SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T·2552.2-2010 乳及乳制品卫生微生物学检验方法 第2部分：检验样品的制备与稀释 Microbiological examination method for milk and milk products hygiene- Part 2:Preparation of test samples,initial suspensions and decimal dilutions (ISO8261:2001,Milk andmilkproducts—General guidancefor thepreparation of test samples,initial suspensionsand decimal dilutions formicrobiologicalexamination,MOD) 2010-05-27发布 2010-12-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2552.2—2010 前言 SN/T2552《乳及乳制品卫生微生物学检验方法》分为十三个部分： 第1部分：取样指南； 第2部分：检验样品的制备与稀释； 第3部分：酵母、霉菌菌落计数； 第4部分：嗜冷菌微生物菌落计数； 第5部分：沙门氏菌检验； 第6部分：柠檬酸杆菌检验； 第7部分：阴沟肠杆菌检验； 第8部分：普通变形杆菌和奇异变形杆菌检验； 第9部分：克雷伯氏菌检验； 第10部分：阪崎肠杆菌检验 免疫荧光法； 第11部分：蜡样芽孢杆菌的分离与计数； 第12部分：单核细胞增生李斯特氏菌检测与计数； 第13部分：假单孢菌属的分离与计数。 本部分是SN/T2552的第2部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分与ISO8261:2001《Milkandmilkproducts-—Generalguidanceforthepreparationoftest samples，initialsuspensionsanddecimaldilutionsformicrobiologicalexamination》的-一致程度为修改 采用，主要差异如下： 按照GB/T1.1标准要求和汉语习惯对一些编排格式进行了修改； 将一些适用于国际标准的表述改为适用于我国标准的表述； 一删减了原文条款4原理。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分由中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山西出人境检验检疫局、中华人民共和国江苏 出人境检验检疫局、中华人民共和国山东出人境检验检疫局、中华人民共和国内蒙古出入境检验检疫 局、中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国上海出入境检验检疫局、中华人民共和国 深圳出人境检验检疫局、中华人民共和国广西出入境检验检疫局、中华人民共和国吉林出入境检验检疫 局、中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中华人民共和国福建出人境检验检疫局负责起草 本部分主要起草人：赵贵明、李卫华、刘振、祝长青、雷质文、王海艳、高旗利、李晓虹、吕敬章、罗兆飞、 许龙岩、黄晓蓉。 1 SN/T2552.2—2010 乳及乳制品卫生微生物学检验方法 第2部分：检验样品的制备与稀释 1范围 SN/T2552的本部分规定了乳及乳制品用于微生物检验的样品制备与稀释方法。 本部分适用于乳及乳制品用于微生物检验的样品制备与稀释。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB4789.2食品安全国家标准食品卫生微生物学检验菌落总数测定 SN/T2552.1乳及乳制品卫生微生物学检验方法第1部分：取样指南 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 实验室样品 laboratorysamples 送至实验室进行检测或检验的样品。 3.2 乳milk 从哺乳动物中挤出的正常乳房分泌物，无添加物且未从其中提取任何成分。 3.3 乳制品milkproduct 以乳为原料，利用全部或部分成分加工而成的液体，半固体或固体产品。 3.4 初始悬浮液（首次稀释液） 待检样品在称量或定量后与9倍体积稀释液混合而成的悬浮液、溶液或洗脱液。如果有大颗粒，可 进行搅拌。在某些情况下，如果1：9悬浮液太粘稠，可加大稀释液体积；如果需要比1：9更浓的首次 稀释液才能获得试验结果，则适当减少稀释液体积，但对测试结果的描述时则应考虑到这些因素。