ICS65.120 B46 中华人民共和国国家标准 GB/T25247—2010 饲 料添加剂 糖萜素 Feedadditive—Saccharicterpenin 2010-09-26发布 2011-03-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出并归口。 本标准起草单位:杭州唐天科技有限公司、浙江大学。 本标准主要起草人:詹勇、李丽丽、张璐、金海丽、沈水昌。 ⅠGB/T25247—2010 饲料添加剂 糖萜素 1 范围 本标准规定了饲料添加剂糖萜素的要求、试验方法、检验规则、标签、包装、运输和贮存。 本标准适用于以油茶籽粕为原料,经乙醇提取,配以饲料级沸石粉吸附制得的糖萜素。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T602 化学试剂 杂质测定用标准溶液的制备 GB/T603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T5917.1 饲料粉碎粒度测定 两层筛筛分法 GB/T6432 饲料中粗蛋白测定方法 GB/T6435 饲料中水分和其他挥发性物质含量的测定 GB/T6438 饲料中粗灰分的测定 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB10648 饲料标签 GB/T13079 饲料中总砷的测定 GB/T13080 饲料中铅的测定 原子吸收光谱法 GB/T13081 饲料中汞的测定 GB/T13082 饲料中镉的测定方法 GB/T13091 饲料中沙门氏菌的检测方法 GB/T13092 饲料中霉菌总数的测定 GB/T14699.1 饲料 采样 GB/T17480 饲料中黄曲霉毒素B1的测定 酶联免疫吸附法 3 要求 3.1 性状 本品为浅棕黄色粉末,味微苦而辣,有刺激气味,易吸潮。 3.2 鉴别 鉴别应符合表1规定。 表1 鉴别 项 目 指 标 Liebermann-Burchard反应 显红色 泡沫试验 产生大量泡沫,10min内泡沫不消失 Molish反应 界面出现紫红色环 1GB/T25247—2010 3.3 技术指标 技术指标应符合表2规定。 表2 技术指标 项 目 指 标 油茶总皂苷含量/% ≥ 30.0 总糖含量/% ≥ 30.0 粗灰分/% ≤ 26.0 粗蛋白/% ≥ 7.0 干燥失重/% ≤ 7.0 砷(以总砷计)/(mg/kg) ≤ 3.0 铅(以Pb计)/(mg/kg) ≤ 5 汞(以Hg计)/(mg/kg) ≤ 0.1 镉(以Cd计)/(mg/kg) ≤ 1.0 黄曲霉毒素B1/(μg/kg) ≤ 50 霉菌总数/(CFU/g) ≤ 1×104 沙门氏菌 不得检出 粒度,0.25mm孔径分析筛上物/% ≤ 5.0 4 试验方法 警告———硫酸和高氯酸有强腐蚀性、在操作过程中应注意避免与皮肤接触,如不慎接触到皮肤,应 立即用干布或纸巾擦拭干净、再用清水冲洗。 本标准所用试剂和水,除非另有说明,均指分析纯试剂和符合GB/T6682中规定的三级水。试验 中所用试剂和溶液,按GB/T602和GB/T603之规定制备。 4.1 试剂和溶液 4.1.1 乙酸酐。 4.1.2 硫酸。 4.1.3 无水乙醇。 4.1.4 乙醇(体积分数为95%)。 4.1.5 正丁醇。 4.1.6 无水乙醚。 4.1.7 甲醇。 4.1.8 高氯酸。 4.1.9 乙酸乙酯。 4.1.10 甲萘酚。 4.1.11 香草醛。 4.1.12 3,5-二硝基水杨酸。 2GB/T25247—2010 4.1.13 酒石酸钾钠。 4.1.14 苯酚(临使用时常压蒸馏,收集182℃馏分使用)。 4.1.15 亚硫酸钠。 4.1.16 乙醇溶液:无水乙醇+水=8+2(体积比)。 4.1.17 盐酸溶液:c(HCl)=6mol/L。 4.1.18 氢氧化钠溶液:240g/L。 4.1.19 氢氧化钠溶液:80g/L。 4.1.20 甲萘酚乙醇溶液:称取10g甲萘酚(4.1.10),加100mL乙醇(4.1.4)溶解。 4.1.21 香草醛乙醇溶液:称取5.0g香草醛(4.1.11),溶于无水乙醇(4.1.3),移入100mL容量瓶中, 用无水乙醇(4.1.3)稀释至刻度。临用前制备。 4.1.22 3,5-二硝基水杨酸溶液:称取6.3g3,5-二硝基水杨酸(4.1.12)和量取262mL氢氧化钠 (4.1.19),溶于500mL含有182g酒石酸钾钠(4.1.13)的热水溶液,加5g苯酚(4.1.14)和5g亚硫酸 钠(4.1.15),溶解,冷却,用水稀释至1000mL。贮存于棕色瓶中。 