书 书 书犐犆犛 ６５ ． ０２０ ． ３０ 犅 ４１ /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G27 /G28 /G29 /G2A 犌犅 ／ 犜 ３４７３３ — ２０１７ /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G28 /G29 /G2A /G2B /G2C /G2D /G2E 犇犻犪犵狀狅狊狋犻犮狆狉狅狋狅犮狅犾狊犳狅狉犮狉狔狆狋狅犮犪狉狔狅狀狅狊犻狊狅犳犿犪狉犻狀犲犳犻狊犺 ２０１７  １１  ０１ /G2F /G30 ２０１８  ０５  ０１ /G31 /G32 /G21 /G22 /G23 /G24 /G25 /G26 /G27 /G27 /G28 /G2B /G2C /G2D /G2E /G2F /G30 /G2F /G31 /G32 /G33 /G21 /G27 /G27 /G28 /G29 /G2A /G34 /G35 /G36 /G37 /G38 /G39 /G2F /G30书 书 书前 　　 言 　　 本标准按照 ＧＢ ／ Ｔ１．１ — ２００９ 给出的规则起草 。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。 本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 。 本标准由中华人民共和国农业部提出 。 本标准由全国水产标准化技术委员会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ１５６ ） 归口 。 本标准起草单位 ： 福建省淡水水产研究所 、 福建省水生动物疫病预防控制中心 。 本标准主要起草人 ： 樊海平 、 曾占壮 、 卓玉琛 、 林煜 、 吴斌 、 马平 、 钟全福 、 翁祖桐 。 Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ３４７３３ — ２０１７ 海水鱼类刺激隐核虫病诊断规程 １ 　 范围 本标准给出了海水鱼类刺激隐核虫病的流行情况与主要症状 ， 规定了海水鱼类刺激隐核虫病诊断的样品采集与处理 、 诊断 、 病原体确认和结果判定的方法和要求 。 本标准适用于海水鱼类刺激隐核虫病的诊断 、 流行病学调查 、 检疫与监测 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。 凡是注日期的引用文件 ， 仅注日期的版本适用于本文件 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本 （ 包括所有的修改单 ） 适用于本文件 。 ＳＣ ／ Ｔ７０１４ — ２００６ 　 水生动物检疫实验技术规范 ＳＣ ／ Ｔ７１０３ — ２００８ 　 水生动物产地检疫采样技术规范 ３ 　 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 。 ３ ． １ 　 刺激隐核虫病 　 犮狉狔狆狋狅犮犪狉狔狅狀狅狊犻狊 海水养殖鱼类受刺激隐核虫感染 ， 发生病理变化并出现行为异常或死亡的一种疾病 。 ４ 　 试剂与器材 ４ ． １ 　 海水 ： １．０５ｋｇ ／ ｃｍ ２ ， １２１．３℃ 高压蒸汽灭菌 １５ｍｉｎ 。 ４ ． ２ 　 ０．８５％ 的生理盐水 。 ４ ． ３ 　 蒸馏水 。 ４ ． ４ 　 固定液 ： ４％ 甲醛或 ７０％ 乙醇 。 ４ ． ５ 　 Ｇｉｅｍｓａ 染色液 。 ４ ． ６ 　 光学显微镜 、 解剖镜和放大镜 （ ３０× ）。 ４ ． ７ 　 解剖盘 、 手术剪 、 眼科镊 、 解剖刀 、 解剖针 、 吸管 。 ４ ． ８ 　 载玻片 、 盖玻片 、 培养皿 。 ４ ． ９ 　 标签纸 、 记号笔 。 ５ 　 流行情况与主要症状 ５ ． １ 　 流行情况 几乎在所有海水养殖鱼类中都可发生 ， 主要危害大黄鱼 、 卵形鲳 /G21 、 石斑鱼 、 真鲷 、 斜带髭鲷和 ? 鱼等 ， 对苗种造成的危害大于成鱼 。 水温 １０℃ ～ ３０℃ 均可发生 ， 发病时间主要为 ５ 月下旬 ～ ７ 月中旬 （ 水温约为 ２２℃ ～ ２８℃ ） 和 ９ 月中旬 ～ １１ 月下旬 （ 水温约为 ２５℃ ～ １９℃ ）。 １ 犌犅 ／ 犜 ３４７３３ — ２０１７ ５ ． ２ 　 主要症状 病鱼游动迟缓 ， 对外界刺激反应迟钝 ， 呼吸困难 ， 摄食量减少 ； 病情严重时 ， 病鱼离群于水面缓慢游动 ， 不摄食 。 体表 、 眼角膜 、 口腔周围和鳃可观察到白点 ， 体表 、 鳍 、 鳃黏液增生形成白色混浊状薄膜 ， 病情严重时体表出现点状出血 。 ６ 　 样品采集与处理 ６ ． １ 　 采样 从养殖网箱或池塘中采集具有临床症状的鱼体 １０ 尾以上 ， 其余按 ＳＣ ／ Ｔ７０１４ — ２００６ 第 ６ 章的规定执行 。 ６ ． ２ 　 样品封存 、 运输 、 登记与保存 按 ＳＣ ／ Ｔ７１０３ — ２００８ 第 ９ 章 、 第 １０ 章 、 第 １１ 章和第 １２ 章的规定执行 。 ７ 　 临床诊断 ７ ． １ 　 制样 解剖镜或放大镜观察鱼体体表及鳍条 ， 刮取病鱼体表部分黏液 ， 剪取部分鳍和左右鳃的鳃丝 ， 置于清洁载玻片上 ， 加适量生理盐水或蒸馏水 ， 制作水封片 ， 各组织制作两个以上样片 。 ７ ． ２ 　 显微检查 在 １０×１０ 的低倍镜下参照附录 Ａ 检查水封片上的虫体形态与数量 。 ８ 　 病原体确认 刮取体表黏液或取鳍条及鳃 ， 或将虫黏液涂片体用 ４％ 甲醛或 ７０％ 乙醇固定过夜 ， 常温干燥后 ， Ｇｉｅｍｓａ 染液染色 ３０ｓ ， 蒸馏水冲洗 ， 常温干燥 ， 显微镜观察虫体形态 ， 对照附录 Ａ 确认 。 ９ 　 结果判定 检测样品流行情况和主要症状与第 ５ 章描述相符 ， 显微检查观察到虫体 ， 虫体确认为刺激隐核虫 ， 即可诊断患刺激隐核虫病 。 ２ 犌犅 ／ 犜 ３４７３３ — ２０１７ 附 　 录 　 犃 （ 资料性附录 ） 刺激隐核虫的形态与生活史 犃 ． １ 　 形态 刺激隐核虫的滋养体呈球形或卵形 ， 个体大小为 （ ０．０６６ｍｍ ～ ０．４５ｍｍ ） × （ ０．０３４ｍｍ ～ ０．３６ｍｍ ）。 全身被有纤毛 ， 前端有一胞口 。 有 ４ 个 ～ ８ 个 （ 一般 ４ 个 ） 卵圆形的核质 ， 相连呈念珠状 ， 作 “ Ｕ ” 形排列成 大核 。 显微镜下虫体的表膜较厚 ， 虫体细胞质较浓密 ， 内有许多颗粒 ， 透明度低 ， 大核一般不易看清 。 犃 ． ２ 　 生活史 刺激隐核虫发育为 ４ 个阶段 ： 营养期 （ ｆｅｅｄｉｎｇｓｔａｇｅ ）、 休眠期 （ ｒｅｓｔｉｎｇｓｔａｇｅ ）、 分裂期 （ ｄｉｖｉｄｉｎｇ ｓｔａｇｅ ） 和感染期 （ ｉｎｆｅｃｔｉｎｇｓｔａｇｅ ）。 鱼体皮肤和鳃皮层中生长发育的是滋养体 （ ｔｒｏｐｈｏｎｔ ）， 滋养体成熟 后从鱼体脱落到水中自由游动一短暂时期 ， 后附着在固着物上 ， 形成包囊 （ ｔｏｍｏｎｔ ）， 即进入休眠期 。 水 温等环境适合时 ， 包囊内的原生质细胞经历一系列分裂 （ 分裂期 ）， 形成幼体 （ ｔｏｍｉｔｅ ）。 幼体成熟后逸出 包囊进入水中 ， 即为具有感染能力的幼虫 （ ｔｈｅｒｏｎｔ ）， 幼虫一旦遇到宿主 ， 即侵入皮肤和鳃 ， 发育成滋养 体 。 刺激隐核虫发育各阶段形态与患刺激隐核虫病的大黄鱼如图 Ａ．１ 所示 ； 刺激隐核虫生活史如图 Ａ．２ 所示 。 　　　　　　　　　 犪 ） 　 滋养体 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 犫 ） 　 包囊 图 犃 ． １ 　 刺激隐核虫发育各阶段形态与患刺激隐核虫病的大黄鱼 ３ 犌犅 ／ 犜 ３４７３３ — ２０１７ 　　　　　　　　 犮 ） 　 包囊中幼虫 　　　　　　　　　　　　　　　　　 犱 ） 　 逸出幼虫 犲 ） 　 患刺激隐核虫病的大黄鱼 图 犃 ． １ （ 续 ） ４ 犌犅 ／ 犜 ３４７３３ — ２０１７ 说明 ： １ ——— 宿主鱼 ； ２ ——— 滋养体 ； ３ ——— 包囊初期 ， 细胞质内出现许多液泡 ， 大核膨大 ， 小核明显 ； ４ ——— 大核盘曲 ， 小核多个 ， 包囊壁分 ３ 层 ， 中层波状 ； ５ ——— 分裂成大小两个细胞 ； ６ ——— 小细胞继续分裂 ； ７ ——— 分裂成许多纤毛幼虫 ； ８ ——— 自包囊出来的纤毛幼虫感染鱼体 。 注 ： ３ ～ ７ 所示为包囊期 。 图 犃 ． ２ 　 刺激隐核虫生活史 （ 仿孟庆显 ） ５ 犌犅 ／ 犜 ３４７３３ — ２０１７