SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4850--2017 出口食品中草铵膦及其代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of glufosinate-ammonium and metabolites residues in export food-- Liquid chromatography-tandem mass spectrometry method 2017-07-21发布 2018-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4850—2017 前言 本标准按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国泉州出人境检验检疫局综合技术服务中心、中华人民共和国福建 出人境检验检疫局、中华人民共和国江西出入境检验检疫局、福建省高建发茶叶有限公司、泉州市洛江 泉岩茶业有限公司、福建农林大学。 木标准主要起草人：黄伙水、韦航、翁城武、邹强、林永辉、刘正才、林春滢、荣杰峰、李亦军、孙威江、 杨方。 1 SN/T4850-2017 出口食品中草铵麟及其代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了出口食品中草铵麟及其代谢物N-乙酰基草铵膦、3-（甲基麟基)丙酸残留量的液相色 谱-质谱/质谱检测方法。 本标准适用于茶叶、稻谷、大豆、玉米、柑橘、苹果、桃、葡萄、香蕉、木瓜、番茄、胡萝卜、马铃薯、洋葱、 开心果、菜籽油中草铵膦及其代谢物N-乙酰基草铵麟、3-（甲基麟基)丙酸残留量的检测和确证。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 样品中的草铵麟及其代谢物N-乙酰基草铵麟、3-（甲基麟基)内酸用水提取，经二氯甲烷和C18固相 萃取小柱净化，用液相色谱-质谱/质谱法，电喷雾负离子模式电离（ESI-），基质外标法定量。 4试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为二次超纯水。 4.1乙腈：色谱纯。 4.2无水乙酸铵：色谱纯。 4.3 氨水：25%，色谱纯。 4.4二氯甲烷，色谱纯。 4.5乙酸铵水溶液（1mmol/L，pH=11）：准确称取0.07708g的无水乙酸铵溶解于适量水中，用氨水 调节pH=11,用水定容至1000mL。 4.6草铵麟标准物质（Glufosinateammonium，GLU，CAS号：77182-82-2，分子式；CsHisN2O,P）：纯度 ≥97.5%。 度≥98.5%。 4.83-（甲基麟基）丙酸标准物质（3-methylphosphinicopropionicacid，MPP，CAS号：15090-23-0，分子 式：CH，0,P)：纯度≥98.0%。 4.9草铵麟、N-乙酰基草铵麟（NAG)、3-（甲基麟基）丙酸（MPP)标准储备溶液（1.0mg/mL）：精确称 取50mg的草铵麟和NAG、MPP标准品，用水溶解并定容至50mL，存放于聚乙烯或聚丙烯塑料瓶中。 低于5℃保存。 4.10草铵麟、N-乙酰基草铵膦(NAG)、3-（甲基麟基）丙酸（MPP)标准中间溶液（1.0μg/mL）：取一定 1 SN/T4850—2017 量的草铵麟标准储备溶液（4.9），用水稀释成1.0μg/mL，存放于聚乙烯或聚丙烯塑料瓶中，低于5℃ 保存。 4.11Cis固相萃取柱：500mg，6mL柱。使用前用5mL甲醇、5mL水活化。 4.12 2滤膜：0.22um，水相。 仪器和设备 5 5.1 液相色谱串联质谱仪：配有电喷雾（ESI)离子源。 5.2 粉碎机。 5.3 组织捣碎机。 5.4 涡旋振荡器。 5.5 高速离心机，转速不低于12000r/min。 5.6 固相萃取装置。 5.7 超声清洗器。 5.8 分析天平：感量0.1mg和0.01g。 5.9 pH计。 5.10 ：移液器：1mL，5mL。 5.11 螺旋盖聚丙烯离心管：50mL。 5.12 圆孔筛：2.0mm。 6 试样制备与保存 6.1 试样制备 6.1.1茶叶和粮谷类 取有代表性样品约200g，用粉碎机粉碎并通过2.0mm圆孔筛，混匀，装人洁净容器内，密封并 标识。 6.1.2水果蔬菜类 取有代表性样品500g，将可食部分切碎后（不可水洗），用组织捣碎机将样品加工成浆状，混匀，装 人洁净容器内，密封并标识。 6.1.3 植物油类 植物油类液体样品混匀备用。 6.2试样保存 水果、蔬菜类试样在一18℃保存。茶叶、谷物类试样、植物油类液体样品常温保存。 