SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T1737.6---2010 除草剂残留量检测方法 第6部分：液相色谱一质谱/质谱法测定 食品中杀草强残留量 Determination of herbicide residues-- Part 6:Determinatiamn nf amitrole residues in food byHPLC-MS/MSmethod 2010-12-01实施 2010-05-27发布 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 数码防伪 SN/T 1737.6-2010 前 SN/T1737《除草剂残留量检验方法》分为入部分： 第1部分：气相色谱串联质谱法测定粮谷及油籽中酰胺类除草剂残留量； 第2部分：气相色谱/质谱法测定粮谷及油籽中二苯醚类除草剂残留量； -第3部分：液相色谱-质谱/质谱法测定食品中环已隔类除草剂残留量； 第4部分：气相色谱-质谱/质谱法测定进出口食品中芳氧苯氧丙酸酯类； 第5部分：液相色谱-质谱/质谱法测定进出口食品中硫代氨基甲酸酯类除草剂残留量； -第6部分：液相色谱-质谱/质谱法测定食品中杀草强残留量。 本部分为SN/T1737的第6部分， 本部分按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、底大食品集团有限公司。 本部分主要起草人：李立、高洪良、付建、任海涛、娄喜山、王杰。 I SN/T 1737.6-2010 除草剂残留量检测方法 第6部分：液相色谱-质谱/质谱法测定 食品中杀草强残留量 范围 1 SN/T1737的本部分规定了食品中杀草虽残留量的液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS)测定方法。 本部分适用于苹果、菠萝、菠菜、胡萝卜、紫苏叶、金银花、姜粉、花椒粉、茶叶、小麦、玉米、花生、肉、 鱼及动物肝脏中杀草强残留量的检测和确证。 规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注目期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格租试验方法 3方法提要 样品经提取后.用PCX固相萃取柱或FNVICarb固相萃取柱净化，液相色谱-质谱/质谱法测定， 外标法定量。 试剂和材料 除另有规定外，试剂均为色谱纯，水应符合GI3/T6682的要求。 4.1 冰乙酸。 4.2 氨水。 4.3 二氯甲烷。 4.4 乙腈。 4.5 甲醇。 4.6 丙酮。 4.7 1%乙酸溶液：吸取10mL冰乙酸，用超纯水定容至1L。 4.8 25%丙酮-水溶液：量取250mL丙酮，用超纯水定容至1L。 4.9 1%乙酸-丙酮水溶液：吸取10mlL冰乙酸，用丙隔水溶液（3.6)定容至1L。 4.10 5%氮化甲醇溶液：吸取5mlL氮水，周甲醇定容至100mL。 4.11 杀草强标准物质（Amitrole，C,ILN，，相对分-子质量：84.08，CAS编号：61-82-5)：纯度大于等于 99.9%. 4.12杀草强标准储备液：称取适景杀草费标准品（精确至0.1mg）于50mL容量瓶中，用乙腈配制成 1.0mg/mL的标准储备液：0℃~4℃保存。 1 SN/T 1737.6—2010 4. 13 杀草强标准工作液：根据需要用流动相将储备液稀释配制成适用浓度的标准工作液。0℃4℃ 保存。 4.14 PCX固相萃取柱：60mg/3ml.或者相当者（混合型阳离子交换小柱）。 4.15 ENVI-Carb固相萃取柱：500mg/6mL或者相当者（石墨化非多孔碳）。 4.16 滤膜：0.45μm。 5 仪器和设备 5.1 液相色谱-质谱/质谱联用仪：配备电喷雾离子源（ESI)。 5.2 旋涡混合器。 5.3 旋转蒸发仪。 5. 4 高速均质器。 5.5 离心机。 5. 6 振荡器。 5.7 粮谷粉碎机。 5.8 食品捣碎机。 5.9 花生粉碎机。 5. 10 离心管：100mL、50mL。 5. 11 容量瓶：100ml。 5.12 分析天平：感量0.1mg和0.01g 6 试样的制备与保存 6.1 试样制备 6.1. 1 小麦、玉米、金银花、茶叶 取有代表性样品约500g，用粉碎机全部粉碎并通过2.0mm圆孔筛。混匀，装人洁净的容器内，密 闭，标明标记。 6.1.2 水果、蔬菜、鱼、肉、肝脏 取有代表性样品约500g，将其可食用部分切碎后.用食品捣碎机将样品加工成浆状。混匀，装入洁 净的容器内，密闭，标明标记。 6..1.3 姜粉、花椒粉 取有代表性样品约100g，充分混合均勾·过2.0mm圆孔筛，装入洁净容器内，密闭，标明标记。 6.1.4花生 取有代表性样品500g，用磨碎机全部磨碎。