书 书 书犐犆犛 ６７ ． ０６０ 犡 ０４ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２３８１８ — ２００９ 大豆中咪唑啉酮类除草剂残留量的测定 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犻犿犻犱犪狕狅犾犻狀狅狀犲犺犲狉犫犻犮犻犱犲狉犲狊犻犱狌犲狊犻狀狊狅狔犫犲犪狀 ２００９  ０５  ２５ 发布 ２００９  ０９  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准的附录 Ａ 、 附录 Ｂ 均为资料性附录 。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 。 本标准起草单位 ： 中国检验检疫科学研究院 、 中华人民共和国江西出入境检验检疫局 。 本标准主要起草人 ： 李晓娟 、 祁彦 、 张新忠 、 占春瑞 、 陈冬东 、 代汉慧 、 彭涛 、 贾然 、 李建忠 、 杨强 、 李淑娟 、 储晓刚 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２３８１８ — ２００９ 大豆中咪唑啉酮类除草剂残留量的测定 １ 　 范围 本标准规定了大豆籽粒中咪唑烟酸 、 甲基咪草烟 、 咪草酸甲酯 、 咪唑乙烟酸 、 咪唑喹啉酸残留量的高 效液相色谱和液相色谱  质谱 ／ 质谱测定方法 。 本标准适用于大豆籽粒中咪唑烟酸 、 甲基咪草烟 、 咪草酸甲酯 、 咪唑乙烟酸 、 咪唑喹啉酸残留量的 测定 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其随后所有 的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本标准 ， 然而 ， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本标准 。 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 （ ＧＢ ／ Ｔ６６８２ — ２００８ ， ＩＳＯ３６９６ ： １９８７ ， ＭＯＤ ） ３ 　 原理 试样用二氯甲烷提取 ， 凝胶渗透色谱法和液液分配法净化 ， 高效液相色谱法和液相色谱  质谱 ／ 质谱 法测定 ， 外标法定量 。 ４ 　 试剂和材料 除非另有说明 ， 所有试剂均为分析纯 ， 水为 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 规定的一级水 。 ４ ． １ 　 乙腈 ： 色谱纯 。 ４ ． ２ 　 正己烷 ： 色谱纯 。 ４ ． ３ 　 二氯甲烷 。 ４ ． ４ 　 磷酸 。 ４ ． ５ 　 滤膜 ： ０．２２ μ ｍ ， 有机相 。 ４ ． ６ 　 标准物质 ４ ． ６ ． １ 　 咪唑烟酸 （ ｉｍａｚａｐｙｒ ， ＣＡＳＮｏ．８１３３４３４１ ）： 纯度大于等于 ９９％ 。 ４ ． ６ ． ２ 　 甲基咪草烟 （ ｉｍａｚａｐｉｃ ， ＣＡＳＮｏ．１０４０９８４８８ ）： 纯度大于等于 ９９％ 。 ４ ． ６ ． ３ 　 咪草酸甲酯 （ ｉｍａｚａｍｅｔｈａｂｅｎｚｍｅｔｈｙｌ ， ＣＡＳＮｏ．