以正式出版文本为准I C S1 1.0 2 0 C C SC6 2 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 S N/T5 3 8 2—2 0 2 1 金 毛 狗 鉴 定 方 法 I d e n t i f i c a t i o n o f C i b o t i u m b a r o m e t z (L.) J. S m. 2 0 2 1-0 6-1 8发布 2 0 2 2-0 1-0 1实施 中华人民共和国海关总署 发 布以正式出版文本为准以正式出版文本为准前 言 本文件按照 G B/T 1. 1—2 0 2 0《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则 》的规定 起草。 本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口 。 本文件起草单位 :中华人民共和国福州海关 、中华人民共和国厦门海关 。 本文件主要起草人 :李敏、虞赟、陈智明、于文涛、沈建国、林春滢、过赋文、林阳武。 ⅠS N/T5 3 8 2—2 0 2 1以正式出版文本为准以正式出版文本为准金 毛 狗 鉴 定 方 法 1 范围 本文件规定了金毛狗的鉴定方法 。 本文件适用于金毛狗的鉴定 。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件 。 3 术语、定义和缩略语 3.1 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 。 3.1.1 二回羽状复叶 b ipi n n a t e l e a f 总叶柄两侧有羽状排列的分枝 ,其上着生羽状排列的小叶 。 3.1.2 羽片 pi n n a(pl .pi n n a e) 羽状复叶的一回分裂羽叶或小叶 。 3.1.3 小羽片 pi n n u l e 二回或二回以上羽状复叶的末级羽片 。 3.1.4 小羽轴 pi n n u l e r a c h i s 蕨类植物中分枝到小羽片的轴 。 3.1.5 叶轴 r a c h i s 复叶的主轴 。 3.1.6 羽轴 pi n n a r a c h i s 蕨类植物中分枝到羽片的轴 。 3.1.7 孢子 spo r e 蕨类植物产生的一种有繁殖作用的器官 ,离开母体后就能形成新的植株 。 3.1.8 孢子囊群 s o r u s(pl . s o r i) 蕨类植物叶片表面的一群孢子囊 。 1S N/T5 3 8 2—2 0 2 1以正式出版文本为准3.1.9 孢子囊 spo r a ngi u m(pl . spo r a ngi a) 产生孢子的囊状结构 。 3.1.1 0 囊群盖 i n d u s i u m (pl . i n d u s i a ) 保护孢子囊群的膜状物 。 3.1.1 1 孢子周壁 pe r i spo r e 围绕孢子的膜 。 3.2 缩略语 下列缩略语适用于本文件 。 C TA B:c e tyl t r i t hyl a mm o n i u m b r o m i d e ,十六烷基三甲基溴化铵 。 DNA:d e o xyr i b o n u c l e i c a c i d,脱氧核糖核酸 。 d NT P:d e o xyr i b o n u c l e o s i d e t r iph o sph a t e,脱氧核苷酸三磷酸 。 T aq酶:栖热水生菌 DNA聚合酶。 OD:opt i c a l d e n s i ty,光密度值 。 bp:b a s e pa i r,碱基对。 4 基本信息 学名:C i b o t i u m b a r o m e t z (L.)J . S m.。 异名:A spi d i u m b a r o m e t z (L.) W i l l d.;B a l a n t i u m gl a u c e s c e n s (K u n z e) L i n k;C i b o t i u m a s s a m i - c u m H o o k.;P o ly po d i u m b a r o m e t z L.;C i b o t i u m dja m b i a n u m H a s s k.;C i b o t i u m gl a u c e s c e n s K u n z e; D i c k s o n i a b a r o m e t z (L.) L i n k;N eph r o d i u m b a r o m e z (L.) S w e e t。 