ICS 65. 020 CCS B 66 DB53 云南省地 标准 DB53/T 1413—2025 灵芝固体菌种生产技术规程 2025－06－07发布 2025－09－07实施 云南省市场监督管理局 发布 DB53/T 1413—2025 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由云南省食用菌标准化技术委员会（YNTC15）提出并归口。 本文件起草单位：云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所、滇西科技师范学院、云南云之凰 健康科技有限公司、中健国林（云南）实业有限公司、云南宝之灵生物科技有限公司、武定插甸多福宽 核桃种植专业合作社。 本文件主要起草人：李娥贤、李树红、何俊、吴晓、穆丽丹、罗红梅、王怡璇、蒲晓辉、张韵璇、 叶洋、方晓军。 1 DB53/T 1413—2025 灵芝固体菌种生产技术规程 1范围 本文件规定了灵芝固体菌种生产要求、母种生产、原种、栽培种和栽培袋生产，描述了档案记录及 留样等内容。 本文件适用于赤芝（Ganodermalingzhi）、紫芝（Ganodermasinense）、白肉灵芝（Ganoderma leucocontextum）、亮盖灵芝（Ganodermalucidum）等的母种、原种、栽培种和栽培袋生产。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 3095环境空气质量标准 GB 5749生活饮用水卫生标准 GB/T 8321(所有部分）农药合理使用准则 GB/T 12728食用菌术语 NY/T 528食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1276农药安全使用规范 总则 3术语和定义 GB/T 12728界定的术语和定义适用于本文件。 4固体菌种生产要求 4.1周边环境 生产区应选择交通便利，水电供应稳定，地势高且较平坦，无积水，同时远离工业区、禽畜养殖场、 垃圾（粪便）场等污染源。空气质量达到GB3095中二类区的相关要求，生产用水达到GB5749的要求 4.2设施设备 4.2.1合理划分配料室、搅拌室、装袋（瓶）室、灭菌室、冷却室、接种室、培养室等设施。 4.2.2配套粉碎机、电子秤、搅拌机、装袋（瓶）机、高压灭菌锅或常压灭菌锅、离子净化器、超净 工作台或接种箱、恒温培养箱、培养架、显微镜等设备。 4.3菌种容器 4.3.1母种容器 使用玻璃试管或培养皿。试管规格18 mm×180 mm或者20 mmx×200 mm；选用直径7 cm～9 cm玻璃培 养皿或一次性无菌培养皿。 1 DB53/T 1413—2025 4.3.2原种容器 采用窄口玻璃瓶或耐高温塑料瓶，或（12～14）cm×（25～27）cm（厚度不低于0.05cm）的聚丙 烯塑料袋。 4.3.3栽培种容器 采用（13～15）cmx（25～28）cm（厚度不低于0.05cm）的聚丙烯塑料袋 4.3.4栽培袋容器 采用（16～18）cmx（35～37）cm（厚度不低于0.05cm）的聚丙烯塑料袋。 5母种生产 管部 5.1培养基制作 新鲜无病去皮马铃薯200g切片， 加水1000 m煮沸30 min， 滤液中加入琼脂粉20 g、葡萄糖20 g、 蛋白陈2 g、酵母粉2 g、硫酸镁0.2 g、磷酸 氢钾0.2 g, 定容至1 000 mL，pH值自然。 5.2分装及灭菌 地 5.2.1平板培养基 5.2.1.1将刚配制好的培养基装入300mL～500 ml三角瓶至刻度的 2/3 处, 用带滤膜的封口膜封口后 灭菌。培养皿用报纸或牛皮纸包好，同时放入高压灭菌锅， 121 ℃～126 ℃灭菌 25 min。 5.2.1.2灭菌完毕后培养基降温至 65℃ 75℃时，将三角瓶内培养基摇匀后倒入无菌培养血高度的 1/2处，盖好上盖，自然降温凝固后制成平板培养 5.2.2试管培养基 5.2.2. 1 分装培养基至试管 1/3 外， 用棉塞或硅胶塞封闭试管口，每5支试管为1捆，牛皮纸包好， 放入高压灭菌锅灭菌，在121℃ 5.2.2.2灭菌完成后待培养基降温至 65 ℃ ℃时取出试管，在空气 气清洁的室内摆斜面，斜面长度 5.3无菌检测 抽取3%～5%的培养基，在28℃下培养48h， 检查有无微生物菌落，无菌落的为灭菌合格。 5.4接种 5.4.1在超净工作台内接种，接种前用紫外灭菌灯照射 30 min 后打开风机20 min，之后用75%酒精进 行消毒。 5.4.2将长宽 3mm～5 mm 的菌块，接种在培养皿或试管的中部。培养皿需用石腊封口膜密封，试管用 牛皮纸包扎试管口。 5.5培养 置于22 ℃～26 ℃培养箱中恒温避光培养。培养7 d～15 d长满。未活、污染和生长不良的均为不 合格菌种，应及时挑出并使用高压灭菌锅灭菌处理。 2 DB53/T 1413—2025 5.6 ，母种检查 母种检查内容见表1。 表 母种检查 项目 检查内容 容器 完整、无破损、干净、有标签 棉塞或硅胶塞 洁净，松紧适度，能满足透气和滤菌要求 菌丝生长量 长满斜面或平板 培养基及 色： 菌丝整齐浓密、丝状或绒毛状，洁白 郎 菌种外观 菌落边缘 均匀、整齐 养基贴壁、不干缩、 无黄水，颜色均匀、无暗斑、无明显 面背面外双 色素 地方标准 5.7母种贮存 置于1℃～4℃冰箱中 光贮存， 6 原种、栽培种、栽培袋生 6.1培养料制作 不同灵芝原种、栽培种、 栽培袋培养料 料配方及制作见附 6. 2 •装袋 采用装袋机或人工进行装 原种及栽培种装湿料量0.5kg/袋～0.6kg/袋，栽培袋装湿料量1.1 kg/袋～1.3kg/袋，松紧适度， 工装袋需盖好盖子。裴袋后在12h内尽快完成灭菌。 南 6.3灭菌 6. 3. 1 高压灭菌 温度121℃～126℃，原种和栽培种保持2 h，栽培袋保持3 h。 6. 3. 2 常压灭菌 4 h内快速升温至90℃以上，原种和栽培种保持10 h～14 h，栽培袋保持12 h～18 h。 6.3.3质量检查 按照NY/T 528的方法执行。 6.4接种 6.4.1在接种室或者接种箱内进行。料袋搬入接种室或者接种箱后，连同接种工具进行二次消毒。待 料袋中心温度冷却至28℃以下接种。 3