书 书 书犐犆犛 ７１ ． ０８０ ． ４０ 犌 １５ 　 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２４７７３ — ２００９ 乌索酸纯度的测定 高效液相色谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狆狌狉犻狋狔犳狅狉狌狉狊狅犾犻犮犪犮犻犱 — 犎犻犵犺狆犲狉犳狅狉犿犪狀犮犲犾犻狇狌犻犱犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺犻犮犿犲狋犺狅犱 ２００９  １２  １５ 发布 ２０１０  ０７  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准的附录 Ａ 为资料性附录 。 本标准由中国石油和化学工业协会提出 。 本标准由全国化学标准化技术委员会有机化工分技术委员会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ６３ ／ ＳＣ２ ） 归口 。 本标准负责起草单位 ： 宜春学院 。 本标准参加起草单位 ： 北京天宝物华生物技术有限公司 。 本标准主要起草人 ： 李开泉 、 叶文峰 、 曾晓敏 、 邹盛勤 、 钱渊华 、 韩笑 、 余国平 、 彭军平 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２４７７３ — ２００９ 乌索酸纯度的测定 高效液相色谱法 １ 　 范围 本标准规定了用高效液相色谱法测定乌索酸纯度的试验方法 。 本标准适用于从枇杷叶 、 迷迭香等植物中提取的乌索酸产品中乌索酸质量分数的测定 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而构成本标准的条款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其随后所有 的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本标准 ， 然而 ， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本标准 。 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ — ２００８ 　 分析实验室用水规格和试验方法 （ ＩＳＯ３６９６ ： １９８７ ， ＭＯＤ ） ３ 　 试验方法 ３ ． １ 　 警示 试验方法规定的一些试验过程可能导致危险情况 ， 操作者应采取适当的安全和防护措施 。 ３ ． ２ 　 方法提要 用高效液相色谱法 ， 在选定的工作条件下 ， 通过色谱柱使样品溶液中目标化合物与杂质分离 ， 用紫 外吸收检测器检测 ， 用外标法定量 ， 计算样品中乌索酸的质量分数 。 ３ ． ３ 　 试剂 ３ ． ３ ． １ 　 水 ， ＧＢ ／ Ｔ６６８２ — ２００８ ， 二级 ： 经 ０．４５ μ ｍ 滤膜过滤并超声脱气 。 ３ ． ３ ． ２ 　 甲醇 （ 色谱纯 ）。 ３ ． ３ ． ３ 　 乌索酸标准样品 ： 国家有证标准样品 ， 乌索酸的质量分数 ≥ ９９．８％ 。 ３ ． ４ 　 仪器 ３ ． ４ ． １ 　 高效液相色谱系统 ３ ． ４ ． １ ． １ 　 高压泵 ： 无脉冲 ， 能将流量保持在 ０．１ｍＬ ／ ｍｉｎ ～ １０．０ｍＬ ／ ｍｉｎ 。 ３ ． ４ ． １ ． ２ 　 定量环 ： １０ μ Ｌ 。 ３ ． ４ ． １ ． ３ 　 紫外吸收检测器 ： 可变波长 。 ３ ． ４ ． １ ． ４ 　 数据处理系统 ： 色谱工作站或数据处理机 。 ３ ． ４ ． ２ 　 抽滤系统 抽滤系统使用孔径为 ０．