ICS 71.100.70 QB 分类号：Y42 备案号：65907-2018 中华人民共和国轻工行业标准 QB/T5295-2018 美白化妆品中赣花酸的测定 高效液相色谱法 Determination of ellagic acid in whitening cosmetics High performance liquid chromatography 2018-10-22发布 2019-04-01实施 中华人民共和国工业和信息化部 发布 QB/T52952018 前 言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国香料香精化妆品标准化技术委员会（SAC/TC257）归口。 本标准起草单位：上海市质量监督检验技术研究院（国家保洁产品质量监督检验中心）、上海市日 用化学工业研究所（国家香料香精化妆品质量监督检验中心） 本标准主要起草人：顾宇翔、周泽琳、林琳、李勤、成娜、沈敏。 本标准为首次发布。 QB/T5295-2018 美白化妆品中辣花酸的测定高效液相色谱法 1范围 本标准规定了用高效液相色谱法测定化妆品中花酸的含量。 本标准适用于水类、乳液类、膏霜类美白化妆品中棘花酸的测定。 本方法花酸的检出限、定量限分别为4.0mg/kg、15mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 试样经甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液涡旋振荡，超声提取，离心沉淀，分离过滤，固相萃取去除杂质， 采用反相高效液相色谱分离，二极管阵列检测器检测，外标法定量。 4试剂和材料 除非另有规定，所用试剂均为分析纯。水为GB/T6682规定的一级水。 4.1乙腈（色谱纯）。 4.2甲醇。 4.350%甲醇溶液（体积分数）。 4.4磷酸。 4.50.2%磷酸溶液（体积分数）。 4.6甲酸。 4.75%甲酸-甲醇溶液（体积分数）。 4.8氢氧化钠。 4.91%氢氧化钠溶液：按照1g氢氧化钠溶解于100mL水中的比例配制。 4.10花酸：含量不小于95%，中文名称、英文名称、INCI名称、CAS号、分子式、相对分子质量 和结构式参见附录A表A.1。 4.11棘花酸标准储备溶液：准确称取花酸（4.10）10.0mg于100mL的棕色容量瓶中，加入50% 甲醇（4.3）40mL，一边缓慢滴加1%氢氧化钠溶液（4.9）一边摇晃至标样完全溶解，然后用50%甲 醇（4.3）定容至刻度。即得浓度为100μg/mL的标准储备液，该溶液现配现用。 4.12花酸标准工作溶液：分别吸取100μg/mL标准溶液（4.11）0mL、0.25mL、2.50mL、5.00mL、 12.50mL于25mL棕色容量瓶中，再用50%甲醇（4.3）稀释至刻度：连同标准储备溶液（4.11）一起 形成浓度为0μg/mL、1μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL标准系列溶液，该溶液现 配现用。 4.13甘氨酸。 4.140.1mol/LpH9甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液：100mL含0.2mol/L甘氨酸的50%甲醇溶液和17.6mL 含0.2mol/L氢氧化钠的50%甲醇溶液混合，再通过微调甘氨酸和氢氧化钠溶液的加入量使提取液pH 达到9，然后加水稀释至200mL。 4.15石英砂。 1 QB/T5295-2018 5仪器和设备 5.1高效液相色谱仪（二极管阵列检测器） 5.2分析天平：感量为0.1mg。 5.3分析天平：感量为0.001g 5.4棕色容量瓶：25mL和250mL。 5.5具塞离心刻度/试管：25 5.6超声振荡器。 5.7离心机：转速不小于 10000r/min。 5.8滤膜：孔径0.22μm。 5.9 涡旋振荡器。 5.10 阴离子交换固相萃取小柱（MAX或相当者）：6mL 5.11 pH计：精度0.1。 5.12 移液管或移液器：1mL、5mL和10mL。 6测定步骤 6.1样品处理 6.1.1提取 水类化妆品取样品1g（精确至0.001g）于刻度离心管中，加入甘氨酸-氢氧化销 钠缓冲溶液（4.14） 至10mL，涡旋振荡0.5min，水浴超声提取20min，冷却至室温后，10.000r/min离心分离10min，上清 液经0.22μm滤膜过滤。 