ICS 67.220.20 CCS X 41 中 华 人 民 共 和 国 供 销 合 作 行 业 标 准 GH/T 1330—2021 GH 食品添加剂半乳甘露聚糖中半乳糖与甘露 糖的摩尔分数测定 毛细管气相色谱法 Determination of the mole fraction of galactose and mannose in galactomannan as food additive —Capillary gas chromatography 2021 - 03 - 11发布 2021 - 05 - 01实施 中华全国供销合作总社 发布 GH/T 1330 —2021 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由中华全国供销合作总社提出并归口。 本文件起草单位：中华全国供销合作总社南京野生植物综合利用研究院、苏州佰思纬食品安全科技 有限公司、 安徽万礼食品有限责任公司、 江苏省理化测试中心、江苏佳信检测技术有限公司、华测检测 认证集团北京有限公司、 广饶六合化工有限公司、 中华全国供销合作总社昆明食用菌研究所 、盐城师范 学院、南京农业大学 、江苏国测检测技术有限公司 。 本文件主要起草人：徐慧、张焕仕、雷鹏、 刘杰、朱昌玲、孙达锋、张锋伦、张卫明、单春生、崔 岩、张书玉、 任树亮、 傅雷、陈志勇、 唐伯平、张代臻、汪正飞、陈芳芳 、项厚生、王韦岗、安俊芳 。 GH/T 1330 —2021 1 食品添加剂半乳甘露聚糖中半乳糖与甘露糖的摩尔分数测定 毛细 管气相色谱法 1 范围 本文件规定了半乳甘露聚糖中半乳糖与甘露糖摩尔分数的测定方法。 本文件适用于半乳甘露聚糖胶产品。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 半乳甘露聚糖 galactomannan 由半乳糖和甘露糖构成的杂聚糖，其基本结构是由β -(1-4)-D-甘露糖构成主链，在主链上通过α -(1-6)糖苷键连接有单个 D-半乳糖形成的支链。 半乳糖 galactose 又名D-(＋)-半乳糖、 D-吡喃半乳糖，分子式为 C6H12O6，相对分子质量为 180.16，其结构式如下： 甘露糖 mannose 又名D-(＋)-甘露糖、 D(＋)甘露糖，是半乳糖的同分异构体，分子式为 C6H12O6，相对分子质量为 180.16，其结构式如下： GH/T 1330 —2021 2 4 原理 半乳甘露聚糖在高温条件下，通过酸解作用可被水解为半乳糖和甘露糖，半乳糖和甘露糖经过糖腈 乙酸酯衍生化后形成的半乳糖衍生物和甘露糖衍生物可通过气相色谱进行分析，内标法定量（内标物采 用肌醇）。 5 试剂和仪器 本文件所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和 GB/T 6682 中规定的三级水。 试剂 5.1.1 无水乙醇（ C2H5OH）。 5.1.2 浓硫酸（ H2SO4，98%）。 5.1.3 碳酸钡（ BaCO 3）。 5.1.4 D-甘露糖标准品（ C6H12O6），纯度≥ 98.0%。 5.1.5 D-半乳糖标准品（ C6H12O6），纯度≥ 98.0%。 5.1.6 盐酸羟胺（ HO-NH2•HCl）。 5.1.7 肌醇（C6H6（OH）6）。 5.1.8 吡啶（C5H5N）。 5.1.9 醋酸酐（ C4H6O3）。 5.1.10 氢（H2），纯度 99.999%。 仪器 5.2.1 气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器。 5.2.2 分析天平：感量 0.1 mg和0.01 g。 5.2.3 冷冻干燥机：非接触式。 5.2.4 离心机：转速不低于 8000 r/min 。 5.2.5 微量注射器： 1 µL、5 µL。 GH/T 1330 —2021 3 6 分析步骤 半乳甘露聚糖的纯化 称取0.5 g试样，溶于水中并定容至 50 mL，室温下搅拌溶解，然后将试样溶液在 8000 rpm 下离心10 min，弃去沉淀，保留上清液。 向上述离心上清液中加入 150 mL无水乙醇，并充分混匀。