如果 每克样品中细菌数少于10个则使用第一个稀释液；在细菌含量更低的情况下，可考虑适当减少稀释液 的体积。 4设备和材料 4.1干热灭菌与湿热灭菌装置。 4.2均质器。 4.3机械搅拌装置。 SN/T2552.2—2010 4.4 三角瓶或玻璃瓶。 4.5试管（三角瓶或玻璃瓶）。 4.6吸管：容量1mL，吸头1.75mm~3.0mm。 4.7刻度吸管：10mL或20mL带有棉塞或配备机械吹吸装置的大容量刻度吸管。 4.8玻璃珠：直径约6mm。 4.9pH计：温度补偿型，精确度至士0.2pH单位。 4.10 天平：感量0.1g。 4.11 水浴锅：可设定30℃士1℃，37℃±1℃以及45℃±1℃等温度。 4.12 玻璃棒。 4. 13 加热板。 5稀释剂 5.1基础材料 配制稀释液时，一般采用分析级试剂，使用蒸馏水、去离子水或同等质量的水，以适当摩尔浓度的氢 氧化钠或盐酸溶液调节培养基的pH，尽可能使培养基体积和其中组分浓度保持不变。通常培养基的 体积越小，调节pH试剂的浓度越高。 5.2通用稀释液 5.2.1 蛋白陈盐溶液：见附录A第A.1章。 5.2.21 1/4Ringer氏溶液：见附录A第A，2章。 5.2.3 蛋白陈溶液：见附录A第A.3章。 5.2.4 磷酸缓冲液：见附录A第A.4章。 5.3 专用稀释液（用于样品初始原液的制备） 5.3.1 缓冲蛋白陈水：见附录A第A.5章。 5.3.2 柠檬酸钠溶液：见附录A第A.6章。 5.3.3 磷酸氢二钾溶液：见附录A第A.7章。 5.3.4 含消泡剂的磷酸氢二钾溶液：见附录A第A.8章。 5.3.5 三聚磷酸钠溶液：见附录A第A.9章。 5.3.6 含α-淀粉酶溶液的通用稀释液：见附录A第A.10章。 5.4稀释液分装、灭菌和储存 5.4.1分装 将初始悬浮液制备用稀释液（5.2和5.3)分装到三角瓶或试剂瓶中；将十倍梯度稀释的稀释液分装 到试管、三角瓶或试剂瓶中。必要时将稀释液预热至45℃时再分装。 灭菌后的三角瓶或试剂瓶中的稀释液应为90mL、225mL，试管中应为9.0mL或其他规定体积的 稀释液。分装后试管、三角瓶或试剂瓶应加盖封口。体积误差应控制在土2%以内。 5.4.2灭菌 于121℃温度下高压湿热灭菌15min，大体积的样品可延长灭菌时间。 2 SN/T2552.2—2010 5.4.3储存 若稀释液不立即使用，宜将其存放在温度为0℃～5℃的暗处，但时间不宜超过1个月。 6取样 取样按照SN/T2552.1。实验室收到的样品应保证具有代表性，并在运输及储藏过程中无损坏。 7操作步骤 7.1总则 整个操作过程中，测试样品、初始悬浮液和十倍梯度稀释液温度不应超过20℃温度。对某种特定 的细菌检验（如：沙门氏菌等），需要专用技术或预防措施。7.2与7.3的操作不得在阳光直射的地方进 行。操作过程中应当采取常规无菌预防措施。 7.2测试样与初始悬浮液制备 7.2.1概要 对经过了热或酸处理的产品，样品初始悬液要在室温20℃～25℃下放置45min，再进行稀释和接 种，以使受损微生物在初始悬液中得到恢复后，在选择性培养基上获得最大回收，为避免温度突然改变 对微生物造成损伤，除特殊说明外，下列操作过程温度应与测试样的温度接近。 7.2.2乳与液态乳制品 上下快速翻转容器25次，使微生物在样品中均匀分散，同时应避免产生气泡。混合与取样时间间 隔不超过3min。用无菌吸管吸取1mL测试样，加人9mL稀释液（或10mL测试样，加入到90mL稀 释液中，25mL加人到225mL稀释液中）。振摇样品稀释液（如手摇，幅度为300mm，7s之内振摇 25次，或者采用机械搅拌装置，搅拌5s~10s，制备成10-1样品稀释液）。 制备高稀释度的样液按照7.3所述步骤操作。 7.2.3干乳、干甜乳清、干酸乳清、干酪乳和乳糖 反复振摇和翻转容器，充分混匀密闭容器内容物。若测试样品是未开封的状态，容器太满而不能充 分混匀时，将样品转到更大的容器进行混匀。用抹刀取一定量测试样品，进行以下操作。并立即将样品 容器封严。 将含有90mL或225mL稀释液的试剂瓶放置45℃水浴中预热。 称取10g或25g测试样品装人一适当玻璃容器内（也可称取测试样品直接加人到含有稀释液的试 剂瓶中），然后将样品粉末加人到含有合适稀释液的稀释瓶中。对于干酸乳清，采用pH8.4士0.2的磷 酸氢二钾溶液。必要时，滚筒干燥的奶粉采用pH7.5士0.2的稀释液（柠檬酸钠或磷酸氢二钾溶液）。 为了更好地复原，可使用玻璃珠，但应在灭菌前就加入到试剂瓶中。 溶解测试样品时，慢慢涡旋将粉末浸湿，振摇试剂瓶25次，幅度约300mm，时间7s。可以选动 式均质器处理。 试剂瓶放回水浴5min，间歌振摇一次。 按照7.3制备高稀释度样液。 3 SN/T2552.2—2010 7.2.4奶酪和加工奶酪 称取10g或25g测试样品置于一无菌容器内（或者直接称样放入均质器内），然后将其转至旋转式 均质器或蠕动式均质器内，加90mL（若样品为25g则加人