书 书 书犐犆犛 ６５ ． １２０ 犆犆犛犅 ４６ /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G27 /G28 /G29 /G2A 犌犅 ／ 犜 ２３８８４ — ２０２１ /G21 /G22 犌犅 ／ 犜 ２３８８４ — ２００９ /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G28 /G29 /G2A /G24 /G2B /G2C /G2D /G2E /G2F /G30 /G31 /G32 /G33 /G34 /G35 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犫犻狅犵犲狀犻犮犪犿犻狀犲狊犻狀犪狀犻犿犪犾犱犲狉犻狏犲犱犳犲犲犱狊 — 犎犻犵犺狆犲狉犳狅狉犿犪狀犮犲犾犻狇狌犻犱犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔 ２０２１  １０  １１ /G36 /G37 ２０２２  ０５  ０１ /G38 /G39 /G27 /G28 /G2B /G2C /G2D /G2E /G2F /G30 /G31 /G32 /G27 /G28 /G29 /G2A /G33 /G2F /G30 /G34 /G35 /G36 /G36 /G37书 书 书前 　　 言 　　 本文件按照 ＧＢ ／ Ｔ１．１ — ２０２０ 《 标准化工作导则 　 第 １ 部分 ： 标准化文件的结构和起草规则 》 的规定起草 。 本文件代替 ＧＢ ／ Ｔ２３８８４ — ２００９ 《 动物源性饲料中生物胺的测定 　 高效液相色谱法 》， 与 ＧＢ ／ Ｔ２３８８４ — ２００９ 相比 ， 除结构调整和编辑性改动外 ， 主要技术变化如下 ： ——— 增加了色胺 、 苯乙胺和章鱼胺的测定 ； 增加了虾粉 、 鸡肉粉 、 猪肉粉 、 血粉 、 羽毛粉 、 鱼溶浆 、 乌贼膏和蚕蛹粉 ８ 种动物源性饲料原料 ； 修改了方法的检出限 ， 增加了定量限 （ 见第 １ 章 ， ２００９ 年版的第 １ 章 ）； ——— 修改了衍生剂 、 衍生条件和衍生后处理方法 （ 见 ５．１１ 、 ８．２ ， ２００９ 年版的 ４．１ 、 ７．１．２ 、 ７．１．３ ）； ——— 修改了色谱梯度洗脱程序 （ 见表 １ ， ２００９ 年版的表 １ ）； ——— 删除了 “ ６ 种生物胺的化学名称 、 分子式和相对分子质量 ”（ 见 ２００９ 年版的附录 Ａ ）； ——— 修改了生物胺液相色谱图 （ 见附录 Ａ ， ２００９ 年版的附录 Ｂ ）。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。 本文件的发布机构不承担识别专利的责任 。 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ７６ ） 提出并归口 。 本文件起草单位 ： 中国农业大学 。 本文件主要起草人 ： 杨文军 、 田颖 、 张丽英 、 陈义强 。 本文件于 ２００９ 年首次发布 ， 本次为第一次修订 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２３８８４ — ２０２１ 动物源性饲料中生物胺的测定高效液相色谱法 １ 　 范围 本文件规定了动物源性饲料原料中色胺 、 苯乙胺 、 腐胺 、 尸胺 、 组胺 、 章鱼胺 、 酪胺 、 亚精胺和精胺的高效液相色谱测定方法 。 