4.1.23 正丁醇饱和的水:量取500mL正丁醇(4.1.5)和500mL水,置分液漏斗中,振摇,静置分层, 取水相。 4.1.24 水饱和的正丁醇:量取500mL正丁醇(4.1.5)和500mL水,置分液漏斗中,振摇,静置分层, 取醇相。 4.1.25 油茶总皂苷标准品:含量≥99.0%。 4.1.26 葡萄糖标准品:含量≥99.0%。 4.2 仪器与设备 4.2.1 恒温水浴锅(精确至1℃)。 4.2.2 分析天平(精确至0.0001g)。 4.2.3 紫外可见分光光度计。 4.2.4 旋转蒸发仪。 4.2.5 电热鼓风干燥箱(温度可控制在103℃±2℃)。 4.3 性状 将试样放置在白瓷盘内,在非直射日光、光线充足、无异味和异臭的环境中,通过眼观、口尝、鼻嗅和 触摸的方法。 4.4 鉴别 4.4.1 Liebermann-Burchard反应:称取约0.01g试样,置于白瓷蒸发皿中,加0.5mL乙酸酐 (4.1.1),用玻璃棒研磨使其溶解,沿皿壁加1滴~2滴硫酸(4.1.2),即显红色。 4.4.2 泡沫试验:称取约0.01g试样,溶于5mL水,移入10mL具塞试管中,强力振摇1min,产生大 量泡沫,10min内泡沫不消失。 4.4.3 Molish反应:称取约0.01g试样,溶于2mL乙醇溶液(4.1.16),移入10mL具塞试管中,加 1滴~2滴甲萘酚乙醇溶液(4.1.20),摇匀,沿管壁加0.5mL硫酸(4.1.2),界面出现紫红色环。 4.5 油茶总皂苷含量测定 4.5.1 萃取重量法(仲裁法) 4.5.1.1 原理 利用油茶总皂苷化合物在水、醚和醇中溶解度不同的性质,可以用萃取重量法测定。水溶解样品后 3GB/T25247—2010 用乙醚脱脂。用水饱和的正丁醇多次萃取出脱脂后样品中的油茶总皂苷,醇洗纯化后蒸除溶剂。称量 残渣重量测定样品中的油茶总皂苷含量。 4.5.1.2 测定方法 称取0.2g(精确至0.0001g)试样,加40mL水溶解,过滤,用适量水洗涤残渣,滤液移入分液漏斗 中。加40mL无水乙醚(4.1.6)萃取脱脂(注意轻轻振摇,勿使乳化),弃去醚层,水层置通风橱内在沸 水浴上挥尽乙醚。水层加水饱和的正丁醇(4.1.24)分别为40mL、40mL、40mL、30mL和30mL萃 取共5次,合并5次的正丁醇萃取液。正丁醇萃取液加40mL正丁醇饱和的水(4.1.23)洗涤,此水层 再加40mL水饱和的正丁醇(4.1.24)洗涤,合并正丁醇萃取液。在旋转蒸发仪(4.2.4)上回收正丁醇 萃取液溶剂,残渣用乙醇溶液(4.1.16)溶解,过滤,用适量乙醇溶液(4.1.16)洗涤滤纸,滤液收集于已恒 重的烧杯中。烧杯置沸水浴中挥尽溶剂,取出后置103℃±2℃电热鼓风干燥箱(4.2.5)中干燥至恒 重,称重(精确至0.0001g)。 4.5.1.3 计算和结果的表示 试样中油茶总皂苷含量w1,以质量分数(%)表示,按式(1)计算: w1=m1-m2 m×100 ……………………………(1) 式中: m1———干燥至恒重后残渣加烧杯的质量,单位为克(g); m2———烧杯的质量,单位为克(g); m———试样的质量,单位为克(g)。 计算结果表示至小数点后一位。 4.5.1.4 允许差 取平行测定结果的算术平均值为测定结果,两次平行测定结果相对偏差应不大于5%。 4.5.2 比色法 4.5.2.1 原理 油茶总皂苷被强氧化性酸氧化后与香草醛加成,生成紫红色的物质。在一定浓度范围内,油茶总皂 苷的浓度与紫红色物质颜色的深浅程度成正比,用分光光度计比色法测定。 4.5.2.2 油茶总皂苷标准溶液的制备 称取0.03g(精确至0.0001g)油茶总皂苷标准品(4.1.25),溶于甲醇(4.1.7),移入100mL容量 瓶中,用甲醇(4.1.7)稀释至刻度。 4.5.2.3 试样溶液的制备 称取0.2g(精确到0.0001g)试样,溶于甲醇(4.1.7),移入100mL容量瓶中,用甲醇(4.1.7)稀释 至刻度,过滤,取滤液使用。 4.5.2.4 标准曲线的制备 分别移取0.4mL、0.8mL、1.2mL、1.6mL、2.0mL和2.4mL油茶总皂苷标准溶液(4.5.2.2)置 10mL容量瓶中。各容量瓶置沸水浴中挥尽溶剂后流水冷却至室温,加0.4mL香草醛乙醇溶液 (4.1.21)和2.4mL高氯酸(4.1.8),立即摇匀。各容量瓶同时置70℃恒温水浴锅(4.2.1)中加热 4GB/T25247—2010 15min,取出后用流水冷却,加乙酸乙酯(4.1.9)定容。立即混匀,放置至室温。用1cm比色杯,在紫外 可见分光光度计(4.2.3)上,以试剂空白作对照,于波长550nm处测吸光度。以吸光度为纵坐标,各测 试