ICS67.200.20 B33 中华人民共和国国家标准 GB/T24903—2010 粮 油检验 花生中白藜芦醇的测定 高效液相色谱法 Inspectionofgrainandoils—Determinationofresveratrolinpeanutby highperformanceliquidchromatography 2010-06-30发布 2011-01-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准的附录A为资料性附录。 本标准由国家粮食局提出。 本标准由全国粮油标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:南京财经大学、江南大学。 本标准主要起草人:汪海峰、袁建、杨晓蓉、张连富。 ⅠGB/T24903—2010 粮油检验 花生中白藜芦醇的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了高效液相色谱法测定花生中白藜芦醇含量的原理、试剂和材料、仪器和设备、操作步 骤及结果计算。 本标准适用于花生果、花生仁中白藜芦醇含量的测定。 样品中白藜芦醇的检出限为0.1mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 试样中的白藜芦醇用乙醇-水溶液提取,提取液离心后,取上清液,用配有紫外检测器的高效液相色 谱仪进行测定,以外标法定量。 4 试剂和材料 除另有规定外,所用试剂均为分析纯,实验用水应符合GB/T6682中二级要求。 4.1 无水乙醇。 4.2 甲醇:色谱纯。 4.3 乙腈:色谱纯。 4.4 冰醋酸。 4.5 85%乙醇溶液:取850mL乙醇(4.1),加150mL水,混匀。 4.6 液相流动相:乙腈+水+冰醋酸=25+75+0.09。取250mL乙腈(4.3),加入750mL水和 0.9mL冰醋酸(4.4)混匀,通过0.2μm的滤膜(5.6)并脱气。 4.7 白藜芦醇标准品:纯度≥99%。 4.8 白藜芦醇标准储备溶液:准确称取12.5mg(精确至0.0001g)白藜芦醇标准品(4.7),用甲醇 (4.2)溶解并定容至250mL,得到50mg/L白藜芦醇标准储备液,避光保存于4℃冰箱备用。 4.9 白藜芦醇标准工作溶液:准确移取1mL、2mL、4mL、6mL、8mL、10mL白藜芦醇标准储备液 (4.8),用甲醇(4.2)稀释并定容至50mL,得到一系列的标准工作溶液(质量浓度分别为1mg/L、 2mg/L、4mg/L、6mg/L、8mg/L、10mg/L)。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪:带紫外检测器。 5.2 粉碎机:高速万能粉碎机,转速24000r/min,或相当的设备。 5.3 台式离心机:不低于5000r/min,或相当的设备。 1GB/T24903—2010 5.4 微量进样器:10μL。 5.5 天平:感量0.01g、0.0001g。 5.6 滤膜:孔径0.2μm,直径25mm的聚砜膜或相当者。 6 操作步骤 6.1 试样制备 花生果样品剥壳,花生仁样品直接取样。 分取花生仁样品约100g,用粉碎机(5.2)粉碎2min~3min。 6.2 提取 称取粉碎试样约5g(精确至0.01g)于250mL具塞三角瓶中,加入60mL85%乙醇溶液(4.5),置 于80℃水浴中提取45min,不时振摇,冷却后用滤纸过滤,以少量85%乙醇溶液(4.5)洗涤残渣,过滤, 合并滤液,定容至100mL。移取1mL~2mL滤液,离心5min,离心速度不低于5000r/min,离心后 的上清液供进样测定。 6.3 测定 6.3.1 高效液相色谱参考条件 色谱柱:C18柱,150mm×3.9mm(内径),4μm,或相当者。 流动相:乙腈+水+冰醋酸(4.6)。 流速:0.7mL/min。 紫外检测器:波长306nm。 柱温:室温。 进样量:10μL。 白藜芦醇标准品及样品测定的色谱图参见附录A。 6.3.2 定量 用微量进样器(5.4)分别吸取等体积的白藜芦醇标准工作溶液和样品离心后的上清液进样分析,测 定响应值(峰高或峰面积),以标准工作液的浓度与相应的峰面积绘制标准曲线,以样液白藜芦醇的峰面 积查标准曲线,求得相应的白藜芦醇的浓度(cs)。 7 结果计算 花生仁样品中白藜芦醇的含量按式(1)计算: X1=cs×A×V As×m…………………………(1) 式中: X1———样品中白藜芦醇的质量分数,单位为毫克每千克(mg/kg); V———试样最终定容体积,单位为毫升(mL); A———样液中白藜芦醇的峰面积数值; cs———标准溶液中白藜芦醇的浓度,单位为毫克每升(mg/L); As———标准溶液中白藜芦醇的峰面积数值; m———称取试样的质量,单位为克(g)。 测定结果以花生仁中白藜芦醇含量计,保留至小数点后1位数字。 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。 2GB/T24903—2010 附 录 A (资料性附录) 白藜芦醇色谱图 白藜芦醇的色谱图见图A.1和图A.2。 图A.1 白藜芦醇标准品的色谱图 图A.2 样品溶液中白藜芦醇的色谱图GB/T24903—2010