本文件适用于鱼粉 、 虾粉 、 鸡肉粉 、 猪肉粉 、 肉骨粉 、 血粉 、 羽毛粉 、 鱼溶浆 、 乌贼膏和蚕蛹粉等动物源性饲料原料中色胺 、 苯乙胺 、 腐胺 、 尸胺 、 组胺 、 章鱼胺 、 酪胺 、 亚精胺和精胺九种生物胺的测定 。 本文件检出限为 ５ｍｇ ／ ｋｇ ， 定量限为 １０ｍｇ ／ ｋｇ 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。 其中 ， 注日期的引用文件 ， 仅该日期对应的版本适用于本文件 ； 不注日期的引用文件 ， 其最新版本 （ 包括所有的修改单 ） 适用于本文件 。 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 ＧＢ ／ Ｔ２０１９５ 　 动物饲料 　 试样的制备 ３ 　 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义 。 ４ 　 原理 试样中的生物胺经高氯酸溶液提取 、 丹磺酰氯衍生 ， 用高效液相色谱仪测定 ， 外标法定量 。 ５ 　 试剂或材料 除非另有规定 ， 仅使用分析纯试剂 。 ５ ． １ 　 水 ： ＧＢ ／ Ｔ６６８２ ， 一级 。 ５ ． ２ 　 乙腈 ： 色谱纯 。 ５ ． ３ 　 丙酮 。 ５ ． ４ 　 氨水 。 ５ ． ５ 　 乙酸铵 ： 色谱纯 。 ５ ． ６ 　 乙酸铵溶液 （ ５ｍｍｏｌ ／ Ｌ ）： 称取 ０．３８ｇ 乙酸铵 （ ５．５ ）， 加水溶解 ， 定容至 １Ｌ 。 ５ ． ７ 　 高氯酸提取液 （ ０．４ｍｏｌ ／ Ｌ ）： 准确量取高氯酸 ３２．３ｍＬ ， 用水定容至 １Ｌ 。 ５ ． ８ 　 氢氧化钠溶液 （ ２ｍｏｌ ／ Ｌ ）： 准确称取 ８ｇ 氢氧化钠 ， 用水定容至 １００ｍＬ 。 ５ ． ９ 　 饱和碳酸氢钠溶液 ： 向水中加入足量的碳酸氢钠固体直到无法再溶解 。 ５ ． １０ 　 盐酸溶液 （ ０．１ｍｏｌ ／ Ｌ ）： 准确量取 ８．３ｍＬ 浓盐酸 ， 用水定容至 １Ｌ 。 １ 犌犅 ／ 犜 ２３８８４ — ２０２１ ５ ． １１ 　 丹磺酰氯衍生溶液 （ １０ｍｇ ／ ｍＬ ）： 称取 １ｇ 丹磺酰氯 （ ＣＡＳ 号 ： ６０５６５２ ， ≥ ９９％ ）， 用丙酮溶解 ， 定容至 １００ｍＬ 。 临用现配 。 ５ ． １２ 　 标准储备溶液 （ １ｍｇ ／ ｍＬ ）： 分别称取色胺 （ ＣＡＳ 号 ： １４７６３９７ ， 纯度 ≥ ９９％ ） １２ｍｇ 、 苯乙胺 （ ＣＡＳ 号 ： ６４０４０ ， 纯度 ≥ ９８％ ） １３ｍｇ 、 腐胺 · 二盐酸 （ ＣＡＳ 号 ： ３３３９３７ ， 纯度 ≥ ９８％ ） １８ｍｇ 、 尸胺 （ ＣＡＳ 号 ： ４６２９４２ ， 纯度 ≥ ９８．８％ ） １０ｍｇ 、 组胺 （ ＣＡＳ 号 ： ５１４５５ ， 纯度 ≥ ９７％ ） １０ｍｇ 、 章鱼胺 · 一盐酸 （ ＣＡＳ 号 ： ７７００５９ ， 纯度 ≥ ９９．３％ ） １２ｍｇ 、 酪胺 （ ＣＡＳ 号 ： ５１６７２ ， 纯度 ≥ ９８％ ） １０ｍｇ 、 亚精胺 · 三盐酸 （ ＣＡＳ 号 ： ３３４５０９ ， 纯度 ≥ ９９．９％ ） １７ｍｇ 、 精胺 （ ＣＡＳ 号 ： ７１４４３ ， 纯度 ≥ ９８％ ） １０ｍｇ （ 精确至 ０．