ICS67.050 CCSX04 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T5326.3—2020 进出口食品化妆品专业分析方法验证指南 第3部分:传统微生物学方法 Guideline on validation of test methods for food and cosmetics of import and export— Part 3:Traditional microbiological methods 2020-12-30发布 2021-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件是SN/T 5326《进出口食品化妆品专业分析方法验证指南》的第3部分。SN/T 5326已经 发布了以下部分: ———第1部分:通用指南; ———第2部分:化学方法; ———第3部分:传统微生物学方法。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本文件起草单位:中华人民共和国上海海关、深圳市检验检疫科学研究院、中国检验检疫科学研究 院、中华人民共和国天津海关、南京农业大学、中华人民共和国南京海关、中华人民共和国福州海关、中 华人民共和国拱北海关、中华人民共和国大连海关、中华人民共和国深圳海关、中华人民共和国石家庄 海关、中华人民共和国太原海关。 本文件主要起草人:蒋原、薛峰、岳振峰、陈颖、杨捷琳、曾德新、郑文杰、冯家望、黄晓蓉、吕敬章、 郑晶、曹际娟、王娉、王建昌、张敏爱。 ⅠSN/T5326.3—2020 进出口食品化妆品专业分析方法验证指南 第3部分:传统微生物学方法 1 范围 本文件规定了进出口食品传统微生物学检验类标准的验证指南,进出口化妆品传统微生物学检验 类标准的验证可参照本文件执行。 本文件适用于进出口食品传统微生物学检验类标准建立过程中方法的验证,无论该标准是新制定 标准、修订标准,还是等同采用或修改采用国际标准。此外,实验室采用非标准方法及自主研究开发新 方法时,也可参照本文件用以验证这些方法的适用性。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T 6379.2—2004 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第2部分:确定标准测量方 法重复性与再现性的基本方法(ISO 5725-2:1994,IDT) SN/T 3266—2012 食品微生物检验方法确认技术规范 3 术语和定义 SN/T 3266—2012界定的以及下列术语和定义适用于本文件。 3.1 参考方法 reference method 国际、国家、行业或组织认可并被广泛接受的方法。优先考虑国际标准化组织(ISO)、美国分析化 学家协会(AOAC)、中国国家标准(GB)推荐的方法,其他国际认可的方法也可以作为参考方法。 3.2 被分析物 analyte 分析方法所测定的成分。在微生物学方法中指的是微生物本身及其相关的副产物(如:酶或毒素)。 3.3 定性方法 qualitative method 用直接或间接的方法检测被分析物是否存在的分析方法。 3.4 定量方法 quantitative method 对一定数量的样品进行直接(例如,对一定质量或体积的样品进行计数)或间接(如:颜色吸收、阻抗 等)测量被分析物数量的分析方法。 1SN/T5326.3—2020 3.5 部分回收 fractional recovery 一组相同接种水平的样品获得阳性结果的数量和阴性结果的数量,阳性结果比例应该约占总样品 数的50%,则满足验证标准。 3.6 定量限 limit of quantitation 指在给定的置信水平上,样品中的目标微生物能被可靠检出的最低浓度或含量。 3.7 包容性 inclusivity 包容性指使用待验证方法从众多菌中检测到目标菌的能力。 3.8 排他性 exclusivity 排他性指待验证方法对可能引起交叉反应的相关非目标菌株的抗干扰能力。 4 分析方法的性能参数规定 4.1 验证参数的选择 4.1.1 方法制定实验室应根据所制定方法的预期用途选择合适的验证参数,并形成实验室内验证 方案。 4.1.2 对于定性方法,典型的验证参数包括方法的灵敏度、特异性、假阴性率、假阳性率、相对准确度、 检出限。 4.1.3 对于定量方法,典型的验证参数包括方法的定量限、选择性(包容性、排他性)、重复性、重复性 值、重复性相对标准偏差。 