乳液类、膏霜类化妆品取样品1g（精确至0.001 刻度离心管中，在加入甘氨 酸-氢氧化钠缓冲 溶液（4.14）至10mL，加入少量石英砂（4.15），涡旋振荡0.5mim， 水浴超声提取20min，冷却至室温 后，10000r/min离心分离10min，水层清液经0.22jm滤膜过滤。 6.1.2净化 将阴离子交换固相萃取柱先用5mL甲醇（4.2）和5mL水活化 然后准确移取6.1. 步骤中离心后的 样品上清液5mL加入小柱。上样结束后用5mL甲醇（4.2）洗涤 然后用 5%甲酸-甲醇 溶液（4.7）5mL 洗脱，收集洗脱液用水定容至5mL，经0.22μm滤膜过滤。上述过程的流速均控制在mL/min。 6.2测定条件 高效液相色谱测定参考条件如下： 色谱柱规格：C18 250mm×4.6mm（粒径5μm） 或相当者； 色谱柱， b) 流动相： 乙晴（4.1）+0.2 磷酸（4.5）=18+82（体积比 c) 柱温：30 (P 流动相流量 e) 进样量：10 f) 检测波长：254nm。 6.3标准工作曲线绘制 按6.2色谱条件检测。以标准系列溶液（0μg/mL、1μg/mL10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、 100μg/mL）的浓度为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，进行线性回归得到标准曲线方程。 花酸标准品的高效液相色谱图参见附录B中的图B.1。 6.4测定 按6.2的色谱条件，取6.1.2步骤中滤液进样，得到试样溶液的峰面积，根据保留时间和二极管阵列 的光谱图定性，花酸标准品的DAD光谱图参见附录B中的图B.2。从标准曲线上查得试样溶液中花 2 QB/T5295-2018 酸的含量。试样溶液中花酸的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应将提取液稀释后测 定或增加提取溶液的量重新检测。 6.5平行试验 样品中的花酸含量应根据两次独立的平行试验结果的平均值确定。 所有测定步骤应在24h内完成。 结果计算 7 试样中花酸含量的计算按公式（1）计算： c×V×1000 X=- (1) m×1000 式中： X 试样中花酸的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 从标准曲线中得出的花酸浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； c 4 试样溶液的体积，单位为毫升（mL）； 试样质量，单位为克（g）。 m 计算结果保留3位有效数字。 回收率和精密度 8 在添加浓度为20mg/kg~1000mg/kg的范围内，回收率在83.5%~103.6%，相对标准偏差小于 10 %。 允许差 9 在重复条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%。 3 QB/T5295-2018 附录A (资料性附录） 花酸的基本信息 花酸的中文名称、英文名称、INCI名称、CAS号、分子式、相对分子质量和结构式参见表A.1。 表A.1 赣花酸的中文名称、英文名称、INCI名称、CAS号、分子式、相对分子质量和结构式 中文名称 花酸 英文名称 2,3,7,8-tetrahydroxy benzopyrano 5,4,3-cdebenzopyran-5,10-dione INCI名称 Ellagic acid CAS 号 476-66-4 分子式 Ci4H,Og 相对分子质量 302.28 HO 结构式 HO OH OH 4 QB/T5295-2018 附录B （资料性附录） 花酸标准品高效液相色谱图和DAD光谱图 花酸标准品高效液相色谱图和DAD光谱图参见图B.1和图B.2。 花酸 0.006 0.002- 0.000- 12.00 14.00 000 2.00 00t 00'9 8.00 10.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 时间/min 注：花酸参考保留时间14.0min。 图B.1 干花酸标准品的高相液相色谱图 F090 0.50 0.20 364.4 0.10 0.00 220.00 240.00 260.00 280.00 300.00 320.00 340.00 360.00 380.00 400.00 波长/nm 图B.2 赣花酸标准品的DAD光谱图 5