书 书 书犐犆犛 ７１ ． ０４０ ． ４０ 犌 ７６ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 １４６４３ ． ５ — ２００９ 代替 ＧＢ ／ Ｔ１４６４３．５ — １９９３ 工业循环冷却水中菌藻的测定方法 第 ５ 部分 ： 硫酸盐还原菌的测定 犕犘犖 法 犈狓犪犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犫犪犮狋犲狉犻犪犪狀犱犪犾犵犪犲犻狀犻狀犱狌狊狋狉犻犪犾犮犻狉犮狌犾犪狋犻狀犵犮狅狅犾犻狀犵狑犪狋犲狉 — 犘犪狉狋 ５ ： 犈狓犪犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狊狌犾犳犪狋犲狉犲犱狌犮犻狀犵犫犪犮狋犲狉犻犪 — 犕犘犖狋犲狊狋 ２００９  ０５  １８ 发布 ２０１０  ０２  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 ＧＢ ／ Ｔ１４６４３ 《 工业循环冷却水中菌藻的测定方法 》 分为以下几个部分 ： ——— 第 １ 部分 ： 黏液形成菌的测定 　 平皿计数法 ——— 第 ２ 部分 ： 土壤菌群的测定 　 平皿计数法 ——— 第 ３ 部分 ： 黏泥真菌的测定 　 平皿计数法 ——— 第 ４ 部分 ： 土壤真菌的测定 　 平皿计数法 ——— 第 ５ 部分 ： 硫酸盐还原菌的测定 　 ＭＰＮ 法 ——— 第 ６ 部分 ： 铁细菌的测定 　 ＭＰＮ 法 本部分为 ＧＢ ／ Ｔ１４６４３ 的第 ５ 部分 。 本部分代替 ＧＢ ／ Ｔ１４６４３．５ — １９９３ 《 工业循环冷却水中硫酸盐还原菌的测定 　 ＭＰＮ 法 》。 本部分与 ＧＢ ／ Ｔ１４６４３．５ — １９９３ 相比 ， 在技术内容上并无变化 ， 只是对文本结构和文字进行了 修改 。 本部分的附录 Ａ 、 附录 Ｂ 、 附录 Ｃ 为规范性附录 。 本部分由中国石油和化学工业协会提出 。 本部分由全国化学标准化技术委员会水处理剂分会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ６３ ／ ＳＣ５ ） 归口 。 本部分负责起草单位 ： 中海油天津化工研究设计院 、 天津正达科技有限责任公司 。 本部分主要起草人 ： 朱传俊 、 张全 、 邵宏谦 、 李琳 、 白莹 。 本部分于 １９９３ 年首次发布 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 １４６４３ ． ５ — ２００９ 工业循环冷却水中菌藻的测定方法 第 ５ 部分 ： 硫酸盐还原菌的测定 犕犘犖 法 １ 　 范围 ＧＢ ／ Ｔ１４６４３ 的本部分规定了工业循环冷却水中硫酸盐还原菌的测定方法 。 本部分适用于工业循环冷却水中硫酸盐还原菌的测定 ， 也适用于原水 、 生活用水及粘泥中硫酸盐还 原菌的测定 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过 ＧＢ ／ Ｔ１４６４３ 的本部分的引用而成为本部分的条款 。 凡是注日期的引用文 件 ， 其随后所有的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本部分 ， 然而 ， 鼓励根据本部分达成 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本 部分 。 