ICS65.020.20 CCSB61 54 西藏自治区地方标准 DB54/T0489.3—XXXX 巨柏无性繁殖技术规程 第3部分：组培 2025-07-28发布 2025-08-28实施 西藏自治区市场监督管理局  发布DB54/T0489.3—XXXX I目次 前言..................................................................................II 引言.................................................................................III 1范围................................................................................1 2规范性引用文件......................................................................1 3术语和定义..........................................................................1 4场地要求............................................................................2 5培养基配制..........................................................................2 6组织培养............................................................................3 7炼苗移栽............................................................................4 8出圃................................................................................4 9建档................................................................................5 附录A（资料性）MS培养基配制.........................................................6 附录B（规范性）瓶苗质量分级表........................................................7 附录C（规范性）病虫害防治表..........................................................8 附录D（规范性）出圃苗质量分级表......................................................9 参考文献..............................................................................10DB54/T0489.3—XXXX II前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由西藏自治区林业和草原标准化技术委员会提出并归口。 本文件起草单位：中国电建集团成都勘测设计研究院有限公司、国家林业和草原局中南调查规划院、 四川省林业科学研究院、拉萨市林业和草原局林业勘察设计所 本文件主要起草人：马建华、栾丽、姜跃良、左有璐、刘盛赟、胡雪柳、程海燕、唐宇轩、何建良、 刘洪强、李丕军、汪诗平DB54/T0489.3—XXXX III引言 巨柏（学名：CupressusgiganteaChengetL.K.Fu）是国家一级保护野生植物，已被列入《中 国植物红皮书》《中国生物多样性红色名录-高等植物卷》《世界自然保护联盟濒危物种红色名录》（IUCN） ——易危（VU）种，巨柏同时也是雅江特有种。根据巨柏年龄情况分析研究，现有雅江分布的巨柏多为 100年以上的古树。开展巨柏无性繁殖技术研究并形成技术标准，能较好的保留母本遗传资源。同时， 巨柏是西藏自治区较好的造林树种和绿化树种，开展相关研究并建立技术标准能够为巨柏的资源开发利 用提供技术支撑。本文件拟由三个部分组成。 ——第1部分：嫁接。目的在于确定巨柏嫁接繁殖的相关技术操作规程。 ——第2部分：扦插。目的在于确定巨柏扦插繁殖的相关技术操作规程。 ——第3部分：组培。目的在于确定巨柏组培繁殖的相关技术操作规程。 巨柏的嫁接、扦插、组培三种方式同为无性繁殖技术方式，在巨柏的人工繁殖上根据材料来源、季 节、成本、成品苗要求等可以选择不同的繁殖方式。三种方式即为互补又协同，共同服务于巨柏的资源 保护和种苗的产业化生产。DB54/T0489.3—XXXX 1巨柏无性繁殖技术规程 第3部分：组培 1范围 本文件规定了巨柏组培快繁的场地要求、培养基配制、组织培养、炼苗移栽及出圃、建档等。 本文件适用于西藏自治区巨柏组培快繁育苗。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB5749生活饮用水卫生标准 GB/T6001育苗技术规程 LY/T1882林木组织培养育苗技术规程 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 巨柏 柏科柏木属乔木，高30m～45m，胸径1m～3m.，稀达6m。产于西藏雅鲁藏布江流域的郎县、米林等 地，甲格以西分布较多。 [来源：中国植物志,有修改] 3.2 外植体 用于植物组织培养的离体植物器官、组织、细胞以及原生质体。 [来源：LY/T1882] 3.3 培养基 根据植物营养原理和植物组织培养的要求人工配制的营养基质。 [来源：LY/T1882] 3.4 接种 在无菌条件下将经体表灭菌后的外植体置入培养基的过程。 [来源：LY/T1882] 3.5 继代培养 外植体经初代培养后，再次以及以后各次接种于新培养基继续培养的过程。DB54/T0489.3—XXXX 24场地要求 4.1组培室 4.1.1操作间 操作间主要进行培养基和培养母液的配制及培养基灭菌工作。可细分为储藏室，称量室，操作室， 灭菌室，培养基储藏室。配制培养基所需化学试剂为附录A所列及氢氧化钠（Sodiumhydroxide，NaOH）， 盐酸（Hydrochloricacid，HCl），蔗糖，琼脂等化学试剂。 4.1.2缓冲间 是从外部环境到内部洁净环境的过度空间。包括风淋室和操作人员的清洗、换衣设备。所需的仪器 设备为风淋室。 4.1.3接种室 是开展巨柏组培苗灭菌、接种和继代工作的空间。要求为无菌洁净空间。 4.1.4培养间 是巨柏组培苗进行培养生长的空间。要求能控温控湿，并控制光培养和暗培养的时间，为无菌洁净 空间。 4.2炼苗区 是巨柏组培瓶苗材料移栽前的过度空间。搭建荫棚，有遮荫喷水设施。保持温度37℃以下，湿度 50%以上。 4.3苗圃 栽植床排水良好，栽植床采用深沟高畦，畦宽1.6m～2.0m，沟深20cm～30cm，宽20cm，沟与 沟之间相连，利于排水。应有定时喷灌设施，排水设施，降温设施，增温设施，补光设施。大田苗床须 搭建小拱棚，保持温度25℃～30℃，湿度85%以上。苗圃的建设按照GB/T6001的相关标准执行。 5培养基配制 5.1培养容器和接种器械的清洗 使用洗涤剂浸泡30min后，对培养容器和接种器械进行刷洗，采用清水清洗3遍后干燥备用。清水 标准参照GB5749生活饮用水卫生标准。 5.2培养基配制 5.2.1培养基母液的配制 培养基采用Murashige和Skoog（MurashigandSkoogMedium，MS）基本培养基，所需各元素见附 录A。配制方法按照LY/T1882的相关标准执行。 5.2.2激素母液配制DB54/T0489.3—XXXX 3激素采用萘乙酸（1-Naphthaleneaceticacid，NAA）和吲哚-3-乙酸（Indole-3-aceticacid，IAA）。 NAA和IAA激素母液配制方法为：使用电子天平称取100mg激素原装粉末，使用95%酒精预溶，在100ml 容量瓶中加入超纯水定容，盖上盖子后上下摇晃15次以上，配制成1mg/ml的激素母液放置于100ml避 光玻璃容器中备用。 5.2.3初代培养基的配制 初代培养基配方为MS培养基。用1mol/L氢氧化钠调节PH值为6.5.分装至240ml组培瓶中。配制方 法按照LY/T1882的4.2.1培养基配制的相关标准执行。 5.2.4继代培养基的配制 继代培养基配方为MS+0.3mg/LNAA+0.05mg/LIAA。用氢氧化钠调节PH值为6.5，分装至240ml 组培瓶中。配制方法按照LY/T1882的4.2.1培养基配制的相关标准执行。 5.2.5生根培养基的配制 生根培养基配方为MS+0.3mg/LNAA+0.05mg/LIAA。用1mol/L氢氧化钠调节PH值为6.5.分