以正式出版文本为准I C S6 5.0 2 0 .0 1 C C SB1 6 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 S N/T5 3 8 1—2 0 2 1 膨果苋检疫鉴定方法 D e t e c t i o n a n d i d e n t i f i c a t i o n o f a m a r a n t h u s d efl e x u sL. 2 0 2 1-0 6-1 8发布 2 0 2 2-0 1-0 1实施 中华人民共和国海关总署 发 布以正式出版文本为准中华人民共和国出入境检验检疫 行 业 标 准 膨果苋检疫鉴定方法 S N/T 5 3 8 1—2 0 2 1 * 中国海关出版社有限公司出版发行 北京市朝阳区东四环南路甲 1号(1 0 0 0 2 3) 编辑部: (0 1 0)6 5 1 9 4 2 4 2 - 7 5 3 1 网址 www. c u s t o m s k b. c o m /b o o k 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 * 开本8 8 0×1 2 3 0 1 /1 6 印张1. 2 5 字数3 7千字 2 0 2 1年7月第一版 2 0 2 1年7月第一次印刷 印数 1—5 0 0 * 书号: 1 5 5 1 7 5·6 7 5 定价2 0.0 0元以正式出版文本为准前 言 本文件按照 G B/T 1. 1—2 0 2 0 《标准化工作导则 第1 部分:标准化文件的结构和起草规则 》的规 则起草。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口 。 本文件起草单位 :中国检验检疫科学研究院 、福州海关技术中心 、二连海关技术中心 、青岛海关技术 中心、无锡海关综合技术中心 、中华人民共和国银川海关 、广州海关技术中心 、南通海关综合技术中心 。 本文件主要起草人 :徐晗、潘绪斌、虞赟、袁淑珍、邵秀玲、孙旻旻、胡诗瑶、吴海荣、孙民琴。 ⅠS N/T5 3 8 1—2 0 2 1以正式出版文本为准以正式出版文本为准膨果苋检疫鉴定方法 1 范围 本文件规定了膨果苋 (Am a r a n t h u s d e lfl e x u s L.)检疫鉴定方法 。 本文件适用于膨果苋检疫鉴定 。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款 。其中,注日期的引用文 件, 仅该日期对应的版本适用于本文件 ;不注日期的引用文件 ,其最新版本 (包括所有的修改单 )适用于 本文件。 S N/T 1 1 9 3 基因检验实验室技术要求 S N/T 3 7 1 0 异株苋亚属检疫鉴定方法 S N/T 4 7 1 5 杂草采集 、保存和制作规范 3 术语、定义和缩略语 3.1 术语和定义 S N/T 3 7 1 0界定的以及下列术语和定义适用于本文件 。 3.1.1 胞果 U t r i c l e 干果的一种 ,又称囊果 ,由合生心皮形成的一类果实 ,具一枚种子 。成熟时,果皮薄且干燥 ,疏松地 包围种子 ,极易与种子分离 。 3.1.2 苞片 B r a c t 在花或花序基部的退化的单片或数片叶或叶状结构 ,是介于正常叶和花之间的一种变态叶 ,有保护 花芽或果实的作用 。 3.1.3 高光谱 Hy pe r spe c t r a l 光谱分辨率优于 λ/1 0 0。其光谱分辨率在可见光到短波红外波段可达纳米 (n m)数量级,通常具有 波段多的特点 ,光谱通道数多达数十甚至数百个以上 ,而且各光谱通道间往往是连续的 。 3.2 缩略语 下列缩略语适用于本文件 。 P C R:po lym e r a s e c h a i n r e a c t i o n ,聚合酶链式反应 。 DNA:d e o xyr i b o n u l e i c a c i d,脱氧核糖核酸 。 I T S:i n t e r n a l t r a n s c r i b e d spa c e r s 1 a n d 2 a n d t h e i n t e r v e n i n g 5. 8 S r i b o s o m a l ge n e,核糖体DNA内 转录间隔区 1和内转录间隔区 2,以及5. 8 S核糖体基因 。 TAE:T r i s a c e t a t e -E DTA b u f f e r,T r i s -乙酸电泳缓冲液 。 1S N/T5 3 8 1—2 0 2 1以正式出版文本为准4 膨果苋基本信息 学名:Am a r a n t h u s d efl e x u s L. 