书 书 书犐犆犛 ７１ ． ０４０ ． ４０ 犃 ４３ 中华人民共和国国家标准 犌犅 ／ 犜 ３８２６１ — ２０１９ 纳米技术 　 生物样品中银含量测量电感耦合等离子体质谱法 犖犪狀狅狋犲犮犺狀狅犾狅犵狔 — 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳狊犻犾狏犲狉犮狅狀狋犲狀狋狊犻狀犫犻狅犾狅犵犻犮犪犾狊犪犿狆犾犲狊 — 犐狀犱狌犮狋犻狏犲犾狔犮狅狌狆犾犲犱狆犾犪狊犿犪犿犪狊狊狊狆犲犮狋狉狅犿犲狋狉狔 ２０１９  １２  １０ 发布 ２０２０  ０７  ０１ 实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会 发布书 书 书目 　　 次 前言 Ⅲ ………………………………………………………………………………………………………… 引言 Ⅳ ………………………………………………………………………………………………………… １ 　 范围 １ ……………………………………………………………………………………………………… ２ 　 规范性引用文件 １ ………………………………………………………………………………………… ３ 　 术语和定义 １ ……………………………………………………………………………………………… ４ 　 缩略语 １ …………………………………………………………………………………………………… ５ 　 原理 １ ……………………………………………………………………………………………………… ６ 　 仪器与试剂 １ ……………………………………………………………………………………………… ７ 　 样品 ２ ……………………………………………………………………………………………………… ８ 　 试验步骤 ３ ………………………………………………………………………………………………… ９ 　 数据分析 ４ ………………………………………………………………………………………………… １０ 　 准确度和精密度 ４ ………………………………………………………………………………………… １１ 　 测试报告 ５ ………………………………………………………………………………………………… 附录 Ａ （ 资料性附录 ） 　 实验流程图 ６ ……………………………………………………………………… 附录 Ｂ （ 资料性附录 ） 　 测试报告模板 ８ …………………………………………………………………… 附录 Ｃ （ 资料性附录 ） 　 含有银包金纳米棒的生物组织中银含量的测量示例 ９ ………………………… 参考文献 １３ …………………………………………………………………………………………………… Ⅰ 犌犅 ／ 犜 ３８２６１ — ２０１９ 前 　　 言 　　 本标准按照 ＧＢ ／ Ｔ１．１ — ２００９ 给出的规则起草 。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。 本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 。 本标准由中国科学院提出 。 本标准由全国纳米技术标准化技术委员会 （ ＳＡＣ ／ ＴＣ２７９ ） 归口 。 本标准起草单位 ： 国家纳米科学中心 、 中国食品药品检定研究院 、 北京市理化分析测试中心 、 国家药品监督管理局医疗器械技术审评中心 。 本标准主要起草人 ： 吴美玉 、 刘颖 、 李瑞如 、 王新胜 、 柳琳 、 高峡 、 赵婷 、 陈宽 、 淡墨 、 陈亮 、 徐丽明 、 谢黎明 。 Ⅲ 犌犅 ／ 犜 ３８２６１ — ２０１９ 引 　　 言 　　 银纳米颗粒具有广谱的抗菌活性 ， 广泛应用于生活用品以及医疗器械中 ［ １ ， ２ ］ 。 随着应用范围的不断扩大 ， 银纳米颗粒进入人体的途径更加多样化 ， 并以多种形式存在于生物组织中 。 因此 ， 银暴露的风险引起了高度关注 。 在银纳米颗粒的毒代动力学等生物效应和安全性评价中 ， 银纳米颗粒暴露后 ， 可以以颗粒 、 离子等多种形式存在于生物样品中 ， 而不同形式的银元素均在其生物学功能中发挥重要作用 ， 所以准确测量生物样品中银元素的总含量非常重要 。 但是 ， 目前尚无相关国家标准 。 电感耦合等离子体质谱法 （ ＩＣＰＭＳ ） 是以等离子体为离子源的一种质谱型元素分析方法 ， 主要用于进行多种元素的同时测定 ， 适用于痕量或微量重金属元素的分析 ［ ３ ～ ５ ］ 。 本标准包括经银纳米颗粒暴露的生物样品的微波消解方法 ， 以及使用 ＩＣＰＭＳ 测量消解后样品中银元素总含量的方法 。 Ⅳ 犌犅 ／ 犜 ３８２６１ — ２０１９ 纳米技术 　 生物样品中银含量测量电感耦合等离子体质谱法 警示 ——— 本标准方法中使用的部分试剂具有腐蚀性和强氧化性 ， 需谨慎防护 ， 避免接触皮肤和衣 物 ； 微波消解过程应在通风橱内进行 ， 按仪器相关设备安全规定操作 ； 注意安全用电 。 １ 　 范围 本标准规定了生物样品中银含量的定量测量方法 ， 包括样品制备和测量步骤 。 本标准适用于多种生物样品 （ 生物组织 、 细胞 、 ３Ｄ 组织模型等 ） 中银含量的定量测量 。 ２ 　 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 。 凡是注日期的引用文件 ， 仅注日期的版本适用于本文件 。 凡是不注日期的引用文件 ， 其最新版本 （ 包括所有的修改单 ） 适用于本文件 。 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 　 分析实验室用水规格和试验方法 ＧＢ ／ Ｔ１９６１９ 　 纳米材料术语 ＧＢ ／ Ｔ３０９０３ 　 无机化工产品 　 杂质元素的测定 　 电感耦合等离子体质谱法 （ ＩＣＰＭＳ ） ３ 　 术语和定义 ＧＢ ／ Ｔ１９６１９ 和 ＧＢ ／ Ｔ３０９０３ 界定的术语和定义适用于本文件 。 ４ 　 缩略语 下列缩略语适用于本文件 。 ＩＣＰＭＳ ： 电感耦合等离子体质谱 （ ｉｎｄｕｃｔｉｖｅｌｙｃｏｕｐｌｅｄｐｌａｓｍａｍａｓｓｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ ） ５ 　 原理 生物样品经微波消解后定容 ， 所得溶液采用 ＩＣＰＭＳ 方法进行元素含量检测 。 定量方法采用内标 法 ， 即在待测样品 、 空白样品和加标样品中通过蠕动泵在线加入相同浓度的内标元素 ， 根据银元素的强度与内标元素强度值的比值和银元素浓度的定量关系实现对银的定量分析 。 该方法中设置加标样品以判定测量结果的准确性 。 ６ 　 仪器与试剂 ６ ． １ 　 仪器 ６ ． １ ． １ 　 电感耦合等离子体质谱分析仪 （ ＩＣＰＭＳ 分析仪 ）。 ６ ． １ ． ２ 　 微波消解仪 ： 具备程式化功率设定功能 ， 最大输出功率 ≥ １２００Ｗ ， 最高设定温度 ≥ １９５℃ 。 １ 犌犅 ／ 犜 ３８２６１ — ２０１９ ６ ． １ ． ３ 　 消解罐 ： 压力消解罐 ， 聚四氟乙烯材质或等效材质 ， ５５ｍＬ 。 ６ ． １ ． ４ 　 聚四氟乙烯管 ： １５ｍＬ 。 ６ ． １ ． ５ 　 赶酸仪 ： 工作温度范围为室温至 ２００℃ 。 ６ ． １ ． ６ 　 分析天平 ： 灵敏度 ０．１ｍｇ 。 ６ ． １ ． ７ 　 移液器 ： 量程 ２．５ μ Ｌ ， 量程 １０ μ Ｌ ， 量程 ２００ μ Ｌ ， 量程 １０００ μ Ｌ 。 ６ ． １ ． ８ 　 冰箱 ： 可满足 －２０℃ 冷冻存储条件 。 ６ ． ２ 　 试剂 除非另有说明 ， 分析时均使用确认为优级纯或以上级别的化学试剂 ， 实验用水为符合 ＧＢ ／ Ｔ６６８２ 规定的一级水 ， 标准溶液使用有证标准物质 。 ６ ． ２ ． １ 　 硝酸 ： ρ ＝１．４２ｇ ／ ｍＬ 。 ６ ． ２ ． ２ 　 银标准溶液 ： 介质 １．０ｍｏｌ ／ Ｌ 硝酸 。 ６ ． ２ ． ３ 　 内标标准溶液 ： 介质 １．０ｍｏｌ ／ Ｌ 硝酸 。 宜选用铟 （ １１５ Ｉｎ ） 和铑 （ １０３ Ｒｈ ） 为内标元素 ， 内标元素的选择原则参考 ＧＢ ／ Ｔ３０９０３ 。 ６ ． ２ ． ４ 　 氩气 ： 纯度 ≥ ９９．９９％ 。 ７ 　 样品 ７ ． １ 　 样品前处理流程图 参见附录 Ａ 中图 Ａ．１ 。 ７ ． ２ 　 待测生物样品制备 ７ ． ２ ． １ 　 将冷冻的待测生物样品室温解冻 ， 差量法准确称取一定量的样品 （ 犿 Ｔ ， 宜为 ０．１００ｇ ～ ０．５００ｇ ） 至 ５５ｍＬ 微波消解罐中 。 新鲜获得的样品可直接称量 。 注 １ ： 对于总质量不足 ０．１００ｇ 的生物样品 ， 可以实际称量质量为准 。 注 ２ ： 体外 ３Ｄ 模型生物样品直接将收集的样品投入消解罐即可 ， 可不称量 ； 体外 ２Ｄ 细胞经胰酶消化 、 离心收集入 离心管后 ， 在离心管中加入 １ｍＬ 浓硝酸预消解过夜 ， 然后转移至消解罐 ， 进行微波消解步骤 。 ７ ． ２ ． ２ 　 在上述每个微波消解罐中加入 １０ｍＬ 浓硝酸 ， 预消解 ３０ｍｉｎ 。 ７ ． ２ ． ３ 　 旋紧消解罐 ， 将其对称安装在转盘上进行微波消解 。 微波消解参考程序见表 １ 。 注 ： 不同微波消解仪可根据仪器固有条件适当调整功率和消解时间等程序参数 ， 保证样品消解完全即可 。 表 １ 　 生物样品微波消解参考程序 １ 步骤 功率 ／ Ｗ 升温时间 ／ ｍｉｎ 温度 ／ ℃ 保持时间 ／ ｍｉｎ １ １６００ ８ １２０ ２ ２ １６００ ８ １６０ ５ ３ １６００ ８ １９５ ５０ ７ ． ２ ． ４ 　 待消解程序结束 ， 取出消解罐冷却至室温 。 ７ ． ２ ． ５ 　 旋开消解罐 ， 使消解过程产生的气体缓慢释放 ， 观察并确定样品是否完全消解 。 若消解完全 ， 则执行步骤 ７．２．６ 。