ２ 　 分析步骤 称取适量固定化酶完整颗粒 ， 用 １ｍＬ 磷酸缓冲溶液 （ ５．２．２．１．２ ） 于 ３℃ ～ ７℃ 浸泡 １６ｈ 后 ， 加 ０．５ｍＬ 磷酸缓冲溶液 ， ０．５ｍＬ 硫酸镁溶液 （ ５．２．２．１．３ ）， ０．５ｍＬ 硫酸钴溶液 （ ５．２．２．１．４ ） 和 ２．５ｍＬ 葡萄糖溶液 （ ５．２．２．１．１ ）， 再加水调整至总体积 ５ｍＬ ， 于 ７５℃ 反应 １ｈ 。 加 ５ｍＬ 高氯酸溶液 （ ５．２．１．１．４ ） 终止反应 ， 测定果糖含量 。 ５ ． ２ ． ３ 　 果糖的测定 ５ ． ２ ． ３ ． １ 　 溶液和试剂 ５ ． ２ ． ３ ． １ ． １ 　 半胱氨酸盐酸盐溶液 （ １５ 犵 ／ 犔 ） 称取生化试剂半胱氨酸盐酸盐 ０．３７５ｇ ， 用水溶解定容至 ２５ｍＬ 。 ５ ． ２ ． ３ ． １ ． ２ 　 咔唑酒精溶液 （ １ ． ２ 犵 ／ 犔 ） 称取咔唑 ３０．０ｍｇ ， 用无水酒精溶解定容至 ２５ｍＬ ， 放置在棕色瓶中 ， ２４ｈ 后使用 。 ５ ． ２ ． ３ ． １ ． ３ 　 硫酸溶液 取市售浓硫酸 ４５０ｍＬ ， 在不断搅拌下徐徐倒入 １９０ｍＬ 水中 。 ５ ． ２ ． ３ ． １ ． ４ 　 标准果糖溶液 称取 ５５℃ 真空干燥至恒重的果糖 １２５．０ｍｇ ， 精确至 ０．０００１ｇ ， 用水定容至 ２５ｍＬ （ 即 ５ｍｇ ／ ｍＬ ）， 存放于冰箱备用 。 使用时稀释 １００ 倍 （ 即 ５０ μ ｇ ／ ｍＬ ）。 ５ ． ２ ． ３ ． ２ 　 分析步骤 ５ ． ２ ． ３ ． ２ ． １ 　 绘制标准曲线 取 ２５ｍＬ 比色管分别加入 ５０ μ ｇ ／ ｍＬ 果糖标准溶液 ０ｍＬ 、 ０．２ｍＬ 、 ０．４ｍＬ 、 ０．６ｍＬ 和 ０．８ｍＬ ， 分 别用蒸馏水补充至 １ｍＬ 后 ， 于每管中加入 ０．２ｍＬ 半胱氨酸盐酸盐溶液 （ ５．２．３．１．１ ）、 ６ｍＬ 硫酸溶液 （ ５．２．３．１．３ ）， 摇匀后 ， 立即加入 ０．２ｍＬ 咔唑酒精溶液 （ ５．２．３．１．２ ）， 摇匀 ， 于 ６０℃ 水浴中保温 １０ｍｉｎ ， 取出 ， 用水冷却 ， 用 １０ｍｍ 比色皿于 ５６０ｎｍ 波长下比色 ， 以吸光度对果糖作图 ， 即得标准曲线 。 ５ ． ２ ． ３ ． ２ ． ２ 　 样品测定 将 ５．２．１．２ 或 ５．２．２．２ 的反应终止液适当稀释后 （ 使果糖含量在 ２０ μ ｇ ／ ｍＬ ～ ３０ μ ｇ ／ ｍＬ 范围内 ）， 准确吸取 １．０ｍＬ 于 ２５ｍＬ 比色管 ， 加入 ０．２ｍＬ 半胱氨酸盐酸盐溶液 、 ６ｍＬ 硫酸溶液 ， 摇匀后 ， 立即加 入 ０．２ｍＬ 咔唑酒精溶液 ， 摇匀 ， 于 ６０℃ 水浴中保温 １０ｍｉｎ ， 取出 ， 用水冷却 ， 用 １０ｍｍ 比色皿于 ５６０ｎｍ 波长下比色 ， 记录吸光度后 ， 在标准曲线图上查得相应的果糖含量 。 ５ ． ２ ． ４ 　 计算 ５ ． ２ ． ４