８１４０５８５８ ）： 纯度大于等于 ９９．５％ 。 ４ ． ６ ． ４ 　 咪唑乙烟酸 （ ｉｍａｚｅｔｈａｐｙｒ ， ＣＡＳＮｏ．８１３３５７７５ ）： 纯度大于等于 ９９％ 。 ４ ． ６ ． ５ 　 咪唑喹啉酸 （ ｉｍａｚａｑｕｉｎ ， ＣＡＳＮｏ．８１３３５３７７ ）： 纯度大于等于 ９９．５％ 。 ４ ． ７ 　 标准储备溶液 ： 分别准确称取各标准物质 １０ｍｇ （ 精确至 ０．１ｍｇ ）， 用乙腈溶解并定容至 １００ｍＬ ， 配制成浓度为 １００ μ ｇ ／ ｍＬ 的标准储备溶液 ， 各标准储备溶液于 ０℃ ～ ４℃ 避光保存 。 ５ 　 仪器和设备 ５ ． １ 　 高效液相色谱仪 ： 配有紫外检测器 。 ５ ． ２ 　 液相色谱  质谱 ／ 质谱仪 ： 配有电喷雾电离源 。 ５ ． ３ 　 粉碎机 。 ５ ． ４ 　 样品筛 ： 筛孔尺寸 ０．４２５ｍｍ 。 ５ ． ５ 　 分析天平 ： 感量为 ０．１ｍｇ 和 １ｍｇ 。 １ 犌犅 ／ 犜 ２３８１８ — ２００９ ５ ． ６ 　 涡旋混合器 。 ５ ． ７ 　 振荡器 。 ５ ． ８ 　 旋转蒸发仪 。 ５ ． ９ 　 离心机 。 ５ ． １０ 　 具塞离心管 。 ５ ． １１ 　 凝胶渗透色谱仪 ： 填料 ＢｉｏｂｅａｄｓＳＸ３ ， ４０ｇ ； 玻璃柱 ７００ｍｍ×２５ｍｍ ； 流动相二氯甲烷 ； 流动相 流速 ５．０ｍＬ ／ ｍｉｎ ； 进样量 ５．０ｍＬ ； 检测波长 ２５０ｎｍ 。 ６ 　 试样制备与保存 ６ ． １ 　 试样制备 取代表性试样 ５００ｇ ， 用粉碎机粉碎并使其全部通过 ０．４２５ｍｍ 的样品筛 ， 混和均匀 ， 装入洁净的容 器内 ， 密封并标识 。 ６ ． ２ 　 试样保存 试样于 ０℃ ～ ４℃ 避光保存 。 取样 、 制样及保存过程中应防止试样受到污染或者残留农药含量发 生变化 。 ７ 　 分析步骤 ７ ． １ 　 提取 准确称取 ５ｇ 试样 （ 精确至 ０．０１ｇ ） 于 ５０ｍＬ 具塞离心管中 ， 向离心管中加入 ３５ｍＬ 二氯甲烷 ， 涡 旋混合 ２ｍｉｎ 后置于振荡器上振荡提取 ２０ｍｉｎ ， 以 ４０００ｒ ／ ｍｉｎ 速度离心 ５ｍｉｎ ， 取上层清液并经二氯甲 烷润湿的滤纸过滤后 ， 收集于 １００ｍＬ 梨形瓶中 。 再向残余试样中加入 ３５ｍＬ 二氯甲烷 ， 重复上述操 作 。 再用 １０ｍＬ 二氯甲烷分 ３ 次 ～ ５ 次洗涤离心管和滤纸 ， 合并洗涤液于梨形瓶中 ， 于 ４０℃ 水浴中减 压浓缩至约 ３ｍＬ 。 将浓缩液用二氯甲烷定容至 １０ｍＬ ， 以 ４０００ｒ ／ ｍｉｎ 速度离心 ５ｍｉｎ ， 再将上层清液 转移至 ＧＰＣ 进样瓶中 ， 待净化 。 ７ ． ２ 　 净化 样品提取液首先采用凝胶渗透色谱法净化 ， 在 ５．１１ 的仪器条件下 ， 收集第 １３．８０ｍｉｎ ～ ２２．８ｍｉｎ 的馏分共 ４５ｍＬ ， 于 ４０℃ 水浴中减压浓缩至近干 ， 再用氮气吹干 。 用 ２ｍＬ 乙腈溶解残渣 ， 再加入 ２ｍＬ 乙腈饱和的正己烷 ， 涡旋振荡 ２ｍｉｎ ， 静置分层后弃去正己烷层 ， 乙腈层用氮气吹干 。 再用乙腈定容至 １．０ｍＬ ， 供 ＨＰＬＣ 和 ＬＣＭＳ ／ ＭＳ 测定 。 ７ ． ３ 　 高效液相色谱和液相色谱  质谱 ／ 质谱测定 ７ ． ３ ． １ 　 高效液相色谱法参考条件 ａ ） 　 色谱柱 ： Ｃ １８ 柱 ， ２５０ｍｍ×４．６ｍｍ （ 内径 ）， ５ μ ｍ ， 或相当者 ； ｂ ） 　 柱温 ： ３０℃ ； ｃ ） 　 流动相及梯度洗脱程序参见附录 Ａ ； ｄ ） 　 流速 ： １．０ｍＬ ／ ｍｉｎ ； ｅ ） 　 进样量 ： １０ μ Ｌ ； ｆ ） 　 检测波长 ： ２５０ｎｍ 。 ７ ． ３ ． ２ 　 液相色谱  质谱 ／ 质谱法参考条件 ａ ） 　 色谱柱 ： Ｃ １８ 柱 ， １５０ｍｍ×２．１ｍｍ （ 内径 ）， ３．５ μ ｍ ， 或相当者 ； ｂ ） 　 柱温 ： ３０℃ ； ｃ ） 　 流动相及梯度洗脱程序参见附录 Ａ ； ｄ ） 　 流速 ： ０．２ｍＬ ／ ｍｉｎ ； ｅ ） 　 进样量 ： １０ μ Ｌ ； ２ 犌犅 ／ 犜 ２３８１８ — ２００９ ｆ ） 　 质谱 ／ 质谱参考条件参见附录 Ａ 。 ７ ． ３ ． ３ 　 定量测定 ７ ． ３ ． ３ ． １ 　 ＨＰＬＣ 法 ： 根据样液中咪唑啉酮类除草剂的含量 ， 选取浓度相近的标准工作溶液 ， 待测样液 中咪唑啉酮类除草剂的响应值应在仪器检测的线性范围内 。 对标准工作溶液及样液等体积交替进样测 定 。 在 ７．３．１ 的仪器条件下 ， 保留时间约为咪唑烟酸 ８．６０ｍｉｎ ， 甲基咪草烟 １１．５０ｍｉｎ ， 咪草酸甲酯 １３．７３ｍｉｎ ， 咪唑乙烟酸 １５．９８ｍｉｎ ， 咪唑喹啉酸 ２０．３８ｍｉｎ ， 色谱图参见附录 Ｂ 中图 Ｂ．１ 。 ７ ． ３ ． ３ ． ２ 　 ＬＣＭＳ ／ ＭＳ 法 ： 根据样液中咪唑啉酮类除草剂的含量 ， 选取浓度相近的标准工作溶液 ， 待测 样液中咪唑啉酮类除草剂的响应值应在仪器检测的线性范围内 。 对标准工作溶液及样液等体积交替进 样测定 。 在 ７．３．２ 的仪器条件下 ， 保留时间约为咪唑烟酸 ５．２１ｍｉｎ ， 甲基咪草烟 ６．６３ｍｉｎ ， 咪草酸甲酯 ７．０３ｍｉｎ ， 咪唑乙烟酸 ７．２９ｍｉｎ ， 咪唑喹啉酸 ７．７８ｍｉｎ ， 多反应监测质量色谱图参见附录 Ｂ 中图 Ｂ．２ 。 ７ ． ３ ． ４ 　 定性测定 按照上述条件测定试样和标准溶液 ， 如果试样中化合物质量色谱峰的保留时间与标准溶液相比在 ±２．５％ 的允许偏差之内 ； 样品中待测组分的两个子离子的相对丰度与浓度相当的标准溶液相比 ， 相对 丰度偏差不超过表 １ 的规定 ， 则可判断试样中存在相应的目标化合物 。 表 １ 　 定性离子相对丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 ／ ％ ＞ ５０ ＞ ２０ ～ ５０ ＞ １０ ～ ２０ ≤ １０ 允许的最大偏差 ／ ％ ±２０ ±２５ ±３０ ±５０ ７ ． ４ 　 空白试验 除不称取试样外 ， 均按上述条件和步骤进行 。 ８ 　 结果计算与表达 试样中待测化合物的残留量可采用数据处理软件或按式 （ １ ） 计算 ： 犡 犻 ＝ 犆 犻 × 犞 × １０００ 犿 × １０００ …………………………（ １ ） 　　 式中 ： 犡 犻 ——— 试样中待测化合物的残留量 ， 单位为毫克每千克 （ ｍｇ ／ ｋｇ ）； 犆 犻 ———