书 书 书犐犆犛 ６５ ． １２０ 犅 ４６ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２３７１０ — ２００９ 饲料中甜菜碱的测定 　 离子色谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犫犲狋犪犻狀犲犻狀犳犲犲犱狊 — 犐狅狀犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔 ２００９  ０６  １２ 发布 ２００９  １２  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准的附录 Ａ 为资料性附录 。 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口 。 本标准负责起草单位 ： 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 ［ 国家饲料质量监督检验中 心 （ 北京 ）］。 本标准参加起草单位 ： 中国农业科学院饲料研究所 。 本标准主要起草人 ： 闫惠文 、 索德成 、 张萍 、 刘庆生 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２３７１０ — ２００９ 饲料中甜菜碱的测定 　 离子色谱法 １ 　 范围 本标准规定了离子色谱法测定配合饲料 、 浓缩饲料 、 预混合饲料 、 饲料添加剂甜菜碱 （ 或盐酸盐 ） 和 复合甜菜碱中甜菜碱 （ 或盐酸盐 ） 的方法 。 本标准适用于配合饲料 、 浓缩饲料 、 预混合饲料 、 饲料添加剂甜菜碱 （ 或盐酸盐 ） 和复合甜菜碱中甜 菜碱 （ 或盐酸盐 ） 含量的测定 。 本标准定量限为 ２００ｍｇ ／ ｋｇ 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其随后所有 的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本标准 ， 然而 ， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本标准 。 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 ＧＢ ／ Ｔ１４６９９．１ 　 饲料 　 采样 ＧＢ ／ Ｔ２０１９５ 　 动物饲料 　 试样的制备 ３ 　 原理 用水溶解或提取试样中的甜菜碱 ， 溶液经过液  液萃取净化 ， 将提取液稀释至合适的浓度后 ， 使用阳 离子交换柱和非抑制型电导检测器分离测定 。 ４ 　 采样 按 ＧＢ ／ Ｔ１４６９９．１ 执行 。 ５ 　 试样的制备 按 ＧＢ ／ Ｔ２０１９５ 制备样品 。 ６ 　 试剂和溶液 除非另有说明 ， 在分析中仅使用优级纯或色谱纯试剂 。 ６ ． １ 　 水 ： 符合 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 一级用水的规定 。 ６ ． ２ 　 甲磺酸 （ 纯度 ≥ ９９％ ）。 ６ ． ３ 　 三氯甲烷 。 ６ ． ４ 　 流动相 ： １．５ｍｍｏｌ ／ Ｌ 甲磺酸水溶液 。 称取 ２．８８ｇ 甲磺酸 （ 精确至 ０．０１ｇ ）， 用水定容至 １０００ｍＬ ， 该溶液浓度为 ３０ｍｍｏｌ ／ Ｌ 。 取 ５０ｍＬ 该溶液 ， 用水定容至 １０００ｍＬ （ ｐＨ＝２．８ ～ ３．０ ）。 ６ ． ５ 　 甜菜碱 （ 或甜菜碱盐酸盐 ） 标准品 ： 纯度大于 ９８％ 。 ６ ． ６ 　 甜菜碱标准储备液 ： 准确称取 ０．１０００ｇ 于 １０５℃ 干燥过的甜菜碱 （ 或 ０．１３１２ｇ 于 １０５℃ 干燥过的甜菜碱盐酸盐 ） 标准 品于 １００ｍＬ 容量瓶中 ， 用水定容 。 该标准溶液中甜菜碱的浓度为 １ｍｇ ／ ｍＬ 。 ４℃ 冰箱保存 ， 有效期两 个月 。 １ 犌犅 ／ 犜 ２３７１０ — ２００９ ６ ． ７ 　 甜菜碱标准工作液 ： 准确吸取 ２５．