ICS 65.020.30 CCS B 44 44 广东省 地方 标准 DB44/T 2681—2025 日化用品致畸毒性斑马鱼评价指南 Guidelines for the evaluation of teratogenic toxicity of daily chemical products using zebrafish 2025 - 06 - 11发布 2025 - 09 - 11实施 广东省市场监督管理局 发布 DB44/T 2681 —2025 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 原理 ................................ ................................ ............... 2 5 试验条件 ................................ ................................ ........... 2 6 试验方法 ................................ ................................ ........... 2 7 受试物含量的测定 ................................ ................................ ... 3 8 发育情况检查 ................................ ................................ ....... 3 9 数据处理 ................................ ................................ ........... 3 10 致畸危害评估 ................................ ................................ ...... 3 11 结果解释 ................................ ................................ .......... 4 附录A（资料性） 测试流程 ................................ ............................. 5 附录B（资料性） 各检查指标参考特征 ................................ ................... 6 附录C（资料性） 致畸危害指数 ................................ ......................... 7 参考文献 ................................ ................................ .............. 8 DB44/T 2681 —2025 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由广东省科学技术厅提出并组织实施。 本文件由广东省实验动物标准化技术委员会（ GD/TC93）归口。 本文件起草单位：广东省生物技术研究院（广东省实验动物监测中心）、水中银（国际）生物科技 有限公司、广州质量监督检测研究院。 本文件主要起草人：蔡磊、苗宗余、陈雪平、刘香梅、叶惠欣、吴美慧、刘书华、李培宁、彭镜珲、 张钰。 DB44/T 2681 —2025 1 日化用品致畸毒性斑马鱼评价指南 1 范围 本文件提出了日化用品致畸毒性斑马鱼评价主要试验条件、试验方法、发育情况检查、数据处理和 致畸危害评估的建议，并给出了相关信息。 本文件适用于日化用品产品及其原料的致畸毒性评价。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 39649 实验动物 实验鱼质量控制 HJ 1069 水质 急性毒性的测定 斑马鱼卵法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 斑马鱼 danio rerio 斑马鱼是一种原产于南亚地区的小型淡水鱼，具有繁殖能力强、胚胎透明和易于饲养等特点。 斑马鱼胚胎 zebrafish embryo 处在依靠卵黄提供能量发育阶段的斑马鱼。 斑马鱼仔鱼 zebrafish larvae 从卵膜内孵化出到卵黄吸收完毕且具奇鳍褶的斑马鱼。 致畸毒性 teratogenicity 受试物在器官发育期间引起胚胎永久性结构异常的毒性。 无可观察效应浓度 no observed effect concentration, NOEC 与对照组相比，对斑马鱼不产生显著效应的最高受试物浓度。 半数致死浓度 half lethal concentration, LC50 在一定观察期内，造成 50%的斑马鱼死亡的受试物浓度。 半数致畸效应浓度 half teratogenesis effective concentration, EC50 在一定观察期内，引起 50%斑马鱼产生致畸效应的受试物浓度。 DB44/T 2681 —2025 2 4 原理 通过将斑马鱼胚胎暴露于受试物水溶液中，在一定时间后观察斑马鱼胚胎各组织器官发育情况， 包 括死亡、畸形等指标，评价受试物是否具有致畸毒性。 5 试验条件 主要设备 5.1.1 通常宜配备斑马鱼养殖设备、繁殖配对器具、胚胎孵化用光照培养箱、带成像功能的显微镜等 主要设备；养殖容器和试验用器宜由对生物无毒害的材质制备，如玻璃、聚苯乙烯等。 5.1.2 根据试验需要，建议配备适宜的辅助设备，包括恒温培养箱、水质检测设备等。 主要试剂 5.2.1 斑马鱼养殖及试验宜使用标准稀释水，宜按照 HJ 1069 中规定的斑马鱼养殖及试验用标准稀释 水的配置方法执行。 5.2.2 选择合适物质作为参比毒物，宜按照 HJ 1069中规定的参比毒物的种类及浓度设置方法执行。 5.2.3 除非另有说明，试验所用试剂宜为符合国家标准的分析纯试剂。 6 试验方法 受试物制备 6.1.1 水溶性受试物 宜使用标准稀释水将受试物配制成测试溶液。 6.1.2 非水溶性受试物 可选常用助溶剂如甲醇或二甲基亚砜等，根据受试物特点及已有关于助溶剂对斑马鱼毒性的研究 数据，综合考虑选择适宜的助溶剂及助溶浓度。 实验生物准备 6.2.1 宜选择种质、遗传、病原及环境质量可控的斑马鱼作为实验生物，标准 GB/T 39649 给出了相应 的要求，可参照执行。 6.2.2 获得高质量的斑马鱼胚胎是保障试验结果可靠的关键，标准 HJ 1069 给出了斑马鱼胚胎获取的 具体要求，可参照执行。 6.2.3 通常宜选取受精后 6 h～8 h健康的斑马鱼胚胎作为实验生物。 暴露试验 6.3.1 预试验 当受试物毒性难以预估时，建议进行预试验。通常以较高稀释倍数设置连续的几个受试物浓度组 （如以5倍或10倍为梯度进行设置），确定 100%死亡或100%致畸至无死亡或无致畸的浓度范围。如用到 助溶剂，则设置相应的助溶剂对照组。附录 A给出了测试流程，可参照使用。 DB44/T 2681 —2025 3 6.3.2 正式试验 6.3.2.1 根据预试验或已有的相关毒性数据，确定受试物的测试浓度范围。测试浓度宜按照几何级数 进行分布，通常设置不少于 5个连续的浓度组，浓度间隔系数不大于 3.2。 6.3.2.2 每个测试组需要设置生物学重复，通常不少于 3个平行组，每个平行组不少于 10粒胚胎。试 验开始时准确记录胚胎所处的发育时期。 6.3.2.3 推荐采用微孔板作为测试容器，每孔放置 1粒胚胎，建议每孔测试溶液体积不小于 0.2 mL。 6.3.2.4 尽可能减少对胚胎的干扰，分放胚胎时总操作时长宜控制在 60 m