ICS71.100.40 Y43 OB 中华人民共和国轻工业行业标准 QB/T5347—XXXX 口腔清洁护理用品牙膏中苯甲酸、水杨酸、 山梨酸和苯氧乙醇含量的测定高效液相色 谱法 Oral care and cleansing products Determination of benzoic acid、salicylic acidin、sorbic acid、phenoxyethanol in toothpastes High Performance Liquid Chromatography （报批稿） （本稿完成日期：2018.5） XXXX-XX-XX发布 XXXX-XX-XX实施 发布 中华人民共和国工业和信息化部 QB/T XXXXX—XXXX 前 言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国口腔护理用品标准化技术委员会牙膏分技术委员会（SAC/TC492/SC1）归口。 本标准起草单位：苏州市金茂日用化学品有限公司、上海应用技术大学、浙江方圆检测集团股份有 限公司、广州质量监督检测研究院、福建爱洁丽日化有限公司、黑龙江省轻工科学研究院。 本标准主要起草人：陈健芬、邓维、胡丹、李丹、郭长虹、杨铭、陈万金、杨云、钟锡豪、路崴、 吴智慧、段化珍。 本标准为首次发布。 I QB/TXXXXX—XXXX 口腔清洁护理用品牙膏中苯甲酸、水杨酸、山梨酸和苯氧乙醇含量 的测定方法高效液相色谱法 1范围 本标准规定了高效液相色谱法测定口腔清洁护理用品牙膏中苯甲酸、山梨酸、水杨酸和苯氧乙醇的 方法要点、试剂与标准物质、仪器、分析步骤、结果计算、回收率、标准偏差和允许差 本标准适用于牙膏、口腔清洁护理液、牙粉等口腔护理用品中苯甲酸、山梨酸、水杨酸和苯氧乙醇 限用组分的含量测定。 本标准苯甲酸、山梨酸、水杨酸和苯氧乙醇的方法检出浓度分别为1.5μg/mL、2.5μg/mL、2.5μg/mL 和3.0μg/mL，定量浓度分别为5.0μg/mL、7.5μg/mL、7.5μg/mL和10.0μg/mL；若取样品0.5g，苯甲酸、 山梨酸、水杨酸和苯氧乙醇的检出限分别为0.015%、0.025%、0.025%和0.03%，定量限分别为0.05%、 0.075%、0.075%和0.10%。 2规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。 3方法要点 将样品用甲醇水溶液进行分散，超声波提取其中的苯甲酸、山梨酸、水杨酸和苯氧乙醇成分，样品 过滤后，用C18色谱柱进行色谱分离，通过紫外检测器检测，外标法通过峰面积进行定量计算。 4试剂与标准物质 4.1一般规定 除非另有说明，在分析中仅适用确认为分析纯的试剂和水为GB/T6682规定的一级水。 4.2试剂 标准品、试剂及配制按下面要求进行。 a) 乙腈，HPLC级； b）甲醇，HPLC级； c) 0.008mo1/L醋酸铵溶液：准确称量61.66mg醋酸铵于容量瓶中，加水溶解并定容到100mL； d) 乙酸，HPLC级； e) 苯甲酸、山梨酸、水杨酸和苯氧乙醇标准品：USP/EP级或等同的： 4.3稀释液的制备 1 QB/TXXXXX—XXXX 体积分数为5%的甲醇水溶液，用于稀释标准品。 4.4流动相的准备 水相B和有机相A的配制，按下面要求进行。 a）水相B：0.008mo1/L的醋酸铵水溶液，用乙酸调节pH为4.5（或乙酸的体积分数为0.0733%）； b）有机相A：乙腈，含有与水相中相同体积分数的乙酸，以达到理想的分离效果。 4.5标准溶液的制备 准确称量苯甲酸、山梨酸、水杨酸和苯氧乙醇标准品各0.5g（精确到0.0001g），采用(4.2.2)溶剂溶 解，再转移到50mL容量瓶中，并用(4.3)溶液定容到刻度，作为10mg/mL的标准品的母液。然后将四种 标准品的母液用（4.3）溶液稀释成10,25,50，100,200,500μg/mL6个浓度梯度的混合标准品，备用。 5 仪器与设备 仪器和设备的配置，按下面要求进行。 a) 高效液相色谱仪，配有紫外检测器或光电二极管阵列检测器； b) 色谱柱，C18色谱柱（5um，4.6x250mm）或相当的色谱柱； c) 磁力搅拌器 d) 超声波清洗器 e) 离心机 f) 分析天平：精度0.0001g； g) 有机相滤膜：0.45um，PTFE材质。 6 分析步骤 6.1样品前处理 6.1.1牙膏样品 牙膏试样先挤去大约20mm，再称取0.5g（精确至0.0001g）试样于50mL容量瓶中，用30%甲醇溶液 （VV）溶解并定容至刻度，磁力搅拌至牙膏分散均匀，超声萃取5min后，将试样溶液装入离心管中， 4000～10000r/min转速离心10min。冷却至室温后，上清液经0.45um有机相滤膜过滤，备用。 6.1.2漱口水样品 称取0.5g（精确至0.0001g）漱口水于50mL容量瓶中，用30%甲醇溶液（V/V）溶解并定容至刻度， 经摇匀后用0.45um有机相滤膜过滤，备用。 6.2测定 6.2.1液相色谱条件 按照表1设定液相色谱条件。 表1液相色谱条件 仪器参数 设定值 2 QB/TXXXXXXXXX 紫外检测器波长/nm 225 进样量/μL 10 流量/(mL/min) 1. 0 运行时间/min 35 柱温/℃ 35 苯甲酸、山梨酸、水杨酸和苯氧乙醇标准品用梯度洗脱方式分析，洗脱程序见表2： 表2参考梯度洗脱程序 时间/(min) 流速/(mL/min) 有机相A/(%) 水相B/(%) 0 1 10 06 3 1 10 90 20 1 35 65 25 1 50 50 28 1 50 50 29 1 06 35 1 10 06 6.2.2 标准工作曲线 取1mL按4.5制备的标准溶液于进样瓶中，按照6.2.1的色谱条件及4.4的流动相条件进行测定，以苯 甲酸、山梨酸、水杨酸和苯氧乙醇的浓度为X轴，其相应的峰面积为Y轴，绘制标准工作曲线。 苯甲酸、山梨酸、水杨酸和苯氧乙醇标准溶液的液相色谱图，参照附录中的图A.1。 6.2.3测定 取1mL经6.1处理的牙膏样品或者漱口水样品于进样瓶中，按照6.2.1的色谱条件及4.4的流动相条件 测定苯甲酸、山梨酸、水杨酸和苯氧乙醇的峰面积，由标准工作曲线找出试样溶液中苯甲酸、山梨酸、 水杨酸和苯氧乙醇的浓度。 试样溶液的液相色谱图，参照附录A中的图A.2。 7结果计算 试样中苯甲酸、山梨酸、水杨酸和苯氧乙醇的含量X（%）按式（1）计算： C×V×N×K X= x100 .... () m×1000×1000 式中： X一试样中苯甲酸、山梨酸、水杨酸和苯氧乙醇的含量，单位为(%)； c一由标准曲线查出试样溶液中对应的对照品的浓度，单位为微克每毫升(μug/mL); V一试样定容体积，单位为毫升(mL)； m一试样的质量，单位为克(g)： 3