英文名:l a rge f r u i t a m a r a n t h , A rge n t i n a a m a r a n t h , d e f l e x e d a m a r a n t h , l o w a m a r a n t h 分类地位 :双子叶植物纲 M agn o l i ops i d a,石竹目C a ryophyl l a l e s,苋科Am a r a n t h a c e a e J u s s i e u ,苋属 Am a r a n t h u s L .,白苋亚属 Am a r a n t h u s s u b ge n. A l b e r s i a (K u n t h) G r e n. & G o d r . 有害生物信息参见附录 A。 5 方法原理 膨果苋植株 、花序、花、胞果和种子等形态特征是鉴定该种的主要依据 ,基于DNA条形码鉴定的分 子生物学方法作为形态学鉴定的辅助手段 。 当植物体组织完好 ,在花果期 ,具备花等繁殖器官 ,可仅使用形态学鉴定方法 。 当植物体组织不完整 ,在幼苗期 ,或仅有种子 、叶片等部分组织时 ,需采用形态学和分子生物学相结 合的鉴定方法 。种子鉴定可选择性参考高光谱特征 (参见附录 B) 。 6 器具和试剂 6.1 仪器 体视显微镜 、电子天平 (感量0. 0 0 1 kg,0. 0 0 1 g) 、液氮罐、纯水机、电子天平 、水浴锅、高压灭菌器 、 高温干燥箱 、离心机、电泳仪、P C R仪、电泳槽、凝胶成像系统 、高通量研磨机 、涡旋震荡器等 。 6.2 设备 电动筛或套筛 、解剖刀、解剖针、放大镜、直尺、镊子、小毛笔、培养皿、指形管、广口瓶、白瓷盘、分样 台、分样板、样品铲、样品袋、标签、记录纸、标本瓶、标本盒、可调移液器 (1 0 0 0 μL,2 0 0 μL,1 0 0 μL, 2 0 μL,1 0 μL,2. 5 μL) 、可调移液器枪头等 。 6.3 试剂 防虫剂、樟脑精、干燥剂。植物基因组提取试剂盒 、P C R反应体系常用试剂 、TAE电泳缓冲液和核 酸分子量标准物质等 。 7 检测 7.1 样品检测 7.1.1 口岸监测 在检疫现场采集植株鉴定用样品 ,要求植株完整 ,形态学特征完好 。花部鉴定用样品 ,要求处于果 实成熟期 、外型完整 。种子鉴定用样品 ,要求发育成熟 、籽粒饱满 、外型完好 。 7.1.2 植物产品检测 将现场检疫抽取的送检样品充分混匀 ,制成平均样品 。采用四分法 ,视样品多少取平均样品的二分 之一至四分之三 (较少样品时 )作为试验样品 ,称取其重量并记录 ,每份试验样品不少于 1 kg,剩余的平 2S N/T5 3 8 1—2 0 2 1以正式出版文本为准均样品加贴标签作为保留样品保存 。送检样品不足 1 kg的全部检测 。 7.1.3 胞果和种子过筛检验 根据样品个体的直径确定套筛的规格 ,从大到小依次套上不同孔径的规格筛并加上底筛 ,将适量样 品倒入规格筛的上层内 ,盖上筛盖 ,用回旋法过筛 (或用电动筛振荡 ) ,使样品充分分离 ,把过筛的筛上物 和筛下物分别倒入白瓷盘内 ,用镊子挑取杂草籽实 ,放于培养皿内 。混杂于植物原粮和种子中的苋属胞 果或种子 ,一般在孔径为 5 mm筛下物中获得 。当样品量少时 ,也可将全部样品放入白瓷盘中进行人工 挑检。 7.2 镜检 在解剖镜或放大镜下镜检 。进行植株花部特征和胞果内部特征观察时 ,辅以解剖刀 、解剖针等 工具。 8 鉴定方法 8.1 形态学鉴定 8.1.1 苋属 一年或短时多年生草本 ,茎直立或伏卧 。叶互生,全缘,有叶柄。花单性,雌雄同株或异株 ,腋生或 顶生,聚生成单一或圆锥状穗状花序 ;每花有1苞片及2小苞片,干膜质;花被片0 - 5,大小相等或不等 , 绿色或着色 ,薄膜质,直立或向外反折 ,在果期直立 ,间或在花期后变硬或基部加厚 ;雄蕊5,少数1 - 4,花 丝钻状或丝状 ,基部离生 ,花药2室;无退化雄蕊 ;子房具1直生胚珠 ,花柱极短或缺 ,柱头2 - 3,钻状或条 形,宿存,内面有细齿或微硬毛 。胞果球形或卵形 ,侧扁,膜质,不裂、周裂或不规则开裂 。种子双凸镜 状,侧扁,黑色、深褐色、红褐色或褐色 ,平滑,边缘锐或钝 ,具光泽。 该属含苋亚属 、白苋亚属和异株苋亚属 ,约7 4种,除南北两极外 ,均有分布 。我国有2 0余种。 8.1.2 白苋亚属 一年生或短时多年生草本 ,雌雄同株 ,平卧或匍匐 ,少直立。茎光滑或近光滑 ,有时被短柔毛 。叶互 生,具柄,形状多变 ,线形至椭圆形 ,基部渐狭或楔形 ,先端具小短尖 。花序多为腋生团簇状或短穗状 ,少 见顶生短穗状 。雄花