ICS 65.150 CCS B 50 12 天津市 地方 标准 DB12/T 1359—2024 水产养殖用非规范药品中喹诺酮类、 磺胺类、 酰胺醇类抗生素残留的测定 液相色谱 -质 谱/质谱法 Determination of quinolones, sulfonamides and amidol antibiotic residues in non-standard drugs for aquaculture by liquid chromatography -tandem mass spectrometry 2024-11-27发布 2025-01-01实施 天津市市场监督管理委员会 发布 DB12/T 1359 —2024 1 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由天津市农业农村委提出 并归口。 本文件起草单位： 天津市农业生态环境监测与农产品质量检测中心 、山东省科学院海洋仪器仪表研 究所。 本文件主要起草人：陈永 平、成振华、王辉、韩现芹 、时文博、 史艳艳、高丽娜、王愿宁、高丽、 李灏、曹建新、易伟 、苏梦寒。 DB12/T 1359 —2024 2 水产养殖用非规范药品中 喹诺酮类 、磺胺类、酰胺醇类抗生素残留 的测定 液相色谱 -质谱/质谱法 1 范围 本文件规定了水产养殖用非规范药品中 喹诺酮类 、磺胺类、酰胺醇类抗生素留量测定的 原理、试剂 和材料、仪器、分析步骤、结果计算、正确度与 精密度。 本文件适用于水产养殖用非规范药品中诺氟沙星、环丙沙星、 恩诺沙星、 氧氟沙星、培氟沙星、洛 美沙星、磺胺噻唑、磺胺嘧啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺多辛、磺胺喹噁 啉、磺胺异噁唑、氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考共 17种抗生素残留量检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 非规范药品 non-standard drugs 水产养殖过程中用来净化水质、改良地质、除杂等的非药品，包括水质改良剂、底质改良剂、微生 态制剂、除杂剂及促生长剂等。 4 原理 非规范药品中 喹诺酮类 、磺胺类、酰胺醇类抗生素 ，先加水溶解或稀释，再用酸化乙腈 萃取，经固 相萃取柱净化 ，液相色谱 -质谱/质谱法检测，内标法定量 。 5 试剂材料 除非另有说明， 水为GB/T 6682规定的一级水。 5.1 试剂 5.1.1 甲醇（CH3OH，CAS号：67-56-1）：色谱纯。 5.1.2 乙腈（CH3CN，CAS号：75-05-8）：色谱纯。 5.1.3 甲酸（HCOOH，CAS号：64-18-6）：色谱纯。 DB12/T 1359 —2024 3 5.1.4 二氯甲烷（ CH2Cl2，CAS号：75-09-2）：分析纯。 5.1.5 乙酸乙酯（ C4H8O2，CAS号：141-78-6）：分析纯。 5.1.6 氯化钠（ NaCl，CAS号：7647-14-5）：分析纯。 5.1.7 乙酸铵（CH3COONH 4，CAS号：631-61-8）：分析纯。 5.2 溶液配制 5.2.1 乙酸铵（2.0 mmoL/L ）-甲酸溶液（ 0.1%）：称取0.077g无水乙酸铵， 用0.1%甲酸水溶液溶解 并稀释至500 mL。 5.2.2 甲醇-水溶液（ 15+85，体积比）：量取 甲醇15mL加入85 mL水中，混匀。 5.2.3 甲酸-乙腈（0.1+99.9，体积比）：量取 甲酸0.5 mL，加乙腈稀释至 500 mL，混匀。 5.3 标准品 17种抗生素类标准品 应符合附录A，纯度≥95%。 5.4 标准溶液配制 5.4.1 标准贮备液 100 µg/mL。取诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、 磺胺嘧啶、磺 胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲基异噁唑、磺胺多辛、磺胺喹恶啉、磺胺异噁唑、 氯 霉素、甲砜霉素、氟苯尼考各适量（ 相当于各活性成分 10 mg），精密称定 ，于各自容量瓶中， 喹诺酮 类需加0.2 mL甲酸，均 用甲醇溶解后并稀释定容至 100 mL，配制成浓度为 100 µg/mL的标准储备液。 