ICS 65.020.20 CCS B 62 41 河南省 地方标准 DB41/T 602—2025 代替 DB41/T 602—2009 蝴蝶兰组织培养技术规程 2025 - 08 - 08发布 2025 - 11 - 07实施 河南省市场监督管理局 发布 DB41/T 602 —2025 I 目次 前言 ................................ ................................ ................. II 1 范围 ................................ ................................ ............... 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ ..... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ......... 1 4 设施设备 ................................ ................................ ........... 1 5 组培技术 ................................ ................................ ........... 2 6 炼苗移栽 ................................ ................................ ........... 3 7 档案管理 ................................ ................................ ........... 4 附录A（规范性） 不同培养阶段培养基配方 ................................ ............... 5 附录B（资料性） 培养物异常表现及处理 ................................ ................. 6 DB41/T 602 —2025 II 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件代替 DB41/T 602 —2009《蝴蝶兰组织培养技术规程》 ，与DB41/T 602 —2009相比，除结构调 整和编辑性改动外，主要技术变化如下： a) 增加了“术语和定义 ”一章（见第3章）； b) 增加了“蝴蝶兰”的定义（见 3.1）； c) 更改了“接种设备 ”（见4.1.2.4，2009年版的3.1.2.4）； d) 更改了“基本培养基 ”（见5.1.1，2009年版的4.2.1）； e) 将“母液配制 ”更改为“植物生长调节剂母液配制 ”，并将2009年版的有关内容更改后纳入 （见5.1.2，2009年版的4.2.2）； f) 更改了“培养基分装”（见5.1.4，2009年版的4.2.3.2）； g) 更改了“培养条件 ”（见5.2，2009年版的4.7）； h) 更改了“外植体选择与处理 ”（见5.3，2009年版的4.3.1）； i) 删除了“种胚培养选择与处理 ”（见2009年版的4.3.2）； j) 增加了“花梗腋芽诱导 ”（见5.4）； k) 增加了“丛生芽增殖中母苗的处理 ”（见5.5）； l) 更改了“丛生芽增殖培养基及培养方式 ”（见5.5，2009年版的4.5）； m) 增加了“继代增强培养 ”（见5.6）； n) 更改了“生根培养基 ”（见5.7，2009年版的4.6）； o) 更改了“温室消毒 ”（见6.1，2009年版的5.1）； p) 增加了“移栽标准 ”（见6.2）； q) 更改了“炼苗方式 ”（见6.2，2009年版的5.2）； r) 更改了“移栽时的环境控制 ”（见6.3.1，2009年版的5.4.1）； s) 更改了“移栽要求 ”（见6.3.2，2009年版的5.3.1）； t) 增加了“档案管理 ”一章（见第7章）； u) 更改了“ 附录A”（见附录A，2009年版的附录A)； v) 删除了“ 附录B”（见2009年版的附录B）； w) 更改了“ 附录C”（见附录 B，2009年版的附录C）。 本文件由河南省林业局提出并归口。 本文件起草单位：郑州市农业科技研究院、济源市农业科学院、郑州市丰盈园艺有限公司。 本文件主要起草人：杨录军、王梅、王俊、冯建、尹国红、 蒋拴丽、李铭、杨书才、张果、王世尧、 赵玉安、王瑞华、邵慧宇、陈丽、牛小沛、刘星明、张月玲。 本文件于 2009年首次发布 ，本次为第一次修订 。 DB41/T 602 —2025 1 蝴蝶兰组织培养技术规程 1 范围 本文件规定了蝴蝶兰 组织培养技术术语和定义、 设施设备、 组培技术、 炼苗移栽和档案管理等内容。 本文件适用于蝴蝶兰组织培养。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 603 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T 8321.10 农药合理使用准则 (十) GB/T 28683 蝴蝶兰栽培技术规程 GB/T 28684 蝴蝶兰种苗质量等级 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 蝴蝶兰 蝴蝶兰(Phalaenopsis )，兰科附生草本。根肉质，发达，从茎的基部或下部的节上发出，长而扁。 茎短，具少数近基生的叶。叶质地厚，扁平，椭圆形、长圆状披针形至倒卵状披针形，通常较宽，基部 多少收狭，具关节和抱茎的鞘，花时宿存或花期在旱季时凋落。花序侧生于茎的基部，直立或斜出，分 枝或不分枝，具少数至多数花 。 4 设施设备 4.1 组培设施与设备 4.1.1 组培设施 洗涤室、灭菌室、培养基配制室、无菌接种室、培养室和炼苗移栽室等 。 4.1.2 仪器设备 4.1.2.1 洗剂室 主要有水槽、塑 料框、干燥箱、 晾瓶架等。 4.1.2.2 灭菌室 主要有高压蒸 汽灭菌锅、器械 消毒器、烘干箱等。 DB41/T 602 —2025 2 4.1.2.3 培养基配制室 主要有电子天平、量筒、移液管、烧 杯、容量瓶、酸度计、冰箱、实验台等 。 4.1.2.4 无菌接种室 主要有超净工作台、消毒器、 手术刀、镊子、剪刀等。 4.1.2.5 培养室 主要有培养架、控温控湿 控光设备等。 4.2 炼苗移栽设施 4.2.1 温室要求 能调节温度、湿度和光照等环境条件。 4.2.2 温室设施 主要有加温系统、 保温系统、 降温系统、遮阳系统、 内循环系统、 通风系统、 灌溉设备和栽培床等。 5 组培技术 5.1 培养基配制 5.1.1 基本培养基 MS干粉培养基2.5 g/L+多种维生素 及微量元素合成药剂 1.5 g/L+肌醇0.125 g/L。 5.1.2 植物生长调节剂母液配制 分别称取1 g6-苄胺基腺嘌呤（ 6-BA）和萘乙酸（ NAA），用1 mol/L氢氧化钠（ NaOH）溶液20 mL溶 解，加蒸馏水定容至 1 L，储存于棕色试剂瓶，置于 4 ℃冰箱保存备用。试剂配制按照 GB/T 603的规定执 行。 5.1.3 配制 各阶段培养基的配制按附录 A执行。 5.1.4 分装 用去离子水 （电导率（ EC）≤0.3 mS/cm）将培养基定容至所需体积，搅拌均匀，用 1 mol/L NaOH溶 液或1 mol/L盐酸（HCl）溶液调节 pH到5.2～5.8，分装至培养容器，封口 。 5.1.5 灭菌 将分装好的培 养基放入高压灭菌锅内灭菌（灭菌时灭菌锅内压力为 0.11 Mpa，温度为 121 ℃，压力 温度达到指标后灭菌 20 min）。无菌水、接种工具（手术刀、镊子、垫纸等）均用此法灭菌。灭菌后的 培养基和无菌水从制备好到 使用间隔时间不超过 20 d。 5.2 培养条件 光照强度 2 500 lx～3 000 lx，光照时间 12 h/d，温度25 ℃±2 ℃。 DB41/T 602 —2025 3 5.3 外植体选择与处理 选取生长健 壮的花梗，切取带有腋芽的节段，腋芽上下各留 2 cm，用75%乙醇喷湿 ，装入适宜的容 器中，移 至超净工作台上，用 75%乙醇浸泡1 min，然后用有效氯浓度为 0.5%的次氯酸钠（ NaClO）溶液 浸泡20 min～25 min，在此期间，轻微摇晃灭菌容器 8～10次。除去腋芽苞 片，再用有效氯浓度为 0.5% 的NaClO溶液浸泡 1 min～2 m