４５ μ ｍ 的纤维素酯滤膜 （ 用于流动相的预处理 ）。 ３ ． ４ ． ３ 　 过滤系统 过滤系统使用孔径为 ０．４５ μ ｍ 的纤维素酯滤膜 （ 用于样品的预处理 ）。 ３ ． ４ ． ４ 　 进样器 自动进样器 ， 或微量进样针 （ ＨＰＬＣ 专用 ）： ５０ μ Ｌ 。 ３ ． ５ 　 色谱分析条件 推荐的色谱柱及典型色谱操作条件见表 １ ， 乌索酸含量的测定典型高效液相色谱图参见附录 Ａ 图 Ａ．１ ， 各组分的保留时间参见附录 Ａ 表 Ａ．１ 。 其他能达到同等分离程度的色谱柱和色谱操作条件均 可使用 。 １ 犌犅 ／ 犜 ２４７７３ — ２００９ 表 １ 　 色谱柱和典型色谱操作条件 色谱柱 ５ μ ｍ 多孔球形 ， 以硅胶为基质 ， 表面键合 Ｃ １８ 的反相色谱柱 ， 柱长 ２５０ｍｍ ， 柱内径 ４．６ｍｍ 柱温 室温 流动相 甲醇 ∶ 水 ＝８８∶１２ （ 体积比 ） 流动相流量 ／（ ｍＬ ／ ｍｉｎ ） １．０ ＵＶ 检测波长 ／ ｎｍ ２１０ 进样量 ／ μ Ｌ １０ ３ ． ６ 　 分析步骤 ３ ． ６ ． １ 　 乌索酸标准样品溶液的制备 称取 ０．０１０ｇ 乌索酸标准样品 ， 精确至 ０．００００１ｇ ， 用甲醇溶解 ， 转移至 １０ｍＬ 容量瓶 ， 用甲醇稀释 至刻度 。 ３ ． ６ ． ２ 　 样品溶液的制备 称取 ０．０１０ｇ 实验室样品 ， 精确至 ０．００００１ｇ ， 用甲醇溶解 ， 经 ０．４５ μ ｍ 滤膜过滤后置于 １０ｍＬ 容 量瓶 ， 用甲醇稀释至刻度 ， 作为样品溶液 。 ３ ． ７ 　 测定 按高效液相色谱操作规程开机预热 ， 调节温度及流量 ， 达到分析条件并基线平稳后 ， 用微量进样针 （ ＨＰＬＣ 专用 ） 取标准样品溶液 （ ３．６．１ ） １０ μ Ｌ ， 进样 （ 或自动进样 ）， 记录标准样品溶液乌索酸峰面积 犃 ２ ； 用微量进样针 （ ＨＰＬＣ 专用 ） 取样品溶液 （ ３．６．２ ） １０ μ Ｌ ， 进样 （ 或自动进样 ）， 记录样品溶液乌索酸峰面 积 犃 １ 。 ３ ． ８ 　 结果计算 乌索酸的质量分数 狑 ， 数值以 ％ 表示 ， 按式 （ １ ） 计算 ： 狑 ＝ 犃 １ 犿 ｓ 狑 ｓ 犃 ２ 犿 × １００ …………………………（ １ ） 　　 式中 ： 犃 １ ——— 样品溶液乌索酸峰面积 ； 犃 ２ ——— 标准样品溶液乌索酸峰面积 ； 犿 ｓ ——— 标准样品溶液中乌索酸标准样品的质量的数值 ， 单位为克 （ ｇ ）； 犿 ——— 试样的质量的数值 ， 单位为克 （ ｇ ）； 狑 ｓ ——— 乌索酸标准样品中乌索酸的质量分数 ， ％ 。 ４ 　 重复性 取两次平行测定结果的算术平均值作为测定结果 ， 两次平行测定结果的绝对差值或相对差值符合 产品标准的规定 。 ５ 　 试验报告 试验报告应包括下列内容 ： ａ ） 　 样品名称 、 批号 、 采样地点 、 采样日期及时间等 ； ｂ ） 　 本标准代号 ； ｃ ） 　 分析结果 ； ｄ ） 　 测定中观察到的任何异常现象和任何的细节及其说明 ； ｅ ） 　 分析人员姓名及分析日期 。 ２ 犌犅 ／ 犜 ２４７７３ — ２００９ 附 　 录 　 犃 （ 资料性附录 ） 乌索酸纯度的测定典型高效液相色谱图和保留时间 犃 ． １ 　 图 Ａ．１ 给出了乌索酸典型高效液相色谱图 。 　　 １ 、 ２ ——— 溶剂 ； ３ 、 ４ ——— 未知 ； ５ ——— 乌索酸 。 图 犃 ． １ 　 乌索酸纯度的测定典型高效液相色谱图 犃 ． ２ 　 表 Ａ．１ 给出了各组分的保留时间 。 表 犃 ． １ 　 各组分的保留时间 峰序 组分名称 保留时间 ／ ｍｉｎ ３ 未知 ７．８１７ ４ 未知 １０．８６０ ５ 乌索酸 １３．５７５ 犌犅 ／ 犜 ２４７７３ — ２００９