避 光-18 ℃以下保存，有效期 1年。 5.4.2 氘代同位素内标标准储备液 500 µg/mL。取氘代磺胺邻二甲氧嘧啶、氘代磺胺间二甲氧嘧啶、氘代诺氟沙星、氘代环丙沙星、 氘代恩诺沙星、氘代氯霉素内标各适量（ 相当于各活性成分 5 mg），精密称定 ，于各自容量瓶中，用甲 醇溶解稀释定容至 10 mL。配制成浓度为 500 µg/mL同位素内标标准储备液，避光 -18 ℃以下保存，有 效期1年。 5.4.3 喹诺酮类 与磺胺类混合标准工作液 准确吸取各 喹诺酮类 和磺胺类标准储备液（ 5.4.1）适量，用甲醇稀释制成 1.0 µg/mL混合标准工 作液，避光 4 ℃冷藏保存，有效期 1个月。 5.4.4 酰胺醇类混合标准工作液 准确吸取各酰胺醇类标准储备液（ 5.4.1）适量，用甲醇稀释制成氯霉素、氟苯尼考 0.1 µg/mL， 甲砜霉素 0.5µg/mL混合标准工作液，避光 4 ℃冷藏保存，有效期 1个月。 5.4.5 磺胺类与 喹诺酮类 混合内标标准工作液： 准确吸取各磺胺类和 喹诺酮类 内标标准储备液（ 5.4.2）适量，用甲醇稀释 制成 10.0 µg/mL混合 标准工作液，避光 4 ℃冷藏保存，有效期 1个月。 5.4.6 酰胺醇类混合内标标准工作液 准确吸取各酰胺醇类内标标准储备液（ 5.4.2）适量，用甲醇稀释制成 1.0 µg/mL混合内标标准工 作液，避光 4 ℃冷藏保存，有效期 1个月。 DB12/T 1359 —2024 4 5.5 材料 通过式固相萃取柱， 200 mg/6 mL，或性能相当者。 6 仪器 6.1 液相色谱 -串联质谱仪：配有电喷雾（ ESI）离子源。 6.2 分析天平：感量 0.01g、0.01 mg。 6.3 高速离心机：转速大于 10 000 r/min 。 6.4 超声波震荡仪。 6.5 涡旋振荡器。 6.6 氮吹仪。 6.7 粉碎装置：如杵或研钵 。 6.8 筛：筛孔为 1 mm金属网。 7 试样制备 7.1 试样制备 7.1.1 固态非规范药品 按GB/T 20195的规定制备试样，至少 100 g，粉碎使其全部通过 1.0 mm孔径的分析筛， 装入密闭容 器中备用。 7.1.2 液态非规范药品 将样液过 0.45 µm 滤膜，收集样液体积 20 mL，于密闭容器中保存。 7.2 试样保存 将试样于 4℃及以下条件下保存。 8 分析步骤 8.1 样品处理 称取非规范药品 0.1 g（准确至 0.0 1g)，用水稀释至 100 mL，涡旋1min，超声波超声 5min，取5 mL 置于50 mL离心管中，加入 50 μL混合内标标准使用液（ 5.4.5、5.4.6），加入 2.0 g NaCl ，再加入 10 mL 酸化乙腈，涡旋 1 min，超声波超声 5 min，8000 r/min 离心3 min，取上清液过固相萃取柱于 20 mL玻璃 离心管中，再加入 5 mL酸化乙腈，重复上述操作， 2 mL乙腈淋洗固相萃取柱，合并收集液于 40 ℃条件 下，氮气吹至近干，残留物加入甲醇溶液 （5.2.2）1 mL，充分涡旋混匀，转移至 1.5 mL离心管中， 20 000 r/min离心5 min，取上清液过 0.2 μm有机相滤膜后，取 100 µL滤液，用甲醇溶液 （5.2.2）定容至10.0 mL，上机测定。 注： 对在本实验条件下测定浓度过高或过低时，应适当增加或降 低稀释倍数。 8.2 测定 8.2.1 磺胺类与 喹诺酮类 DB12/T 1359 —2024 5 8.2.1.1 色谱条件 8.2.1.1.1 色谱柱： C18色谱柱，1.7 μm，100 mm×2.1 mm（内径），或性能相当。 8.2.1.1.2 柱温：35 ℃。 8.2.1.1.3 流速：0.25 mL/min。 8.2.1.1.4 进样体积： 5.0 μL。 8.2.1.1.5 流动相：甲醇 -（乙酸铵 -甲酸溶液， 5.2.1）；洗脱程序见表 1。 表1 流动相梯度洗脱程序 时间（min） VA/% VB/% 1 10 90 6 40 60 6.1 90 10 8 90 10 8.1 10 90 10 10 90 8.2.1.2 质谱条件 8.2.1.2.1 离子化模式：电喷雾离子源（ ESI+），多反应监测。 8.2.1.2.2 喷雾电压： 5500 v。 8.2.1.2.3 气帘气压力：0.24 MPa