书 书 书犐犆犛 ６５ ． ０２０ 犅 １６ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ２４８２８ — ２００９ 穿刺根腐线虫检疫鉴定方法 犕犲狋犺狅犱狊犳狅狉狇狌犪狉犪狀狋犻狀犲犪狀犱犻犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀狅犳 犘狉犪狋狔犾犲狀犮犺狌狊狆犲狀犲狋狉犪狀狊 ２００９  １２  １５ 发布 ２０１０  ０６  ０１ 实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 发布书 书 书前 　　 言 　　 本标准的附录 Ａ 、 附录 Ｂ 均为规范性附录 。 本标准由全国植物检疫标准化技术委员会提出并归口 。 本标准起草单位 ： 中华人民共和国上海出入境检验检疫局 、 中国检验检疫科学院 。 本标准主要起草人 ： 戚龙君 、 葛建军 、 宋绍 、 孙红 、 郑建中 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ２４８２８ — ２００９ 穿刺根腐线虫检疫鉴定方法 １ 　 范围 本标准规定了对穿刺根腐线虫检疫和鉴定方法 。 本标准适用于花卉 、 观赏植物 、 蔬菜 、 烟草 、 果树 、 豆科 、 禾本科等多种植物根部和土壤及栽培介质中 的穿刺根腐线虫 。 ２ 　 鉴定依据 穿刺根腐线虫英文名 ： ＲｏｏｔＬｅｓｉｏｎＮｅｍａｔｏｄｅ 学名 ： 犘狉犪狋狔犾犲狀犮犺狌狊狆犲狀犲狋狉犪狀狊 （ Ｃｏｂｂ ， １９１７ ） Ｆｉｌｉｐｊｅｖ＆ＳｃｈｕｕｒｍａｎｓＳｔｅｋｈｏｖｅｎ ， １９４１ 异名 ： 犜狔犾犲狀犮犺狌狊狆犲狀犲狋狉犪狀狊 Ｃｏｂｂ ， １９１７ 犃狀犵狌犻犾犾狌犾犻狀犪 （ 犘狉犪狋狔犾犲狀犮犺狌狊 ） 狆犲狀犲狋狉犪狀狊 （ Ｃｏｂｂ ） Ｇｏｏｄｅｙ ， １９３２ 犜狔犾犲狀犮犺狌狊犵狌犾狅狊狌狊 Ｋüｈｎ ， １８９０ 犘狉犪狋狔犾犲狀犮犺狌狊犵狌犾狅狊狌狊 （ Ｋüｈｎ ） Ｆｉｌｉｐｊｅｖ＆ＳｃｈｕｕｒｍａｎｓＳｔｅｋｈｏｖｅｎ ， １９４１ 分类地位 ： 线虫门 （ Ｎｅｍａｔａ ）、 侧尾腺纲 （ Ｓｅｃｅｒｎｅｎｔｅａ ）、 垫刃目 （ Ｔｙｌｅｎｃｈｉｄａ ）、 根腐线虫科 （ Ｐｒａｔｙ ｌｅｎｃｈｉｄａｅ ）、 根腐线虫属 （ 犘狉犪狋狔犾犲狀犮犺狌狊 ） 穿刺根腐线虫是一种根部迁移性内寄生线虫 ， 被侵染的植株呈现如下特征 ： ａ ） 　 地上部分表现为生长不良 ， 发生矮化 、 褪绿 ， 过早凋萎甚至死亡 ， 产量减少 ； ｂ ） 　 地下部分引起根部变褐色 、 坏死 ， 根茎和块茎往往也会遭受侵害 ； ｃ ） 　 幼虫和成虫都可以侵入寄主根部组织 ， 在病痕区和健康组织的交界处可见各个发育阶段的 线虫 。 该线虫危害 ３５０ 多种植物 ， 主要分布在温带地区 。 它的形态学特征是该检疫鉴定方法的依据 。 ３ 　 仪器 、 用具 ３ ． １ 　 生物显微镜 （ ４０× 以上 ）。 ３ ． ２ 　 生物体视显微镜 （ １０× 以上 ， 具透射光源 ）。 ３ ． ３ 　 电热恒温箱 。 ３ ． ４ 　 载玻片和凹玻片 。 ３ ． ５ 　 盖玻片 。 ３ ． ６ 　 分样筛 （ １００ 目 、 ５００ 目 ）。 ３ ． ７ 　 烧杯 （ ５００ｍＬ 、 １０００ｍＬ ）。 ３ ． ８ 　 漏斗 。 ３ ． ９ 　 漏斗架 。 ３ ． １０ 　 乳胶管或硅胶管 。 ３ ． １１ 　 止水夹 。 ３ ． １２ 　 小镊子 。 ３ ． １３ 　 剪刀 。 ３ ． １４ 　 挑针 。 ３ ． １５ 　 浅盘 。 ３ ． １６ 　 线虫滤纸或卫生纸 。 １ 犌犅 ／ 犜 ２４８２８ — ２００９ ３ ． １７ 　 酒精灯 。 ３ ． １８ 　 钟面皿或培养皿 。 ３ ． １９ 　 加热板 。 ３ ． ２０ 　 干燥器 。 ３ ． ２１ 　 试管 。 ４ 　 药品 ４ ． １ 　 中性树胶 。 ４ ． ２ 　 ４％ 甲醛 。 ４ ． ３ 　 指甲油 。 ４ ． ４ 　 乳酚油 （ 苯酚 ２０ｍＬ 、 乳酸 ２０ｍＬ 、 甘油 ４０ｍＬ 和蒸馏水 ２０ｍＬ 混合而成 ）。 ４ ． ５ 　 石蜡 。 ５ 　 现场检疫 ５ ． １ 　 抽样 ５ ． １ ． １ 　 抽样方法 棋盘式 、 五点式或随机抽样 。 ５ ． １ ． ２ 　 抽样数量 按总件数的 ５％ ～ ２０％ 抽样 ， 最低抽检 １０ 件且不少于 ５００ 株 （ 个 ）。 采集样品数量见表 １ 。 表 １ 　 采集样品数量表 总株 （ 个 ） 数 ， 犖 采集样品株 （ 个 ） 数 犖 ≤ ５０ ５ ５１ ≤ 犖 ≤ ２００ １０ ２０１ ≤ 犖 ≤ １０００ １５ １００１ ≤ 犖 ≤ ５０００ ２０ ５００１ ≤ 犖 ≤ １００００ ２５ 犖 ＞ １００００ 在 ３０ 的基础上 ， 每增加 ５０００ 株 （ 个 ） 增取 ５ 株 （ 个 ） ５ ． ２ 　 外观症状的检查 ５ ． ２ ． １ 　 对花卉 、 观赏植物 、 烟草 、 果树 、 蔬菜 、 豆科 、 禾本科等根茎部分进行检查 ， 注意检查有否变褐和坏 死等症状 。 ５ ． ２ ． ２ 　 收集上述可疑根部材料及所夹带的土壤或包装介质材料等和采集的样品一并送实验室进行穿 刺根腐线虫的检验 。 ６ 　 实验室检验 ６ ． １ 　 样品分离 对于抽取的样品 ， 仔细检查根部 ， 尽量选取有变褐和坏死等症状的根及根围介质作为分离样品 。 ６ ． ２ 　 线虫分离 用浅盘分离法或漏斗法分离线虫 ， 详见附录 Ａ 。 ６ ． ３ 　 体视显微镜检查 分离获得的水样在生物体视显微镜下检查 。 ６ ． ４ 　 显微镜检查 挑取线虫若干条制成临时玻片在生物显微镜下镜检 ， 观察线虫的形态结构 。 ２ 犌犅 ／ 犜 ２４８２８ — ２００９ ７ 　 形态鉴定特征 ７ ． １ 　 根腐线虫属形态鉴定特征 ７ ． １ ． １ 　 雌雄虫共同特征 ａ ） 　 雌雄同型 ， 蠕虫状 ； 体环明显 ， 虫体粗短 （ 体长 ３００ μ ｍ ～ ９００ μ ｍ ）； ｂ ） 　 头部低平 （ 高度通常小于头基环直径的二分之一 ）， 有 ２ 个 ～ ４ 个唇环 ， 头部连续到略缢缩 ， 头 架骨化显著 ； ｃ ） 　 口针粗短 ， 长 １１ μ ｍ ～ ２２ μ ｍ ， 基部球发达 ； ｄ ） 　 背食道腺开口位于口针基部球后约 ２ μ ｍ ～ ４ μ ｍ 。 