ＧＢ ／ Ｔ６０３ 　 化学试剂 　 试验方法中所用制剂及制品的制备 （ ＧＢ ／ Ｔ６０３ — ２００２ ， ＩＳＯ６３５３１ ： １９８２ ， ＮＥＱ ） ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 （ ＧＢ ／ Ｔ６６８２ — ２００８ ， ＩＳＯ３６９６ ： １９８７ ， ＭＯＤ ） ３ 　 方法提要 本法采用多试管发酵技术 ， 在 （ ２９±１ ） ℃ 培养 ２１ｄ ， 如果试管内产生黑色沉淀并伴有硫化氢臭味的 ， 表明阳性反应 ， 采用 ＭＰＮ 技术对被测试样中的硫酸盐还原菌进行计数 。 ４ 　 试剂和材料 本部分所用试剂 ， 除非另有规定 ， 应使用分析纯试剂和符合 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 中三级水的规定 。 试验中所需制剂及制品 ， 在没有注明其他要求时 ， 均按 ＧＢ ／ Ｔ６０３ 之规定制备 。 ４ ． １ 　 磷酸氢二钾 。 ４ ． ２ 　 氯化铵 。 ４ ． ３ 　 硫酸钠 。 ４ ． ４ 　 氯化钙 。 ４ ． ５ 　 硫酸镁 。 ４ ． ６ 　 乳酸钠 。 ４ ． ７ 　 酵母汁 ： 生化试剂 。 ４ ． ８ 　 硫酸亚铁铵 。 ４ ． ９ 　 维生素 Ｃ 。 ４ ． １０ 　 氯化钠 。 ４ ． １１ 　 氢氧化钠溶液 ： ４０ｇ ／ Ｌ 。 ４ ． １２ 　 盐酸溶液 ： １＋１１ 。 ４ ． １３ 　 硫代硫酸钠 。 ４ ． １４ 　 乙醇溶液 ： ７５％ （ 体积分数 ）。 １ 犌犅 ／ 犜 １４６４３ ． ５ — ２００９ ４ ． １５ 　 牛皮纸 。 ４ ． １６ 　 医用脱脂棉 。 ５ 　 仪器 、 设备 ５ ． １ 　 无菌箱 （ 室 ） 或超净工作台 。 ５ ． ２ 　 蒸汽压力灭菌器 。 ５ ． ３ 　 生化培养箱 。 ５ ． ４ 　 电热干燥箱 ： 温度可控制在 ６０℃ ～ ２８０℃ 。 ５ ． ５ 　 电热恒温水浴锅 ： 恒温范围 ３７℃ ～ １００℃ 。 ５ ． ６ 　 刻度吸管 ： １ｍＬ 。 ５ ． ７ 　 刻度吸管 ： ５ｍＬ 。 ５ ． ８ 　 试管 ： １５０ｍｍ×１５ｍｍ 并配上密封的塞子 。 ５ ． ９ 　 试管架 。 ５ ． １０ 　 刻度三角瓶 ： ５００ｍＬ 。 ５ ． １１ 　 磨口三角瓶 ： １００ｍＬ 。 ５ ． １２ 　 磨口试剂瓶 ： １０００ｍＬ 。 ５ ． １３ 　 容量瓶 ： １０００ｍＬ 。 ６ 　 试验前准备 ６ ． １ 　 无菌水的制备 将水分装在 １００ｍＬ 磨口三角瓶中 ， 每瓶 ４０ｍＬ ， 每个三角瓶塞子和瓶口间插入一小纸片来防止粘 连 ， 每个瓶子的瓶口均用牛皮纸包扎 ， 以防污染 ， 用蒸汽压力灭菌器于 （ １２１±１ ） ℃ 灭菌 １５ｍｉｎ 。 ６ ． ２ 　 培养基的制备 ６ ． ２ ． １ 　 称取下列试剂 ： 磷酸氢二钾 　　 ０．５ｇ ； 氯化铵 　 １．０ｇ ； 硫酸钠 ０．５ｇ ； 氯化钙 ０．１ｇ ； 硫酸镁 ２．０ｇ ； 乳酸钠 ３．５ｇ ； 酵母汁 １．０ｇ 。 将上述试剂溶解在 １０００ｍＬ 水中 ， 用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节 ｐＨ 至 ７．