０１ｍｇ ）， 分别置于 １０ｍＬ 棕色容量瓶中 ， 用盐酸溶液 （ ５．１０ ） 溶解并定容 。 于 －１８℃ 以下保存 ， 有效期为 ６ 个月 。 　　 注 ： 标准溶液的配制浓度以各生物胺的单体计算 ， 称取标准品时对其中的盐酸盐进行折算 。 所有标准溶液配制好 后转移至密闭棕色容器中 ， 避光贮存 。 ５ ． １３ 　 混合标准中间溶液 （ １００ μ ｇ ／ ｍＬ ）： 准确移取各生物胺标准储备溶液 （ ５．１２ ） １ｍＬ 于 １０ｍＬ 棕色容量瓶中 ， 用盐酸溶液 （ ５．１０ ） 定容 。 于 ２℃ ～ ８℃ 保存 ， 有效期为 １ 周 。 ５ ． １４ 　 混合标准系列溶液 ： 准确移取适量混合标准中间溶液 （ ５．１３ ） 于 １０ｍＬ 棕色容量瓶中 ， 用水 （ ５．１ ） 稀释定容配成系列标准溶液 ， 浓度分别为 ： ０．２５ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ０．５ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ５．０ μ ｇ ／ ｍＬ 、 １０．０ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ２５．０ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ５０．０ μ ｇ ／ ｍＬ 、 １００．０ μ ｇ ／ ｍＬ 。 临用现配 。 ５ ． １５ 　 微孔滤膜 ： ０．２２ μ ｍ ， 有机系 。 ６ 　 仪器设备 ６ ． １ 　 高效液相色谱仪 ： 配有紫外检测器或二极管阵列检测器 。 ６ ． ２ 　 分析天平 ： 感量 ０．１ｍｇ 和 ０．０１ｍｇ 。 ６ ． ３ 　 恒温摇床 ： 控温精度 ±１℃ 。 ６ ． ４ 　 旋涡混匀器 。 ６ ． ５ 　 离心机 ： 转速不低于 ５０００ｒ ／ ｍｉｎ 。 ６ ． ６ 　 氮吹仪 。 ６ ． ７ 　 超声波清洗器 。 ６ ． ８ 　 匀浆机 。 ７ 　 样品 ７ ． １ 　 固体 按 ＧＢ ／ Ｔ２０１９５ 制备样品 ， 至少 １００ｇ ， 粉碎使其全部通过 ０．４２ｍｍ 孔径的分析筛 ， 充分混匀 ， 装入 磨口瓶中 ， 避光保存 ， 备用 。 ７ ． ２ 　 膏浆状 按 ＧＢ ／ Ｔ２０１９５ 制备样品 ， 至少 １００ｇ ， 用一台机械搅拌器或均质器混合样品 ， 边摇边用勺或大口吸 管转移 １００ｇ 或 １００ｍＬ 样品到磨口瓶中 ， 避光保存 ， 备用 。 ８ 　 试验步骤 ８ ． １ 　 提取 平行做两份试验 。 称取试样 １ｇ ， 准确至 ０．０００１ｇ ， 置于 ５０ｍＬ 离心管中 ， 准确加入 １０ｍＬ 高氯酸提 ２ 犌犅 ／ 犜 ２３８８４ — ２０２１ 取液 （ ５．７ ）， 涡旋混匀 （ 膏浆状样品均质 ３０ｓ ）， 置于摇床上 ， 室温下 ２００ｒ ／ ｍｉｎ 振荡 １０ｍｉｎ ， 于 ５０００ｒ ／ ｍｉｎ 离心 １０ｍｉｎ ， 上清液倒入另一 ５０ｍＬ 离心管中 ， 残渣再用 １０ｍＬ 高氯酸提取液 （ ５．７ ） 提取 ， 重复上述操作 ， 合并上清液 ， 备用 。 ８ ． ２ 　 衍生化 准确移取上清液 （ 见 ８．１ ） １ｍＬ ， 放入 １５ｍＬ 具塞离心管中 ， 依次加入 ２００ μ Ｌ 氢氧化钠溶液 （ ５．８ ）、 ３００ μ Ｌ 饱和碳酸氢钠