ICS 71. 100. 40 Y43 备案号： QB 中华人民共和国轻工业行业标准 QB/T 5450—XXXX 口腔清洁护理用品牙膏中连翘苷的测定 高效液相色谱法 Oral care and cleansing products Determination of phillyrin in toothpastes High Performance Liquid Chromatography 点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 （报批稿） （本稿完成日期：） XXXX -XX- XX 发布 XXXX-XX-XX实施 发布 中华人民共和国工业和信息化部 QB/T XXXXX—XXXX 前言 本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。 本标准由中国轻工业联合会提出。 本标准由全国口腔护理用品标准化技术委员会牙膏分技术委员会（SAC/TC492/SC1）归口。 本标准起草单位：广州立白企业集团有限公司、天津蓝天集团股份有限公司、黑龙江省轻工科学 研究院、广州质量监督检测研究院、浙江方圆检测集团股份有限公司。 本标准主要起草人：刘都树、刘佳乐、李少林、张欣、沈兆雷、郭长虹、胡丹。 本标准为首次发布。 QB/TXXXXX—XXXX 口腔清洁护理用品牙膏中连翘苷的测定高效液相色谱法 1范围 本标准规定了高效液相色谱法测定牙膏中连翘苷含量的方法要点、试剂与标准物质、仪器、分析步 骤、结果计算、回收率、标准偏差和充许差。 本标准适用于牙膏中连翘苷含量的测定。 注：本标准连翘苷的检出浓度为0.12ug/mL，定量浓度为0.40μg/mL。若取5.0g牙膏样品，定容至25mL，连翘苷的检 出限为0.60mg/kg，定量限为2.00mg/kg。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法要点 将牙膏用80%甲醇水溶液分散，采用磁力搅拌器和超声波法提取其中的连翘苷成分，离心分离，然 后过滤处理，滤液用带紫外检测器的高效液相色谱仪分析测定，通过峰面积外标法定量计算。 4试剂与标准物质 4.1一般规定 除非另有说明，所用试剂均为分析纯的试剂，水为符合GB/T6682规定的一级水。 4.2乙：色谱纯。 4.3连翘苷对照品：纯度≥97%，CAS号：487-41-2。 4.4无水甲醇：分析纯。 4.5稀释液 80%甲醇水溶液：用无水甲醇（4.4）和水按8:2（V/V）混合均匀，备用。 4.6标准储备液 称取连翘苷对照品（4.3）10mg（精确至0.0001g），置于250mL容量瓶中，加入200mL稀释液（4.5） 溶解，超声处理5min，冷却至室温，并用稀释液（4.5）定容至刻度，混匀后，得到标准连翘苷储备溶 液浓度为40.0μg/mL。 4.7标准工作液 吸取标准储备液（4.6）1.0mL、2.0mL、4.0mL、8.0mL、10.0mL于50mL容量瓶中，用稀释液（4.5） 定容至刻度，混匀后，得到浓度为0.8ug/mL、1.6ug/mL、3.2μg/mL、6.4μg/mL、8.0μg/mL的系列标准工 作溶液。 4.8有机相滤膜：0.45μm。 4.9水相滤膜：0.45μm。 2 QB/T XXXXXXXXX 5仪器 5. 1 高效液相色谱仪：配紫外检测器（或性能相当检测器）。 5. 2 分析天平：精度0.0001g。 磁力搅拌器。 5. 3 5.4 超声波清洗器，工作频率≥35kHz，功率≥200W。 5. 5 高速离心机，≥10000r/min。 5. 6 反相C18色谱柱(250mmx4.6mm，5μm)，或性能相当色谱柱。 6 分析步骤 6.1试样处理 先将牙膏样品挤去大约20mm，准确称取牙膏样品5.0g（精确至0.0001g）于25mL容量瓶中，加入15mL 稀释液（4.5），加入磁子磁力搅拌至牙膏分散均匀，取出磁子（用4.5稀释液清洗干净磁子，将清洗液 合并至容量瓶中），然后用稀释液（4.5）定容至刻度。继续加入磁子用封口膜密封容量瓶口，磁力搅 拌5min，超声处理30min(每间隔10min将样液混合均匀)后，将样液于10000r/min离心分离2min。上清液 经0.45μm有机相滤膜（4.8）过滤，备用。 6.2测定 6.2.1 色谱条件参考 按照表1设定液相色谱条件。 表1液相色谱条件 仪器参数 设定值 进样量/μL 20 流量/(mL/min) 1.0 运行时间/min 30 柱温/℃ 35 紫外检测器波长/nm 277 6. 2. 2 流动相 用梯度洗脱方式分析，洗脱程序见表2。 表2 流动相洗脱条件 时间(min) 流量（mL/min） 乙腈（%) 水(%) 0.00 1.00 25.0 75.0 17.00 1.00 25.0 75.0 18.00 1.00 90.0 10.0 3 QB/TXXXXX—XXXX 表2(续) 时间(min) 流量（mL/min） 乙腈（%) 水（%) 25.00 1.00 90.0 10.0 26.00 1.00 25.0 75.0 30.00 1.00 25.0 75.0 梯度洗脱条件可根据不同实验室目标峰出峰时间作相应调试。乙睛和水分别经0.45um有机相滤膜 （4.8）、0.45um水相滤膜（4.9）过滤，并超声脱气10min。 6.2.3标准工作曲线 准确吸取连翘苷标准工作液（4.7）20uL，注入高效液相色谱仪（5.1），按色谱条件测定，以连翘 苷浓度为x轴，其相应的峰面积为y轴，绘制标准工作曲线。 连翘苷标准溶液的液相色谱图，参见附录A中的图A.1。 6.2.4测定 准确吸取20μL经6.1处理的试样溶液，注入高效液相色谱仪测定连翘苷的峰面积，由标准工作曲线 计算出试样溶液中连翘苷的浓度。 试样溶液的液相色谱图，参照附录A中的图A.2。 6.3平行试验 按以上步骤，同一样品需进行平行试验测定。 7结果计算 样品中连翘苷的含量X（mg/kg）按式（1）计算： ×V××1000×N X= . (1) m×1000 式中： X一试样中连翘苷的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； c一试样溶液中对应的连翘苷的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V一试样定容体积，单位为毫升（mL）； K一对照品中连翘苷的纯度； N一样品稀释倍数； m一试样的质量，单位为克（g）。 8回收率 4 QB/TXXXXX—XXXX 连翘苷在添加浓度1.6ug/mL～8.0μg/mL范围内，本方法平均回收率在93.5%～103.1%之间，相对 标准偏差在0.31%～4.71%之间。 标准偏差 9 本标准方法的相对标准偏差小于5%(n=6)。 10允许差 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算数平均值的10%，取其算数平均值 作为测定结果 5 QB/TXXXXX——XXXX 附录A （资料性附录） 液相色谱参考谱图 5.00 连翘苷-15.673 4.00 吸光度[mAU] 3.00 2.00 1.00 0.00 -1.00 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.012.014.016.0 18.0 20.0 22.024.0 时间[min] 图A.1对照品液相色谱图 5.00 4.00 吸光度[mAU] 3.00 2.00 连翘苷-15.521 1.00 0.00 -1.00 0.0 2.0 4.0 6.0 8.0 10.0 12.0 14.0 16.0 18.0 20.0 22.0 24.0 时间[min] 图A.2 牙膏试样液相色谱图 6