SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T2552.4---2010 乳及乳制品卫生微生物学检验方法 第4部分：嗜冷微生物菌落计数 Microbiological examination pf milk and milk products hygiene- Part 4:Colony-count methpa of psychrotrophic microorganisms (ISO 6730.2005/IDF101,Milk--Enumcration of colony forming units of psychrotrophic microorganisms Colony-count technique at 6. 5 C ; ISO85522004/IDF132,Milk-:-Estimationofpsychrotrophic microorganisms---Colony-count technique at 21 ℃,MOD) 2010-05-27发布 2010-12-01实施 中华人民北和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 数码防伪 SN/T 2552.4--2010 前 育 SN/T2552《乳及乳制晶卫生微生物学检验方法》分为十三个部分： 第1部分：取样指南： 第2部分：检验样品的制备与稀释； 第3部分：酵母、露菌菌落计数； 第4部分：嘴冷微生物菌落计数； -第5部分：沙门氏菌检验； -第6部分：柠檬酸杆菌检验； 第7部分：阴沟肠杆菌检验； -第8部分：普通变形杆菌和奇异变形机菌检验方法； 第9部分：克雷伯氏菌检验 第10部分：阪崎肠杆菌检验 免疫荧光方法， -第11部分：蜡样芽孢杆菌的分离与计数； 第12部分：单核组胞增生李斯特氏菌检测与计数； 第13部分：假单孢菌属的分离与计数， 本部分是SN/T2552的第4部分。 本部分按照GB/T1.1---2009给出的期则违草 本部分第--法修改采用IS06730：2005/n)101《期。嗜冷微生物菌落计数6.5℃菌落计数技术》 (Milk--Enumeration of colony forming units of psychrotrophic microorganisms--Colony-count techniqueat6.5℃），第二法修改采用IS08552:2004/IDF132《乳嗜冷微生物的评估21℃菌落计 数技术（快速法）》（Milk--Estimation ofpsyrbiotrophicmicroorganisms--Colony-counttechniqueat 21℃），主要差异如下。 按照GB/T1.1标准要求和语习惯对-些编排格式进行了修改； -将一些国际标准的表达方式改为活用了我国标准的表达方式； 对前言进行了修改， 规范性引用文件引用了采用国际标准的本系列标准，而非国际标准； 为使实际操作更符合我国的习惯和要求，将5.2.4刻度吸管不采用容积要求11mL土0.2ml。 将5.2.6菌落计数设备修改为可选用设备； 为简化培养基的配制，将第一法和第““法所用的培养基统一为第二法所用培养基，即平板计数 牛奶琼脂（见附录A）： -8.5.7为避免菌落蔓延。应采取的预防措施仪推荐采取“在凝固后，覆盖一层培养基”的方法， 而不同时推荐采用“在培养Ⅲ盖内的滤纸上滴加一滴甘油”的方法； 统--“重复性”的要求，将第二法中的“重复性”修改为参见第-一法的“重复性”。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提山并归口。 本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国山东出人境检验检疫局、中华人民共 和国江苏出人境检验检疫局。 本部分主要起草人：姜英辉、雷质文、赵贵明、房保海、赵丽青、贾俊涛、祝素珍、李正义、唐静、 马维兴、张健、刘云国、祝长青。 I 建筑321---标准查询下载网 www. jz321. net SN/T 2552.4---2010 乳及乳制品卫生微生物学检验方法 第4部分：赌冷微生物菌落计数 1范围 SN/T2552的本部分规定了6.5℃条件下嗜冷微生物的菌落计数方法、21℃条件下对嗜冷微生物 数量进行评估的菌落计数快速方法。 本部分适用于原料乳、巴氏消毒乳及其他经热处理乳中的嗜冷微生物菌落计数，其他乳及乳制品可 参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注目期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。 