食道腺叶短 ， 从腹面和侧面覆盖肠前端 ； ｅ ） 　 侧区有 ４ 条 ～ ８ 条侧线 ， 通常有 ４ 条 。 ７ ． １ ． ２ 　 雌虫 单生殖腺 、 前伸 ， 后阴子宫囊通常短于 ２ 个阴门处体宽 。 尾长是肛门处体宽的 ２ 倍 ～ ３ 倍 ， 尾圆锥 形 ， 末端钝圆 （ 很少尖 ）。 ７ ． １ ． ３ 　 雄虫 交合刺骨化 、 稍弯 ， 引带不伸出泄殖腔 ， 交合伞延伸到尾端 。 ７ ． ２ 　 根腐线虫形态鉴定特征 ７ ． ２ ． １ 　 测计值 穿刺根腐线虫的测量数据见表 ２ 。 表 ２ 　 穿刺根腐线虫测计值 项目 Ｌ ／ μ ｍ ａ ｂ ｃ Ｖ ／ ％ Ｔ ／ ％ Ｓ ／ μ ｍ 雌虫 ３４３ ～ ８１１１９ ～ ３２５．３ ～ ７．９１５ ～ ２４ ７５ ～ ８４ — １５ ～ １７ 雄虫 ３０５ ～ ５７４２３ ～ ３４５．４ ～ ７．３１６ ～ ２２ — ３６ ～ ５８ １３ ～ １６ 　　 注 ： Ｌ＝ 体长 ； ａ＝ 体长 ／ 最大体宽 ； ｂ＝ 体长 ／ 自头顶至食道与肠连接处的长度 ； Ｓ＝ 口针长 ； ｃ＝ 体长 ／ 尾长 ； Ｖ＝ 头顶至阴门处长度 ／ 体长 ×１００ ； Ｔ＝ 精巢长度 ／ 体长 ×１００ 。 ７ ． ２ ． ２ 　 形态描述 ７ ． ２ ． ２ ． １ 　 雌虫 ａ ） 　 热杀死时虫体近直线形 ， 虫体中等大小 ， 体表环纹较细 ， 侧线四条 ， 中食道球近圆形 ， 宽度为该 处体宽的一半 。 食道腺从腹面覆盖肠的前端 ， 覆盖长度为 ３０ μ ｍ ～ ４０ μ ｍ 。 排泄孔约在食道  肠交界的相对位置上 ， 离虫体前端 ７４ μ ｍ ～ １０１ μ ｍ 处 ， 见图 １ 中的 Ｉ ； ｂ ） 　 头架发达 ， 唇区稍高 ， 稍缢缩 ， 唇环三个 ， 口针基部球宽圆形 ， 背食道腺开口在口针基部球 ２．５ μ ｍ ， 见图 １ 中的 Ｂ ； ｃ ） 　 受精囊近圆形 ， 内充满精子 ， 宽为该处体宽的三分之二 。 阴道直且短 ， 长约为阴门处体宽的四 分之一 。 后阴子宫囊短 ， 长约为阴门处体宽的 １ 倍 ～ １．５ 倍 。 肛门与阴门的距离约为尾长的 ２．５ 倍 ， 见图 １ 中的 Ｃ ； ｄ ） 　 尾近圆筒形 ， 末端光滑 （ 偶尔有一个至两个线纹 ）， 尾腹面有 １５ 条 ～ ２７ 条体环 ， 见图 １ 中的 Ｄ 、 Ｅ 。 ７ ． ２ ． ２ ． ２ 　 雄虫 ａ ） 　 与雌虫体形相似 ， 普遍发生 ， 见图 １ 中的 Ａ 、 Ｈ ； ｂ ） 　 侧线四条 ， 排泄孔约在离虫体前端 ６６ μ ｍ ～ ７９ μ ｍ 处 ， 见图 １ 中的 Ｈ ； ｃ ） 　 交合刺骨化略成弓形 ， 长为 １４ μ ｍ ～ １７ μ ｍ ； 引带长为 ３．９ μ ｍ ～ ４．２ μ ｍ ； 交合伞包到尾端 ， 见 图 １ 中的 Ｆ 、 Ｇ 。 ３ 犌犅 ／ 犜 ２４８２８ — ２００９ 　　 Ａ ——— 雌虫头部 ； Ｂ ——— 雄虫头部 ； Ｃ ——— 雌虫阴门区和尾 ； Ｄ ， Ｅ ——— 雌虫尾端 ； Ｆ ——— 雄虫尾部腹面 ； Ｇ ——— 雄虫尾部侧面 ； Ｈ ——— 雄虫整体 ； Ｉ ——— 雌虫整体 。 图 １