２±０．２ ， 并分装在 ５００ｍＬ 刻度三角瓶中 ， 每瓶不超过 ３５０ｍＬ ， 瓶口塞上棉塞 ， 并用牛皮纸包好 ， 用蒸汽压力灭菌器于 （ １２１±１ ） ℃ 灭菌 １５ｍｉｎ 。 ６ ． ２ ． ２ 　 硫酸亚铁铵溶液 ： 在培养基使用的当天称取 １．２ｇ 硫酸亚铁铵 ， 在无菌箱 （ 室 ） 内均匀地摊在离 紫外线灯 ３０ｃｍ 处灭菌 ３０ｍｉｎ ， 在无菌操作下 ， 把硫酸亚铁铵溶解于事先准备好的无菌水中 ， 混匀 。 ６ ． ２ ． ３ 　 维生素 Ｃ 溶液 ： 在培养基使用的当天称取 ０．４ｇ 维生素 Ｃ ， 在无菌箱 （ 室 ） 内均匀地摊在离紫外 线灯 ３０ｃｍ 处灭菌 ３０ｍｉｎ 。 在无菌操作下 ， 把维生素 Ｃ 溶解于事先准备好的无菌水中 ， 混匀 。 ６ ． ２ ． ４ 　 在无菌操作下 ， 按每 １００ｍＬ 培养基各加入 １．０ｍＬ 硫酸亚铁铵溶液和 １．０ｍＬ 维生素 Ｃ 溶液 。 ６ ． ３ 　 无菌稀释水的制备 ６ ． ３ ． １ 　 生理盐水的配制 ： 称取 ８．５ｇ 氯化钠溶解在 １０００ｍＬ 水中 ， 混匀 。 ６ ． ３ ． ２ 　 将生理盐水分装在 １００ｍＬ 磨口三角瓶中 ， 每瓶 ４５ｍＬ ， 每个三角瓶塞子和瓶口间插入一小纸片 ， 塞紧瓶塞 ， 每个瓶子的瓶口均用牛皮纸包扎以防污染 ， 用蒸汽压力灭菌器于 （ １２１±１ ） ℃ 灭菌 １５ｍｉｎ 。 ２ 犌犅 ／ 犜 １４６４３ ． ５ — ２００９ ６ ． ４ 　 刻度吸管的灭菌 ６ ． ４ ． １ 　 将洗净并烘干后的吸管粗端塞上医用脱脂棉 ， 棉花量要适宜 ， 长度大约 １０ｍｍ ～ １５ｍｍ ， 棉花不 宜露在口外 ， 多余的棉花可以用火焰烧掉 。 ６ ． ４ ． ２ 　 每支刻度吸管用 １ 条约 ４０ｍｍ ～ ５０ｍｍ 宽的牛皮纸条 ， 以 ４５° 左右角度螺旋形卷起来 ， 吸管的 尖端在头部 ， 粗端用多余纸条折叠打结 ， 不使散开 。 标上度量 ， 若干支扎成一束 ， 置电热干燥箱中 ， 于 （ １６０±２ ） ℃ 灭菌 ２ｈ 。 ６ ． ５ 　 试管的灭菌 将洗净并烘干后的试管塞上密封的塞子 ， 数支一捆 ， 每捆管口用牛皮纸包扎 ， 置电热干燥箱中 ， 于 （ １６０±２ ） ℃ 灭菌 ２ｈ 。 ６ ． ６ 　 采样瓶的灭菌 将洗净并烘干后的 １０００ｍＬ 磨口试剂瓶瓶口和瓶颈用牛皮纸裹好 ， 扎紧 ， 置电热干燥箱中 ， 于 （ １６０±２ ） ℃ 灭菌 ２ｈ 。 ６ ． ７ 　 硫代硫酸钠灭菌 将硫代硫酸钠放在无菌箱 （ 室 ） 内 ， 并均匀地摊在离紫外线灯 ３０ｃｍ 处灭菌 ３０ｍｉｎ 。 ７ 　 测定步骤 ７ ． １ 　 水样的采集 ７ ． １ ． １ 　 用无菌采样瓶采集被测样品 ， 在取样过程中 ， 要保护瓶口和颈部 ， 防止这些部分受杂菌污染 ， 瓶 内要灌满水样 。 ７ ． １ ． ２ 　 若采集的水中有余氯 ， 应在采样前 ， 在无菌操作下 ， 于无菌采样瓶中加入硫代硫酸钠 ， 加入量为 每升水样约 ０．１ｇ 。 ７ ． １ ． ３ 　 水样采集后 ， 应立即进行测定 ， 如果在 ２ｈ 内不能进行测定 ， 应把水样放在冰箱中 ， 于 ４℃ ～ １０℃ 保存 ， 存放时间不宜超过 ２４ｈ 。 经冷冻保存后的水样需测定时 ， 从冰箱中取出 ， 于 ３０℃ 左右活化 ４ｈ ～ ５ｈ