SN/T2552.1乳及乳制品卫生微生物学检验方法第1部分：取样指南 第2部分：检验样品的制备与稀释 SN/T2552.2乳及乳制品卫生微生物学检验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3. 1 曙冷微生物 psychrotrophic microorgamisns 在本部分规定的6.5℃的条件下培养10d，形成可计数菌落的细菌、酵母菌和霉菌。 4原理 采用平板牛奶计数琼脂和规定数量的样品，制备倾注平板。对测试样品进行十倍梯度稀释，在相同 的条件下，制备其他稀释度的平板。平板在有氧条件下，6.5℃培养10d,21℃培养25h。为获得满意 的结果，选择合适的稀释水平，以从琼脂平板1获得的菌落数和稀释水平来计算每毫升样品中菌落形成 单位（CFU)。 本部分包括第-法6.5℃菌落计数法和第：法21℃菌落计数法（快速法）。第二法所描述的快速 法是一种近似的方法，这是因为在21C的培养条件下，除了嗜冷菌以外还其他菌能够生长。然而，大量 的研究结果表明，第二法和第-法所得结果具有良好的相关性。第-一法满足对嗜冷菌计数的更准确要求。 5设备和材料 5.1总则 5.1.1 按照SN/T2552.2的要求，对所有接触检测样品、稀释剂、稀释样品匀液或培养基的器具进行 灭菌。 1 SN/T 2552.4---2010 5.1.2 2如果有合适的规范，可用次性器具替代重复利用的玻璃器具。可重复利用的玻璃器具需能 够经受得住重复灭菌，并且为化学惰性 5.1.3 常规微生物实验室用于制备检测样晶和稀释样品匀液的设备和器具见SN/T2552.2的规定。 5.2 特殊要求 5.2.1 干热灭菌设备（烘箱）和混热灭菌设备（高压灭菌锅）， 5.2.2 培养箱：可操作温度为6.5℃=0.5%.21%+1℃。 5.2.3 平Ⅲ：玻璃或塑料制品，直径90mm~100mm。 5.2.4 刻度吸管：1mL±0.02ml、10ml...0.2ml. 5.2.5 水浴锅：可操作温度为45℃二1、另-个水浴锅可将水煮沸。 5.2.6 菌落计数设备（可选用）：由-个带黑暗背景的发光基座、装有放大倍数至少×2的放大镜和 个机械或电子数字计数器组成。 5.2.7 pH计：精确到±0.1pH单位 试管：20ml。 5.2.8 5.2.9 三角瓶或培养瓶：500mL，具有合适的暴子 培养基和试剂 6.1 稀释剂 见SN/T2552.2。 6.2 平板计数牛奶琼脂 见附录A。 7 取样 实验室所接收到的样品应具有代表性：并在运偷和储藏过程中不得破坏或改变。 有关取样方法见SN/T2552.1 第一法 发6.5菌落计数法 程序 8.1 概述 为了提高方法的精密度，稀释样品勾液的制备应严格按照标准进行。 影响精密度的因索有： 混合设备的类型； -混合时间； 稀释剂； 大微粒沉淀所需的时间； 制备十倍样品匀液的混合时间， 注：操作时防止污染，8.2和8.3中所描述的操作应避免在阳光直射下进行。 2 建筑321---标准查询下载网 www. jz321.net SN/T 2552.4---2010 8.2检测样品和初始悬液的制备 见SN/T2552.2 8.3十倍梯度样品匀液的制备 见SN/T2552.2 样品稀释于99mL稀释液中。应用的样品和稀释量越大。方法的准确性和精密度就越高。 8.4操作的持续时间 从开始制备初始匀液到样品匀液与培养基源匀所用时间不应超过15min。 8.5 接种和培养 8.5.1取两个无菌平Ⅲ，用无菌刻度吸管吸取1m.检测样品至每个平Ⅲ中。 8.5.2再取两个无菌平Ⅲ，用另--个无菌刻度吸管吸取1mL10样品勾液至每个平Ⅲ中。 8.5.3必要时，用更高稀释度的样品匀液重复以上操作。 8.5.4检测培养基温度以确保不超过46℃。培养基温度大于46℃，可能会破坏或杀死样品中的嗜冷 微生物菌群。为防止可能会产生的危害。也可使用涂布平板方法和采用更低的培养温度。向每个平Ⅲ 倾注12mL～15mL平板计数牛奶琼脂。如果15mL不能够使微生物均匀分布，可使用20mL平板计 数牛奶琼脂， 8.5.5 5旋转平板，小心混勾样品勾液和培养基。间将平板放在凉的水平面上使混合物凝固。 8.5.6 制备足够数量的对照平板，以检测灭菌状况。 8.5.7将平板倒置后放人6。5℃的培养箱中，培养10d。 为避免菌落蔓延，应在凝固后的培养基上再覆盖层培养基。 8.5.8 平Ⅲ叠放不能超过6个，平Ⅲ之间、平与培养箱的壁及顶部不能相互接触。 8.6菌落计数 可选用菌落计数设备计数每个平板上的菌落。在柔和光线下检查平板。重要的是针尖样菌落 8.6.1 应计数在内，但应注意避免将培养基中的未溶解颗粒或沉淀物质误判为菌落。仔细检查可疑目标物，必 要时使用更高倍数放大镜区别菌落和其他物质， 8。6.2蔓延菌落应视为单个菌落。如果蔓雍牛长菌落的面积小于整个平板的四分之一，计数其余未受 影响部分的菌落，以此代表整个平板的菌落数。如果平板上超过四分之一的面积被蔓延菌落覆盖，则放 奔对该平板的计数。 结果计算 9.1 选