英文名:G o l d e n c h i c k e n f e r n;Wo o l ly f e r n;S cyt h i a n l a m b。 金毛狗,又称金毛狗蕨 ,隶属于金毛狗蕨科 C i b o t i a c e a e ,金毛狗蕨属 C i b o t i u m K a u l f .。 我国分布有 2种金毛狗蕨属植物 :金毛狗和菲律宾金毛狗蕨 C i b o t i u m c um i i ngi i K u n z e(异名C i - b o t i u m b a r o m e t z v a r .C u m i ngi i(K u n z e)C. C h r .;C i b o t i u m c r a s s i n e r v e R o s e n s t . ;C i b o t i u m t a i w a n e n s e C. M. K u o) 。 金毛狗的其他信息参见附录 A。 5 方法原理 金毛狗植株或根状茎可通过旅客携带 、邮包夹带及货物掺杂等方式进出境 。通过肉眼和利用放大 镜、体视显微镜 、扫描电子显微镜观察 ,根据本文件描述的金毛狗植株形态鉴定特征 ,按系统分类学方法 进行判定 。对于植株形态特征不明显的 ,可结合本文件描述的分子生物学方法进行辅助判定 。 6 仪器器具和主要试剂 6.1 仪器 体视显微镜 、扫描电子显微镜 、P C R仪、核酸电泳仪 、凝胶成像系统 、恒温水浴锅 、高速冷冻离心机 、 纯水仪、生物安全柜 、冰箱、超低温冰箱 、高压灭菌锅 、可调移液器 、可调移液器枪头 。 2S N/T5 3 8 2—2 0 2 1以正式出版文本为准6.2 器具 放大镜、解剖刀、解剖针、镊子、培养皿、白瓷盘、样品袋、标本夹、标签、记录纸、标本瓶、标本盒、电子 天平、研钵、离心管、P C R管。 6.3 主要试剂 防虫剂、干燥剂、液氮、超纯水、植物基因组提取试剂盒 、C TA B法提取试剂 、脱氧核糖核苷三磷酸 (d NT P s) 、T aq聚合酶、1 0×P C R 缓冲液、DNA M a r k e r、琼脂糖、核酸凝胶染料 。 7 形态鉴定特征 7.1 金毛狗蕨属 根状茎,卧生或直立 ;根状茎和叶柄基部密被长茸毛 ;二回至三回羽状复叶 ,长2 m~3 m;囊群盖坚 硬,两瓣;孢子四面体形 ,具肋条状隆起的纹饰和赤道环 。 7.2 金毛狗形态特征 7.2.1 整体形态 多年生树形蕨类植物 。植株高达 3 m。金毛狗植株形态特征参见附录 B中的图B. 1、图B. 2、 图B. 3、图B. 4、图B. 5。 7.2.2 茎 根状茎,卧生,粗大,直径4 c m~8 c m;基部被垫状金黄色茸毛 ,形状如狗头 。金毛狗根状茎形态特 征参见附录 B中的图B. 1、图B. 3。 7.2.3 叶 叶着生于根状茎顶端 ,簇生成冠状 ;叶柄长1 0 0 c m~1 2 0 c m,绿色,后变成紫色 ;叶柄基部粗壮 ,直 径可达2 c m,且其基部被长 1 c m~2. 4 c m的黄色柔毛 ;显微观察叶柄基部 ,横切面维管束呈 “如意云 头”形状;叶近革质 ,具光泽,叶面深绿色 ,叶背灰绿色 ,广卵状三角形 ,长1 0 0 c m~3 0 0 c m,宽8 0 c m~ 1 8 0 c m,为二回羽状复叶 ;羽片多数 ,互生,具柄,柄长3 c m~4 c m;中下部羽片长 4 0 c m~8 0 c m,宽1 5 c m~3 0 c m;小羽片披针形 ,顶端渐尖 ,具短柄,柄长2 mm~3 mm,羽状深裂几达小羽轴 ;两侧裂片镰刀 形,长1 0 mm~1 4 mm,宽3 mm~4 mm,顶端急尖 ,向上斜出 ,边缘有浅锯齿 ;裂片中脉两面凸出 ,侧脉 两面隆起斜出 ,可育裂片侧脉单一或二叉 ,不育裂片侧脉二叉 ;叶柄、叶轴、羽轴、小羽轴、叶脉疏生短褐 柔毛。金毛狗叶片形态特征参见附录 B中的图B. 1、图B. 2、图B. 4。 7.2.4 孢子囊群 孢子囊群 1对~5对,着生于羽片背面的裂片侧脉顶端 ,囊群长1 1 5 μm~1 6 5 μm,宽7 0 μm~ 1 1 0 μm,囊群盖坚硬 ,矩圆形,棕褐色,两瓣,内瓣较外瓣小 ,成熟时裂开如蚌壳 ,露出孢子囊和隔丝 。金 毛狗孢子囊群形态特征参见附录 B中的图B. 5。 7.2.5 孢子 孢子淡黄色 ,四面体形 ,辐射对称 ,无孢子周壁 ;近极面外观为三角形 ,具裂缝,缝长为孢子半径的 2/3,缝的外侧具 3条呈钝角状的宽厚隆起 ;远极面外观亦为三角形 ,具明显的肋条状隆起的纹饰 ,肋条 3S N/T5 3 8 2—2 0 2 1以正式出版文本为准粗细不匀 ,数目不定 ,排列和连接方式不固定 ;赤道面外