SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4003—2013 食品接触材料 高分子材料 ．食品模拟物 中 2,4,6-三氨基-1,3,5-三嗪（三聚氰胺） 的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Food contact materialsPolymersDetermination of 2,4,6-triamino- 1,3,5-triazine(melamine)infood simulantsLiquidchromatography tandem mass spectrometry method 2013-11-06发布 2014-06-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 刮涂层壹真伪 SN/T4003—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准负责起草单位：中华人民共和国福建出入境检验检疫局 本标准主要起草人：井伟、唐熙、李小晶、陈长虹、陈曼实、梁鸣、吕水源、姜晓黎、曾树金。 SN/T4003—2013 食品接触材料高分子材料食品模拟物 中2，4，6-三氨基-1，3,5-三嗪（三聚氰胺） 的测定液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了食品模拟物中三聚氰胺的液相色谱-质谱/质谱测定方法。 本标准适用于水、3%（质量分 数）乙酸、4%（体积分数）乙酸、10% 体积分数)乙醇溶液和橄榄油五 种模拟物中三聚氰胺含量的检测利 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必 不可少的。 是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其 最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T5009.156食品用包装 装材料及其制品的浸泡试验方法通则 GB/T6682分析实验室用水 规格和试验方法 GB9690食品容器、包装材料用三聚氰胺-甲醛成型品卫生标准 GB/T23296.1-2009食品接触材料 塑料中 受限物质 塑料中物质向食品及食品模拟物特定 适移试验方法和含量测定以及食品 爆露条 #选择的指南 3方法提要 水基型食品模拟物水、3%（质量分 数）乙酸 本积分数乙酸和10%（体积分数）乙醇直接用液 相色谱-质谱/质谱测定，橄榄油模拟物 丙醇水溶液萃取后用液相色谱-质谱/质谱测定，外标法 定量。 4试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯。水为GB/T6682规定的一级水。 4.1冰乙酸。 4.2无水乙醇。 4.3异丙醇。 4.4橄榄油。 4.5 异辛烷。 4.6 乙酸铵。 4.7 三聚氰胺标准品：（CAS号108-78-1)，含量≥99.0%。 4.83%（质量浓度）乙酸溶液：称取30g（精确至0.01g）冰乙酸（4.1)，用水定容至1L。 4.94%（体积分数）乙酸溶液：量取40mL冰乙酸（4.1)，用水定容至1L。 4.1010%（体积分数）乙醇溶液：量取100mL无水乙醇（4.2)，用水定容至1L。 1 SN/T4003—2013 4.1110%（体积分数）异丙醇溶液：量取10mL异丙醇（4.3），用水定容至100mL。 4.12三聚氰胺标准储备溶液：准确称取适量三聚氰胺标准品（4.7)（精确至0.1mg），用水溶解稀释，配 制成浓度为1000mg/L的标准储备溶液。 4.13水基型食品模拟物配制的三聚氰胺标准溶液（10.mg/L）；吸取适量三聚氰胺标准储备液（4.12）， 用水稀释定容，配制成浓度为10mg/L的标准溶液。采用同样方式，分别用3%（质量分数）乙酸溶液 （4.8），4%（体积分数）乙酸溶液（4.9）和10%（体积分数）乙醇溶液（4.10）配制同样浓度的三聚氰胺标准 溶液。 4.1410%（体积分数)异丙醇溶液配制的三聚氰胺标准溶液（10mg/L)：吸取适量三聚氰胺标准储备 液（4.12），用10%（体积分数）异丙醇溶液（4.11）稀释定容，配制成浓度为10mg/L的三聚氰胺标准 溶液。 4.150.01mol/L乙酸铵缓冲液：称取0.77g乙酸铵（4.6）（精确至1mg），用980mL水溶解后，用冰 乙酸（4.1)调节pH值至4.00，定容至1L。 5仪器和设备 5.1 高效液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 5.2分析天平：感量0.01g、1mg和0.1mg。 5.3超声恒温水浴：功率500W。 5.4高 离心机：转速不低于3000r/min。 5.5P pH计：测量精度士0.02。 5.6 滤膜：有机相，0.2μm。 