０ｍＬ 、 ５．０ｍＬ 、 ２．５ｍＬ 、 ０．５ｍＬ 甜菜碱标准储备液 （ ６．６ ） 于 ５０ｍＬ 容量瓶中 ， 用水定 容 。 该标准工作液的浓度分别为 ： ０．５ｍｇ ／ ｍＬ 、 ０．１ｍｇ ／ ｍＬ 、 ０．０５ｍｇ ／ ｍＬ 、 ０．０１ｍｇ ／ ｍＬ 。 该溶液用时 现配 。 ７ 　 仪器设备 ７ ． １ 　 振荡器 （ 或超声波提取器 ）： 水平方向振荡 ， 频率 ２５０ｒ ／ ｍｉｎ ～ ３００ｒ ／ ｍｉｎ 。 ７ ． ２ 　 离心机 。 ７ ． ３ 　 离子色谱系统 ， 由下述部件组成 ： ——— 泵 （ 无脉冲 ）； ——— 电子电导检测器 ： 适合阳离子测定 ； ——— 分析柱 ： 阳离子交换分离柱或性能相当的其他分析柱 。 ７ ． ４ 　 电子天平 ： 感量为 ０．０００１ｇ 。 ８ 　 分析步骤 ８ ． １ 　 提取和净化 ８ ． １ ． １ 　 饲料样品 称取浓缩饲料和预混合饲料试样 ２ｇ 、 配合饲料试样 ５ｇ ， 精确至 ０．０００１ｇ ， 置于 １００ｍＬ 容量瓶中 ， 加入大约 ８０ｍＬ 水 ， 混合后置于振荡器上剧烈振荡或超声提取 ３０ｍｉｎ ， 静置 １０ｍｉｎ ， 定容 ， 离心或过 滤 。 取 ２ｍＬ 滤液于离心管中 ， 加入 ２ｍＬ 三氯甲烷 ， 剧烈震摇后放置 １０ｍｉｎ ， ５０００ｒ ／ ｍｉｎ 离心 １０ｍｉｎ ， 移取上层清液 ， 过 ０．４５ μ ｍ 滤膜后上机测定 。 ８ ． １ ． ２ 　 甜菜碱 （ 或盐酸盐 ） 和复合甜菜碱样品 称取添加剂甜菜碱 （ 或盐酸盐 ） 试样 ０．１ｇ 、 复合甜菜碱试样 １ｇ ， 精确至 ０．０００１ｇ ， 置于 １００ｍＬ 容 量瓶中 ， 加入大约 ８０ｍＬ 水 ， 混合后置于振荡器上剧烈振荡或超声提取 ３０ｍｉｎ ， 静置 １０ｍｉｎ ， 定容 ， 离心 或过滤 ， 滤液用水稀释至适当的浓度后过 ０．４５ μ ｍ 滤膜 ， 上机测定 。 ８ ． ２ 　 测定 ８ ． ２ ． １ 　 色谱条件 流速 ： １．０ｍＬ ／ ｍｉｎ 。 柱温 ： ４０℃ 。 进样量 ： １０ μ Ｌ ～ ２０ μ Ｌ 。 ８ ． ２ ． ２ 　 测定 向离子色谱 （ ＩＣ ） 分析仪连续注入甜菜碱标准工作液 ， 直至得到基线平稳 ， 峰形对称且峰面积能够 重现的色谱峰 。 依次注入标准 、 试样溶液 ， 积分得到峰面积 ， 用标准系列进行单点或多点校准 。 参见附录 Ａ 。 ９ 　 结果计算 试样中甜菜碱的含量 犡 １ 以毫克每千克 （ ｍｇ ／ ｋｇ ） 表示 ， 按式 （ １ ） 计算 ： 犡 １ ＝ 犮 × 犞 × １０００ 犿 …………………………（ １ ） 　　 式中 ： 犮 ——— 由标准曲线查得的试样测定液中甜菜碱的浓度 ， 单位为毫克每毫升 （ ｍｇ ／ ｍＬ ）； 犞 ——— 定容体积 ， 单位为毫升 （ ｍＬ ）； 犿 ——— 试样质量 ， 单位为克 （ ｇ ）。 ２ 犌犅 ／ 犜 ２３７１０ — ２００９ 试样中甜菜碱盐酸盐的含量 犡 ２ 以毫克每千克 （ ｍｇ ／ ｋｇ ） 表示 ， 按式 （ ２ ） 计算 ： 犡 ２ ＝ 犮 × 犞 × １０００ 犿 × １ ． ３１１７ …………………………（ ２ ） 　　 式中 ： 　 犮 ——— 由标准曲线查得的试样测定液中甜菜碱的浓度 ， 单位为毫克每毫升 （ ｍｇ ／ ｍＬ ）； 犞 ——— 定容体积 ， 单位为毫升 （ ｍＬ ）； 犿 ——— 试样质量 ， 单位为克 （ ｇ ）； １．３１１７ ——— 由甜菜碱换算成甜菜碱盐酸盐的系数 。 每个试样取两份试料进行平行测定 ， 以两次平行测定的算术平均值为测定结果 ， 结果保留三位有效 数字 。 １０ 　 重复性 两个平行试料测定值的相对偏差不大于 ５％ 。 犌犅 ／ 犜 ２３７１０ — ２００９ 书书书 犌犅／犜２３７１０—２００９ 附　录　犃 （资料性附录） 甜菜碱标准色谱图和典型样品色谱图 犃．１　甜菜碱标准色谱图见图Ａ．１。 图犃．１　甜菜碱标准色谱图 犃．２　配合饲料中甜菜碱标准色谱图见图Ａ．２。 图犃．２　 配合饲料中甜菜碱色谱图 ９００２ — ０１７３２犜／犅犌