书 书 书犐犆犛 ７１ ． １００ ． ７０ 犢 ４２ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２４８００ ． ７ — ２００９ 化妆品中马钱子碱和士的宁的测定 高效液相色谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犫狉狌犮犻狀犲犪狀犱狊狋狉狔犮犺狀犻狀犲犻狀犮狅狊犿犲狋犻犮狊犫狔 犺犻犵犺狆犲狉犳狅狉犿犪狀犮犲犾犻狇狌犻犱犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔犿犲狋犺狅犱 ２００９  １１  ３０ 发布 ２０１０  ０５  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准的附录 Ａ 、 附录 Ｂ 为资料性附录 。 本标准由中国轻工业联合会提出 。 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ２５７ ） 归口 。 本标准负责起草单位 ： 中国检验检疫科学研究院 、 上海市日用化学工业研究所 、 上海香料研究所 。 本标准主要起草人 ： 马强 、 肖海清 、 王超 、 王星 、 范敏 、 朱丽 、 崔俭杰 、 李琼 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２４８００ ． ７ — ２００９ 引 　　 言 　　 本标准中的被测物质是我国 《 化妆品卫生规范 》 规定的禁用物质 ， 不得作为化妆品生产原料即组分 添加到化妆品中 。 如果技术上无法避免禁用物质作为杂质带入化妆品时 ， 则化妆品成品应符合 《 化妆品 卫生规范 》 对化妆品的一般要求 ， 即在正常及合理的可预见的使用条件下 ， 不得对人体健康产生危害 。 目前我国尚未规定这些物质的限量值 ， 本标准的制定 ， 仅对化妆品中测定这些物质提供检测方法 。 Ⅱ 犌犅 ／ 犜 ２４８００ ． ７ — ２００９ 化妆品中马钱子碱和士的宁的测定 高效液相色谱法 １ 　 范围 本标准规定了化妆品中马钱子碱和士的宁的高效液相色谱测定方法 。 本标准适用于化妆品中马钱子碱和士的宁的测定 。 本标准的检出限和定量限 ： 马钱子碱和士的宁的检出限为 ２．５ｍｇ ／ ｋｇ ， 定量限为 ８ｍｇ ／ ｋｇ 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款 。 凡是注日期的引用文件 ， 其随后所有 的修改单 （ 不包括勘误的内容 ） 或修订版均不适用于本标准 ， 然而 ， 鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本适用于本标准 。 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 （ ＧＢ ／ Ｔ６６８２ — ２００８ ， ＩＳＯ３６９６ ： １９８７ ， ＭＯＤ ） ３ 　 原理 试样经溶剂提取 ， 离心过滤后 ， 用高效液相色谱测定 ， 外标法定量 ， 液相色谱  质谱确认 。 ４ 　 试剂和材料 除非另有说明 ， 所用试剂均为分析纯 ， 水为 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 规定的一级水 。 ４ ． １ 　 甲醇 ： 色谱纯 。 ４ ． ２ 　 四氢呋喃 ： 色谱纯 。 ４ ． ３ 　 甲酸铵溶液 （ ０．０１ｍｏｌ ／ Ｌ ）： 准确称取 ０．６３０６ｇ 甲酸铵于 １Ｌ 容量瓶中 ， 加入约 ９８０ｍＬ 水溶解 ， 用甲酸调节 ｐＨ 至 ３．０ 后 ， 定容至 １Ｌ 备用 。 ４ ． ４ 　 甲醇水溶液 ： 准确量取 ６４ｍＬ 甲醇和 ３６ｍＬ 水 ， 混匀后备用 。 ４ ． ５ 　 马钱子碱和士的宁标准品 ： 纯度不小于 ９７％ 。 ４ ． ６ 　 马钱子碱和士的宁的标准储备液 ： 准确称取马钱子碱和士的宁标准物质各 １００ｍｇ ， 分别置于 １００ｍＬ 棕色容量瓶中 ， 用甲醇溶解并定容至刻度 ， 摇匀 ， 配制成浓度分别为 １０００ μ ｇ ／ ｍＬ 的标准储备 液 ， 于 ４℃ 避光保存 ， 可使用三个月 。 ４ ． ７ 　 马钱子碱和士的宁的混合标准储备液 ： 分别准确移取马钱子碱和士的宁的标准储备液各 ２５ｍＬ 于 ５０ｍＬ 棕色容量瓶中 ， 用甲醇定容至刻度 ， 该溶液中马钱子碱和士的宁的浓度均为 ５００ μ ｇ ／ ｍＬ 。 ５ 　 仪器和设备 ５ ． １ 　 高效液相色谱 （ ＨＰＬＣ ） 仪 ： 配有紫外检测器或二极管阵列检测器 。 ５ ． ２ 　 高效液相色谱  质谱联用 （ ＬＣＭＳ ／ ＭＳ ） 仪 ： 配有电喷雾离子源 （ ＥＳＩ ）。 ５ ． ３ 　 分析天平 ： 感量 ０．０００１ｇ 和 ０．００１ｇ 。 ５ ． ４ 　 离心机 ： 转速不低于 ５０００ｒ ／ ｍｉｎ 。 ５ ． ５ 　 超声波水浴 。 ５ ． ６ 　 具塞比色管 ： １０ｍＬ 。 ５ ． ７ 　 具塞塑料离心管 ： １０ｍＬ 。 １ 犌犅 ／ 犜 ２４８００ ． ７ — ２００９ ５ ． ８ 　 微孔滤膜 ： ０．４５ μ ｍ ， 有机相 。 ５ ． ９ 　 ｐＨ 计 。 ６ 　 分析步骤 ６ ． １ 　 样品处理 ６ ． １ ． １ 　 膏霜 、 水剂 、 香波类样品 称取 １ｇ （ 精确至 ０．００１ｇ ） 试样于 １０ｍＬ 具塞比色管中 ， 加甲醇水溶液 （ ４．４ ） 至刻度 ， 超声提取 ２０ｍｉｎ 。 取部分溶液转移至 １０ｍＬ 具塞塑料离心管中 ， 以不低于 ５０００ｒ ／ ｍｉｎ 离心 １５ｍｉｎ ， 上清液经 ０．４５ μ ｍ 微孔滤膜过滤 ， 滤液作为待测样液 。 注 ： 如离心难以获得上清液可加适量氯化钠破乳 。 ６ ． １ ． ２ 　 散粉类样品 称取 １ｇ （ 精确至 ０．００１ｇ ） 试样于 １０ｍＬ 具塞比色管中 ， 加入 ６ｍＬ 甲醇 ， 超声提取 ２０ｍｉｎ 。 取部分 溶液转移至 １０ｍＬ 具塞塑料离心管中 ， 以不低于 ５０００ｒ ／ ｍｉｎ 离心 １５ｍｉｎ ， 上清液经 ０．４５ μ ｍ 微孔滤膜 过滤 ， 取滤液 ０．６ｍＬ ， 加入 ０．４ｍＬ 水 ， 混合液经 ０．４５ μ ｍ 微孔滤膜过滤 ， 滤液作为待测样液 。 ６ ． １ ． ３ 　 唇膏类样品 称取 １．０ｇ （ 精确至 ０．００１ｇ ） 试样于 １０ｍＬ 具塞比色管中 ， 加入 ２ｍＬ 四氢呋喃和 １ｍＬ 甲醇 ， 超声 提取 １０ｍｉｎ ， 再加水至 １０ｍＬ ， 超声提取 １０ｍｉｎ 。 取部分溶液转移至 １０ｍＬ 具塞塑料离心管中 ， 以不低 于 ５０００ｒ ／ ｍｉｎ 离心 １５ｍｉｎ ， 上清液经 ０．４５ μ ｍ 微孔滤膜过滤 ， 滤液作为待测样液 。 ６ ． ２ 　 测定条件 高效液相色谱测定条件如下 ： ａ ） 　 色谱柱 ： ＫｒｏｍａｓｉｌＣ １８ ， ５ μ ｍ ， ２５０ｍｍ×４．６ｍｍ （ 内径 ）， 或相当者 。 ｂ ） 　 流动相 ： 甲酸铵溶液 （ ０．０１ｍｏｌ ／ Ｌ ）（ ４．３ ）  甲醇 （ ６４＋３６ ， ｖ ／ ｖ ）。 ｃ ） 　 流速 ： １．０ｍＬ ／ ｍｉｎ 。 ｄ ） 　 柱温 ： ２５℃ 。 ｅ ） 　 波长 ： ２６４ｎｍ 。 ｆ ） 　 进样量 ： ２０ μ Ｌ 。 ６ ． ３ 　 标准曲线的绘制 用甲醇将马钱子碱和士的宁的混和标准储备液逐级稀释得到的 ０．１ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ０．５ μ ｇ ／ ｍＬ 、 １ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ５ μ ｇ ／ ｍＬ 、 １０ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ２０ μ ｇ ／ ｍＬ 、 ５０ μ ｇ ／ ｍＬ 、 １００ μ ｇ ／ ｍＬ 的混合标准工作液 ， 按 ６．２ 的测定条 件浓度由低到高进样测定 ， 以峰面积  浓度作图 ， 得到标准曲线回归方程 。 马钱子碱和士的宁的标准品色谱图参见附录 Ａ 中的图 Ａ．１ 。 ６ ． ４ 　 测定 按 ６．２ 的测定条件对待测样液进行测定 ， 用外标法定量 。 待测样液中马钱子碱和士的宁的响应值 应在标准曲线的线性范围内 ， 超过线性范围则应稀释后再进样分析 。 必要时 ， 阳性样品需用液相色谱  质谱进行确认试验 （ 参见附录 Ｂ ）。 ６ ． ５ 　 空白试验 除不称取样品外 ， 均按上述测定条件和步骤进行 。 ７ 　 结果计算 结果按式 （ １ ） 计算 ， 计算结果保留两位小数 ：（ 计算结果应扣除空白值 ）。 犠 ＝ １０００ × 犮 × 犞 犿 × 犳 …………………………（ １ ） ２ 犌犅 ／ 犜 ２４８００ ． ７ — ２００９ 　　 式中 ： 犠 ——— 试样中马钱子碱和士的宁的含量 ， 单位为毫克每千克 （ ｍｇ ／ ｋｇ ）； 犮 ——— 从标准工作曲线上查出的样液中马钱子碱和士的宁的浓度 ， 单位为微克每毫升 （ μ ｇ ／ ｍＬ ）； 犞 ——— 样液最终定容体积 ， 单位为升 （ Ｌ ）； 犿 ——— 试样的质量 ， 单位为克 （ ｇ ）； 犳 ——— 稀释倍数 。 ８ 　 检出限和定量限 本标准的检出限和定量限 ： 马钱子碱和士的宁的检出限为 ２．５ｍｇ ／ ｋｇ ， 定量限为 ８ｍｇ ／ ｋｇ 。 ９ 　 回收率 在添加浓度 ２．５ｍｇ ／ ｋｇ ～ ２５０ｍｇ ／ ｋｇ 浓度范围内 ， 回收率在 ８５％ ～ １０５％ 之间 ， 相对标准偏差小 于 １０％ 。 １０ 　 允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的 １０％ 。 ３ 犌犅 ／ 犜 ２４８００ ． ７ — ２００９ 附 　 录 　 犃 （ 资料性附录 ） 标准品色谱图 　　 １ ——— 士的宁 ； ２ ——— 马钱子碱 。 图 犃 ． １ 　 士的宁和马钱子碱标准品色谱图 ４ 犌犅 ／ 犜 ２４８００ ． ７ — ２００９ 附 　 录 　 犅 （ 资料性附录 ） 确认试验 犅 ．