SN-T 1222-2012 禽伤寒和鸡白痢检疫技术规范

书书书　中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜１２２２—２０１２代替ＳＮ／Ｔ１２２２—２００３禽伤寒和鸡白痢检疫技术规范犙狌犪狉犪狀狋犻狀犲狆狉狅狋狅犮狅犾犳狅狉犳狅狑犾狋狔狆犺狅犻犱犪狀犱狆狌犾犾狅狉狌犿犱犻狊犲犪狊犲２０１２０５０７发布２０１２１１１６实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.书书书中华人民共和国出入境检验检疫行　业　标　准禽伤寒和鸡白痢检疫技术规范ＳＮ／Ｔ１２２２—２０１２  中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲２号（１０００１３）北京市西城区三里河北街１６号（１０００４５）总编室：（０１０）６４２７５３２３网址ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷  开本８８０×１２３０１／１６　印张１　字数２５千字２０１２年１０月第一版　２０１２年１０月第一次印刷印数１—１６００  书号：１５５０６６·２  ２４０１４　定价１８．００元 rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.书书书前　　言　　本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。本标准代替ＳＮ／Ｔ１２２２—２００３《鸡白痢抗体检测方法　全血平板凝集试验》。本标准与ＳＮ／Ｔ１２２２—２００３相比，主要技术变化如下： — — —增加了病原分离与鉴定和血清平板凝集试验。 — — —修改了“全血平板凝集试验 ”的试剂部分，将阳性血清细分为强阳性和弱阳性血清； — — —修改了“全血平板凝集试验 ”的结果判定。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国广东出入境检验检疫局。本标准主要起草人：刘中勇、许如苏、马保华、陈茹、鱼海琼、陈冠武、林彩华、朱道中。本标准所代替标准的历次版本发布情况为： — — —ＳＮ／Ｔ１２２２—２００３。 Ⅰ犛犖／犜１２２２—２０１２ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.禽伤寒和鸡白痢检疫技术规范１　范围本标准规定了禽伤寒和鸡白痢的病原分离与鉴定、全血平板凝集试验和血清平板凝集试验的技术要求。本标准适用于鸡禽伤寒和鸡白痢的检疫。２　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。ＧＢ／Ｔ６６８２　分析实验室用水规格和试验方法ＧＢ１９４８９　实验室　生物安全通用要求ＳＮ／Ｔ２１２３　出入境动物检疫实验样品采集、运输和保存规范３　缩略语下列缩略语适用于本文件。ＢＰＷ　ｂｕｆｆｅｒｅｄｐｅｐｔｏｎｅｗａｔｅｒ：缓冲蛋白胨水ＢＳ　ｂｉｓｍｕｔｈｓｕｌｆｉｔｅａｇａｒ：亚硫酸铋琼脂ＨＥ　ｈｅｋｔｏｅｎｅｎｔｅｒｉｃａｇａｒ：ＨＥ琼脂ＳＣ　ｓｅｌｅｎｉｔｅｃｙｓｔｅｉｎｅｂｒｏｔｈ：亚硒酸盐胱氨酸增菌液ＴＳＩ　ｔｒｐｌｅｓｕｇａｒｉｒｏｎａｇａｒ：三糖铁琼脂ＴＴＢ　ｔｅｔｒａｔｈｉｏｎａｔｅ／ｂｒｉｌｌｉａｎｔｇｒｅｅｎｂｒｏｔｈ：四硫磺酸钠煌绿增菌液ＸＬＤ　ｘｙｌｏｓｅｌｙｓｉｎｅｄｅｏｘｙｃｈｏｌａｔｅａｇａｒ：木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂４　生物安全措施样品采集、样品处理及检验过程所涉及的实验操作和防护要求应符合ＧＢ１９４８９的规定。５　病原分离与鉴定５．１　试剂与材料５．１．１　培养基５．１．１．１　非选择性增菌液：ＢＰＷ。５．１．１．２　选择性增菌液：ＳＣ，ＴＴＢ。５．１．１．３　选择性琼脂平板：ＢＳ，ＸＬＤ，ＨＥ，沙门氏菌显色培养基。５．１．１．