4.2 性能指标 4.2.1 待验证方法与参考方法比较时,定性方法应达到以下性能指标: ———灵敏度≥98%; ———特异性≥90.4%; ———假阴性率<2%; ———假阳性率<9.6%; ———相对准确度≥94%; ———检出限≤3 CFU/25 g或mL ~5 CFU/25 g或 mL。 4.2.2 待验证方法与参考方法比较时,定量方法应达到以下性能指标: ———选择性:包容性≥98%(30个目标菌株),排他性≤10%(20个竞争菌株); ———待验证方法与参考方法比较时,二者的重复性值(r)、重复性相对标准偏差(RSDr)、再现性值 (R)、再现性相对标准偏差(RSDR)无显著差异。 4.3 传统微生物学方法性能参数的具体规定 传统微生物学方法性能参数的具体规定可参考SN/T 3266—2012。 2SN/T5326.3—2020 5 微生物分析方法性能指标的验证 5.1 规范与要求 5.1.1 采用的参考方法 参考方法优先采用国际标准化组织(ISO)、美国分析化学家协会(AOAC)、中国国家标准(GB)推 荐的方法,其他国际认可的方法也可以作为参考方法[如:美国食品药品管理局(FDA)的FDA/BAM 等]。 5.1.2 食品种类和类型 5.1.2.1 微生物学方法推荐的食品种类和食品类型见附录A。如果方法适用范围为所有或绝大部分 食品,那么应从附录A中选择至少5个食品种类,每个种类中选择3个类型的食品进行分析。如果方 法仅限于特定的食品范围,从附录A中挑选的食品种类数目可以缩减到1类、2类、3类或4类食品。 5.1.2.2 为减少当地特殊食品造成的偏差,宜在尽可能广的范围内选择食品种类,并且宜包括那些涉 及食物中毒和有召回要求的食品。 5.1.2.3 对于每一类食品,如果不可能获得足够数目的自然污染食品,允许使用人工污染食品样品。 5.1.3 接种培养物 5.1.3.1 自然污染的样品有时很难得到,因此常使用目标菌接种制备人工污染食品样品。对于一个属 水平的方法,应尽可能使用不同种或不同血清型的菌株,并且每个食品类型都应接种有代表性的不同种 或不同血清型的菌株。 5.1.3.2 加工食品中的微生物是典型的受损伤菌。因此,对这些类型的食品进行人工污染的微生物也 应该是受损伤的。可把未受损伤的微生物接种到未加工食品中,把冻干菌种接种到干粉或粒状食品中, 把湿润菌株接种到潮湿食品中。 5.1.3.3 如果一种方法用来检测通常在所有的食品类型中都不易发现的特定菌株,或者根据参考文 献,某类食品的目标微生物不在检测水平内,也可以接种培养物制备人工污染样品进行试验。 5.1.3.4 人工污染后的食品样品应小心处理,保存在合适的条件下,使微生物在分析前保持稳定。 5.1.4 接种水平和对照 定性方法和定量方法的接种水平和阴性对照样品按如下要求执行: a) 定性方法验证:每一种食品至少分成两份,一份作为阴性对照,另一份在保证部分回收的水平 上接种。一般情况下,根据检测方法的最低检出限设定低接种水平,例如,每份检测样品 1 CFU/25 g~5 CFU/25 g。如果需要,推荐制备一份高接种水平样品,设定为每份检测样品 10 CFU/25 g~50 CFU/25 g,而这一水平是唯一可接受的部分回收率的要求,其他接种水平 可根据需要增加; b) 定量方法验证:对于人工污染的食品,要求有高、中、低3个接种水平(例如,102~103 CFU/g、 104 CFU/g、105 CFU/g)和一个未接种对照。低接种水平应设定在检出限左右,中、高接种水 平应当分别高1个和2个对数级。如有必要,可加做中间水平以提高精密度。 5.1.5 测试样品数量 不同验证试验的测试样品数量要求如下: a) 定性方法实验室内验证:每一接种水平的测试样品数量是20份,即每一种类食品应测试60个 3SN/T5326.3—2020 样品(3个类型×20个样品); b) 定性方法实验室间验证:每一种食品类型每一接种水平做6个样品; c) 定量方法实验室内验证:对每个接种水平和阴性对照,都要用待验证方法和参考方法各检测5 个样品; d) 定量方法实验室间验证:测试样品数量,每一种食品类型每一接种水平做2个样品。 5.1.6 自然污染样品 自然污染样品的数量要求如下: a) 定性方法验证:每个自然污染的食品类型至少需要2批。应努力获得自然污染样品,这些产品 最大程度地代表了方法使用的真实环境。这些自然污染样品,没有阴性对照。要分析20份由 每批自然污染制品而成的样品,如果所有的20份都是阳性,可将样品稀释以获得部分阳性,并 重复分析该批样品; b) 定量方法验证:要求大约50%的食品类型为自然污染,