7 测定步骤 7.1 待测样品溶液的制备 7.1.1 样品提取 称取均质好的试样茶叶1g（精确至0.01g）植物油、谷物、水果蔬菜5g（精确至0.01g），置于 2 SN/T4850-2017 50mL具塞聚丙烯离心管中，移液器准确加人10mL水，10mL二氯甲烷，充分涡旋振荡10min，超声 提取10min，以12000r/min离心5min，收集上清液，待净化。 2样品净化 7.1.2 取样品提取液5mL加人已经活化了的Cls固相萃取柱中，弃去前3mL流出液，收集后2mL流出 液，过0.22μm水相滤膜，滤液供液相色谱-质谱/质谱检测。 7.2 基质混合标准工作溶液的制备 称取5个均质好的阴性样品茶叶1g（精确至0.01g），植物油、谷物、水果蔬莱5g（精确至0.01g）， 分别置于50mL具塞聚丙烯离心管中，加入适量混合标准溶液，其余按照7.1步骤操作完成，制成草铵 膦、N-乙酰基草铵麟、3-（甲基麟基）丙酸含量均为0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、 1.0μg/mL的基质标准溶液。 7.3测定 7.3.1 液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下： a) 色谱柱：NH2P-502D柱，150mm×2.0mm，粒度5μm或相当者； b) 柱温：35℃； c) 流速：0.25mL/min； (P 进样量：5uL； 流动相：流动相A：1mmol/L乙酸铵水溶液（pH=11)（4.5），流动相B：乙睛。推荐梯度洗脱 e) 程序见表1，不同仪器洗脱条件可能不同。 表1 流动相梯度洗脱程序表 步骤 梯度时间/min 流动相A/% 流动相B(乙睛)/% 1 0 25 75 2 2 25 75 3 2.01 80 20 4 6 80 20 5 6.01 25 75 6 10 25 75 7.3.2 质谱/质谱参考条件 质谱/质谱参考条件如下： a) 离子源：电喷雾离子源（ESI)： b) 扫描方式：负离子模式扫描； 监测模式：多反应监测（MRM)； c) (P 雾化气、干燥气、碰撞气均为高纯氮气；使用前应调节气体流量以使质谱灵敏度达到检测要 求，详细条件参见附录A； 喷雾电压、雾化气压力、干燥气温度、干燥气流速、源内碎裂电压、碰撞能量应优化至最优灵敏 度，参考条件和定性离子对、定量离子参见附录A。 3 SN/T4850—2017 7.3.3 3定量测定 按照确定的液相色谱-质谱/质谱条件测定样品和基质标准工作溶液，响应值应在仪器检测的线性 范围内，以色谱峰面积外标法定量。在上述色谱条件下草铵麟及其代谢物N-乙酰基草铵麟、3-（甲基麟 基）丙酸的参考保留时间分别为6.06.min、6.18min和6.23min，标准溶液的多反应监测（MRM)色谱图 参见附录B中图B.1。 7.3.4定性测定 在相同实验条件下，试样中待测物质的保留时间与标准工作溶液的保留时间偏差在土2.5%之内； 且在扣除背景后的样液图谱中，所选择的离子对均出现，各定性离子对的相对丰度与浓度接近的标准溶 液谱图中离子的相对丰度相比，其偏差不超过表2规定的范围，则可确定为样品中存在对应的被测物。 表2定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/% >50 >20~50 >10~20 ≤10 允许的相对偏差/% ±20 ± 25 ±30 ±50 7.4空白试验 除不加试样外，均按上述操作步骤进行。 7.5结果计算和表述 用色谱数据处理软件或按式（1)计算样品中草铵麟及代谢物残留量。计算结果需扣除空白值。 CXV X= ..(1 ) m×1000 式中： X一样品中被测组分的残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； -从基质标准工作曲线上得到的上机溶液中被测组分的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL)； V 样品提取溶液体积，单位为毫升（mL）； m - -试样称取质量，单位为克（g）。 8测定低限和回收率 8.1测定低限 本方法草铵麟及具代谢物N-乙酰基草铵麟、3-(甲基麟基)丙酸的测定低限：茶叶为0.1mg/kg，稻谷、 大豆、玉米、柑橘、苹果、桃、葡萄、香蕉、木瓜、番茄、胡萝卜、马铃薯、洋葱、开心果、菜籽油为0.05mg/kg。 8.2回收率 本方法样品的添加浓度及回收率试验数据参见附录C中表C.1。 4 SN/T4850-2017 附录A （资料性附录） 质谱参考参数1) 质谱参考参数如下： 干燥气温度：300℃； a) b) 干燥气流速：10L/min； c) 雾化气压力：0.31MPa(45psi)； d) 电喷雾电压：-4500V； e) 鞘流气温度：350℃； 鞘流气流速：12L/min； f) g) 喷嘴电压：-1000V； h) 定性离子对、定量离子对、源内碎裂电压、碰撞