混匀，装人洁净的容器内，密闭，标明标记。 6.2试样保存 小麦、玉米、花生、茶叶、姜粉、花椒粉试样于0℃~4℃保存；鱼、肉、肝脏及水果和蔬菜类试样于 一18℃以下冷冻保存。在抽样及制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化 2 SN/T 1737.6--2010 7测定步粟 7.1提取 7.1.1苹果、藏萝、菠菜、胡萝卜、紫苏叶 20000z/min均质1min，于5000r/mir离心5mn，上清波转入100ml.容量瓶中，弃去下层二氯甲烷 层，残渣用1%的乙酸溶液20mL和二氮甲烷20ml.重复提取-次；合并上清液，用1%的乙酸溶液定 至刻度，移取10mL提取液待净化。 7.1.2金银花、姜粉、花椒粉、茶叶 称取1g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加20mL1%乙酸水溶液，20000r/min均质 1min，5000r/min离心5min，上清液过滤至125ml，分液漏斗中，残渣再用10mL1%乙酸水溶液重复 提取-一次，合并上清液，加人10ml。二氯甲烷，振荡1min，静置分层，奔去下层二氯甲烷层。待净化。 7. 1. 3 玉米、花生 称取2g试样（精确至0.01g）于50ml离心管中，加20mL1%乙酸-丙删水溶液，20000r/min均 质1min，5000r/min离心5min，上清液过滤至125mL分液漏斗中，残渣再用10mL1%乙酸-丙酮水 待净化。 7.1.4小麦、鱼、肉、肝脏 酮水溶液，20000z/min均质1min，5000r/min离心5min，提取液过滤至125mL分液漏斗中，残渣用 25%10mL丙酮水溶液重复提取一次，合并L清液，加人10ml.二氯甲烷.振荡1min，静置分层，弃去 下层二氯甲烷层。提取液中加人0.25mL冰乙酸酸化，待净化。 7.2净化 7.2.1 苹果、菠萝、菠菜、胡萝卜、紫苏叶、玉米、花生、小麦、鱼、肉、猪肝 依次用3mL甲醇和5ml水预淋洗PCX小柱，弃大流出液。注入提取液，再分别用3mL水、3mL 甲淋洗，弃去流出液。用2m1.5%氨化甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，40℃旋转浓缩至近干，残留物用 1.0mlL流动相溶解，过0.2um滤膜，供液相色谱质谱/质谱测定。 金银花、姜粉、花椒粉、茶叶 7.2.2 依次用3mL甲醇、3ml.水预淋洗EnviCarh，奔夫流出液，注人提取液，收集流出液。依次用3mL 甲醇、5mL水预淋洗PCX小柱，弃去流山液。将Havi-Carb净化后的样液转至PCX净化柱，再分别用 3ml水、3mL甲醇淋洗，用2mL.5%氨化甲醇落液洗脱。收集洗脱液，于40℃旋转浓缩至近干，残留物 用1.0mL流动相溶解，过0.2μm滤膜，供液相负谱-质谱/质谱测定。 测定 7.3.1 液相色谱-质谱/质谱条件 色谱柱：CAPCELLPAK(1：4)2.00mm(内径）X100mm5μm或相当者； a) 3 SN/T1737.6-2010 b) 流动相：10mmol乙酸胺.0.1%甲水pll3（A） 乙睛(B)，见表1； 表1 流动相条件 条件 梓品名称 流速/（mL/min） A/% B/ % 条件1 鱼、肉、姜、花椒、肝睡、茶叶 0, 20 20 80 苹果、菠萝、菠菜、胡萝卜、紫苏叶、 条件2 0,20 50 50 金银花、小麦、玉米、花生 柱温；40℃； c) d) 流速：0.2mL/min e) 进样量：10μL； f) 质谱条件：参见附录A中的第A.1章 7.3.2 液相色谱-质谱/质谱检测 根据样液中被测物含量，选定浓度相近的标准工作溶液，对标准工作溶液与样液等体积参插进样测 定，标准工作溶液和待测样液中杀草强的响应值均应在仪器检测的线性范围内。 7.3.3确证 如果样液与标准工作溶液的质最色谱困中，在相同保留时间有色谱峰出现，允许偏差小于 士2.5%，所选择离子的丰度比与标准品对应离子的丰度比，其值在允许范围内（允许范围见 表2）。则可判断样品中存在相应的被测物。 存7.3.1条件下，杀草强标准物的液相色谱-质谱谱 图参见附录B。 表2 使用定性液相色谱-质谱附相对离子丰度最大允许偏差 相对离子丰度/% >50 >20~50 >10~20 允许的相对偏差/% ±30 ± 50 25 7.4 空白试验 除不加样品外，均按上述步骤进行， 8结果计算与表述 用色谱数据处理机或按式(1)计算样品中杀草强残留量。 AXcXV (1 ) 4,Xm 式中： X---试样中杀草强残留量，单位为豪克每于克（mg/kg）； 样品溶液中杀草强的峰面积： 杀草强标定工作液的浓度.单位为微克每毫升（ug/L)； V 样品溶液最终定容体积.单位为毫升（mL) SN/T 1737.6--2010 A-杀草强标准工作溶液的峰南积； m--—最终样液代表的试样质量