４　生化鉴定培养基：ＴＳＩ，赖氨酸脱羧酶培养基、鸟氨酸脱羧酶培养基、尿素酶培养基、半固体培１犛犖／犜１２２２—２０１２ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.养基、糖发酵管、生化鉴定试剂盒或试剂条。５．１．１．５　培养基的配制：培养基配制方法见附录Ａ。５．１．２　蒸馏水配制培养基的蒸馏水应符合ＧＢ／Ｔ６６８２三级水的要求。５．１．３　革兰氏染色液购买市售商品或自行配制。配制方法见附录Ｂ。５．１．４　沙门氏菌诊断血清Ａ  Ｆ多价Ｏ血清，Ｏ９因子血清，Ｏ１２因子血清，Ｈ  ａ因子血清，Ｈ  ｄ因子血清，Ｈ ｇ．ｍ因子血清和Ｈ ｇ．ｐ因子血清。５．２　设备５．２．１　二级生物安全柜。５．２．２　生化培养箱。５．２．３　均质器。５．２．４　电子天平（感量０．１ｇ）。５．２．５　显微镜。５．２．６　全自动微生物鉴定系统。５．３　样品采集无菌采集病、死鸡的肝、脾、卵巢和输卵管等组织样品。如无病鸡或死鸡，可采集活鸡新鲜粪便或泄殖腔拭子。种鸡还可采集新鲜蛋，雏鸡还可采集孵化过程中出现的死胚。样品采集方法及保存条件应符合ＳＮ／Ｔ２１２３的规定。５．４　病原分离５．４．１　组织样品或死胚将组织样品或死胚直接划线接种ＸＬＤ和ＢＳ或ＨＥ或沙门氏菌显色培养基平板，３６℃±１℃ 培养２４ｈ，挑取可疑菌落进行鉴定。同时，将剩余组织样品或死胚制成１∶１０匀浆，各取１０ｍＬ同时接种９０ｍＬＢＰＷ、９０ｍＬＳＣ和９０ｍＬＴＴＢ，将ＢＰＷ和ＳＣ接种物置３６ ℃±１ ℃ 培养，ＴＴＢ接种物置４２℃±１℃ 培养，取培养２４ｈ的接种物分别划线接种ＸＬＤ和ＢＳ或ＨＥ或显色培养基平板，３６℃± １℃培养２４ｈ，挑取可疑菌落进行鉴定。如无可疑菌落，取培养４８ｈ的上述接种物再划线分离一次。无可疑菌落者，判为病原分离阴性。５．４．２　新鲜粪便或泄殖腔拭子将新鲜粪便或泄殖腔拭子同时接种９０ｍＬＳＣ和９０ｍＬＴＴＢ增菌液，分别置３６ ℃±１ ℃ 和４２℃±１℃ 培养。取２４ｈ培养的接种物分别划线接种ＸＬＤ和ＢＳ或ＨＥ或显色培养基平板，３６℃± １℃培养２４ｈ，挑取可疑菌落进行鉴定。如无可疑菌落，取培养４８ｈ的上述接种物再划线分离一次。无可疑菌落者，判为病原分离阴性。２犛犖／犜１２２２—２０１２ rHgCb@g · ykbûR60u5[PO 0SÑU.５．４．３　蛋内容物无菌采取新鲜鸡蛋的内容物２５ｇ，加入２２５ｍＬＢＰＷ搅拌匀浆，３６℃±１℃ 培养，取培养２４ｈ的接种物分别划线接种ＸＬＤ和ＢＳ或ＨＥ或显色培养基平板，３６℃±１℃ 培养２４ｈ，挑取可疑菌落进行鉴定。如无可疑菌落，用培养４８ｈ的上述接种物再划线分离一次。无可疑菌落者，判为病原分离阴性。５．５　病原鉴定５．５．１　菌落特征菌落特征见表１。表１　沙门氏菌属在不同选择性琼脂平板上的菌落特征琼脂平板沙门氏菌菌落特征ＸＬＤ　菌落呈粉红色，带或不带黑色中心，有些菌株可呈现大的带光泽的黑色中心，或呈现全部黑色的菌落；有些菌株为黄色菌落，带或不带黑色中心。ＢＳ　菌落呈黑色有金属光泽、棕褐色或灰色，菌落周围培养基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰绿色的菌落，周围培养基不变。ＨＥ　呈蓝绿色或蓝色，多数菌落中心黑色或几乎全黑色；有些菌株为黄色，中心黑色或几乎全黑色。显色培养基　按照显色培养基的说明进行判定。５．５．２　形态与染色特性从ＸＬＤ、ＢＳ或ＨＥ或显色培养基平板上挑取典型或可疑菌落涂片，革兰氏染色镜检。沙门氏菌为革兰氏染色阴性杆菌。５．５．３　生化鉴定从ＸＬＤ、ＢＳ或ＨＥ或显色培养基平板上挑取典型或可疑菌落，分别接种ＴＳＩ、赖氨酸脱羧酶培养基或尿素酶培养基。３６℃±１℃ 培养２４ｈ，观察结果。沙门氏菌在ＴＳＩ和赖氨酸脱羧酶培养基或尿素酶培养基内的反应分别见表２和表３。表２　沙门氏菌属在犜犛犐和赖氨酸脱羧酶培养基内的反应结果ＴＳＩ斜面底层产气硫化氢赖氨酸脱羧酶培养基初步判断ＫＡ＋（－）＋（－）＋可疑沙门氏菌属ＫＡ＋（－）＋（－）－可疑沙门氏菌属ＡＡ＋（－）＋（－）＋可疑沙门氏菌属ＡＡ＋／－＋／－－非沙门氏菌ＫＫ＋／－＋／－＋／－非沙门氏菌　　注：Ｋ：