6分析步骤 6.1 标准工作溶液的制备 6.1.1水基型标准工作溶液的制备 分别准确量取0.0mL、0.05mL、0.10mL、0.15mL、0.2mL三聚氰胺标准溶液（4.13）于5个 10mL容量瓶中，用水定容，混合均匀，得到水中三聚氰胺浓度分别为0.00μg/L、50μg/L、100μg/L、 150μg/L、200μg/L。采用同样方式，分别用3%（质量分数）乙酸溶液（4.9），4%（体积分数）乙酸（4.10） 和10%（体积分数）乙醇溶液（4.11)配制同样浓度的三聚氰胺标准工作溶液。 6.1.2橄榄油标准工作溶液的制备 分别准备称取5g（精确至1mg)精制橄榄油于5个具塞玻璃比色管中。分别准确移取适量的浓度 0.10mg/kg、0.15mg/kg、0.20mg/kg。往每个比色管中加人5mL异辛烷（4.5）混匀，用移液管准确加 人5.0mL10%（体积分数）异丙醇溶液（4.11)，在70℃恒温水浴中超声萃取30min，离心。吸取下层水 溶液，通过0.2μm尼龙滤膜（5.6)过滤后供液相色谱-质谱/质谱分析。 6.2食品模拟物试液的制备 6.2.1总则 食品模拟物试液按照GB9690和GB/T5009.156或GB/T23296.1一2009的要求从迁移实验中获 2 SN/T4003—2013 得，避光保存在4℃冰箱中。 6.2.2 水基食品模拟物 从迁移试验中得到的水基食品模拟物，通过0.2μm尼龙有机滤膜过滤后供液相色谱-质谱/质谱 分析。 6.2.3 3橄榄油 准确称取迁移试验中得到橄榄油模拟物5g（精确至1mg）置于具塞玻璃比色管中，加入5mL异 辛烷（4.5）混匀，用移液管准确加人5.0mL10%（体积分数）异丙醇溶液（4.11)，在70℃恒温水浴中超 声萃取30min，离心。吸取下层水溶液，用0.2μm尼龙有机滤膜过滤后供液相色谱-质谱/质谱分析。 6.3空白试验的制备 按照6.2的步骤处理未与食品接触材料接触的食品模拟物。 6.4 测定 液相色谱参考工作条件： 6.4.1 a） 色谱柱：强阳离子交换与板相C1混合填料，混合比例（1：4），150mm×2.1mm（内径）， 3.5μm或性能相当者； b) 柱温：35℃； c) 流动相：乙腈-0.01mol/L乙酸铵缓冲液； (P 流速：0.4mL/min； 梯度洗脱程度：梯度洗脱程序见表1。 e) 表1梯度洗脱程序 时间/min 乙腈/% 0.01mol/L乙酸铵缓冲液/% 0 15 85 5 15 85 10 90 10 f) 进样量：10μL。 6.4.2 质谱工作参考条件： 离子源：电喷雾离子源（ESI），采用正离子模式： b） 扫描方式：多反应监测（MRM）； c) 其他质谱参数参见附录A。 6.5 5标准工作曲线的绘制 按照6.4.1和6.4.2所列的测定条件，对标准工作溶液（6.1)进行检测。以待测物定量离子提取色谱 峰面积为纵坐标，待测物浓度为横坐标进行线性回归。按照式（(1)计算回归参数。 y=aXr+b ..(1) 式中： 食品模拟物标准工作溶液中三聚氰胺的峰面积； a - 回归曲线的斜率； 食品模拟物标准工作溶液中三聚氰胺的浓度，单位为毫克每升或毫克每千克（mg/L或mg/kg)； b 回归曲线的截距。 3 SN/T4003—2013 6.6 5样液测定 按照6.4.1和6.4.2所列的测定条件对处理好的食品模拟物试液（6.2)进行测定。如果样品中的质 相对丰度与质量浓度相当标准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表2的规定，则可判断样品中 存在目标化合物。 表2定性离子相对丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 >50% >20%~50% >10%~20% %01> 允许的相对偏差 ±20% ±25% ±30% ±50% 样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内，若超出线性范围，则应用相应食品模拟 液稀释到线性范围所包含的浓度。同时对空白试液（6.3)进行检测。标准工作溶液色谱图参见附录B。 7结果计算 7.1食品模拟物试液中三聚氰胺浓度的计算 按照式（2)计算食品模拟物试液中三聚氰胺的含量。 (A-A.)-6 c = ·(2) a 式中： c 食品模拟物试液中三聚氰胺的浓度，单位为毫克每升或毫克每千克（mg/L或mg/kg）； A 食品模拟物试液中三聚氰胺的峰面积； A。 空白试液中三聚氰胺的峰面积； 6 回归曲线的截距； a - 回归曲线的斜率。 7.2三聚氰胺特定迁移量的转化计算 由7.2得到的食品模拟物中三聚氰胺的浓度，根据迁移试验中所使用的食品模拟物的体积和测试 试样与食品模拟物接触面积，按照GB9690和GB/T5009.156或GB/T23296.1—2009规定，通过数学 换算计算出三聚氰胺的特定迁移量，单位以“mg/kg或mg/dm²”表示。计算结果以平行测定值的算术 平均值表示，结果保留3位有效数字。 8方法的测定低限 水、3%（质量分数）乙酸、4%（体积分数）乙酸、10%（体积分数）乙醇溶液四种水基型模拟物中三聚 氰酸胺测定低限为5