将混合溶液在 8000 rpm 下离心10 min，弃 去上清液，将沉淀置于冷冻干燥机中冻干，即得到纯化的半乳甘露聚糖。 半乳甘露聚糖的水解 称取20 mg 6.1 中纯化的半乳甘露聚糖样品于安瓿瓶中，加入 1 mol/L的硫酸2 mL，封管后 105 ℃水 解8 h，冷却至室温，加入过量 BaCO 3中和至样品溶液中无气泡产生， 8000 rpm 离心10 min 除去沉淀， 上清液置于冷冻干燥机中冻干。 标准单糖的衍生化方法 分别称取 D-甘露糖和 D-半乳糖标准品 2 mg混合，加入 10 mg盐酸羟胺， 2 mg肌醇，1 mL吡啶， 90 ℃水浴震荡 30 min。冷却至室温后加入 1 mL醋酸酐， 90 ℃水浴加热 30 min，冷却至室温。 水解单糖的衍生化方法 称取4.0 mg 6.2 中制备的水解单糖样品，按照 6.3所述衍生化方法进行处理。 色谱条件 色谱柱： 14%氰丙基聚苯基硅氧烷石英毛细管柱， 30 m × 0.32 mm (id) × 0.25 µm；或等效柱； 检测器：氢火焰离子检测器； 气化室温度： 260 ℃； 检测器温度： 250 ℃； 进样量： 0.2 µL； 柱温采取程序升温：起始温度 165 ℃保持3 min，每分钟升 5 ℃，升温至 240 ℃保持20 min； 分流比： 30∶1。 色谱分析 按6.5规定的色谱条件将 6.3、6.4中制备的待测液依次注入气相色谱仪进行分析，记录色谱图。标 准单糖和 半乳甘露聚糖 （以胡芦巴胶为例）的典型色谱图参见附录 A。 7 结果计算 校正因子计算 半乳糖和甘露糖的校正因子分别以 𝑓G和𝑓M表示，并按式（ 1）和（2）计算。 𝑓G=𝐴SI𝑊SG 𝐴SG𝑊SI ································ ································ ··········· (1) 𝑓M=𝐴SI𝑊SM 𝐴SM𝑊SI ································ ································ ··········· (2) 式中： GH/T 1330 —2021 4 𝑓G —半乳糖校正因子； 𝐴SI—标准品中肌醇的峰面积； 𝐴SG—标准品中半乳糖的峰面积； 𝑊SG—标准品中半乳糖的质量，单位为毫克（ mg）； 𝑊SI—标准品中肌醇的质量，单位为毫克（ mg）； 𝑓M —甘露糖校正因子； 𝐴SM—标准品中甘露糖的峰面积； 𝑊SM—标准品中甘露糖的质量，单位为毫克（ mg）。 半乳糖和甘露糖百分含量计算 半乳糖和甘露糖的含量以质量百分数计，分别以 𝑃G和𝑃M表示，并按式（ 3）和（4）计算。 𝑃G=𝑓G𝐴G𝑊I 𝐴I𝑊×100% ································ ································ ··· (3) 𝑃M=𝑓M𝐴M𝑊I 𝐴I𝑊×100% ································ ································ ·· (4) 式中： 𝑃G—试样中半乳糖的含量， %； 𝐴G—试样中半乳糖的峰面积； 𝐴I —试样中肌醇的峰面积； 𝑊I—试样中肌醇的质量，单位为毫克（ mg）； 𝑊—试样的质量，单位为毫克（ mg）； 𝑃M—试样中甘露糖的含量， %； 𝐴M—试样中甘露糖的峰面积。 半乳糖和甘露糖的摩尔分数计算 试样中半乳糖和甘露糖的摩尔分数分别以 𝑀G和𝑀M表示，并按式（ 5）和（6）计算。 𝑀G=𝑃G (𝑃G+𝑃M) ································ ································ ········· (5) 𝑀M=𝑃M (𝑃G+𝑃M) ································ ································ ········· (6) 式中： 𝑀G—半乳糖的摩尔分数； 𝑀M—甘露糖的摩尔分数。 注： 五种典型半乳甘露聚糖的半乳甘露摩尔分数参见附录 B。 8 结果报告 做2次平行试验，平行测定的绝对差值不应大于 5 %，取平行试验结果的算术平均值作为测定结果， 小数点后保留 3位有效数字。 GH/T 1330 —2021 5 A